Labirint.ru - ваш проводник по лабиринту книг
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -ГлавнаяОб АльманахеРецензентыАрхив телеконференций- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Сборники АльманахаДругие сборникиНаучные труды- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Образец оформленияИнформационное письмоО проведении телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Материалы I телеконференцииМатериалы II телеконференцииМатериалы III телеконференцииМатериалы IV телеконференцииМатериалы V телеконференцииМатериалы VI телеконференцииМатериалы VII телеконференцииМатериалы VIII телеконференцииМатериалы IX телеконференцииМатериалы Х телеконференцииМатериалы XI телеконференцииМатериалы XII телеконференцииМатериалы XIII телеконференцииУчастники XIII телеконференцииМатериалы XIV телеконференцииУчастники XIV телеконференцииЮбилейная XV Телеконференция Октябрь 2014Участники Юбилейной XV Телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Конференция СМПиЧ-2015Участники СМПиЧ-2015- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -КонтактыФорум
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Поиск по сайту

Последние статьи

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ ВЛИЯНИЕ ВИРУСНОИ ИНФЕКЦИИ КЛЕЩЕВЫМ ЭНЦЕФАЛИТОМ НА ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ БОЛЕЗНИ РОЛЬ ГЕНА GSTM1 В ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ КЛЕТОК КРОВИ и ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ГРАНУЛОЦИТАРНОМ АНАПЛАЗМОЗЕ ЧЕЛОВЕКА ГЕНЕТИЧЕСКИИ ПОЛИМОРФИЗМ И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ Т- ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ АРТРИТОМ, АССОЦИИРОВАННЫМ В КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ КЛИНИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИКСОДОВОГО ВЕСЕННЕ-ЛЕТНЕГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫИ СТАТУС И АДАПТИВНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗМА ПЕРВОКЛАССНИКОВ ШКОЛ г. НЕФТЕЮГАНСКА ТЮМЕНСКОИ ОБЛАСТИ Материалы трудов участников 14-ой международной выездной конференции русскоязычных ученых в Китае (Sanya, Haynan Island) "Современный мир, природа и человек", том 8, №3. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И АПОПТОТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ В ПРОЦЕССЕ СТИМУЛЯЦИИ АНТИГЕНОМ БОРРЕЛИИ THE ANALYSIS OF SOME INDICES OF IMMUNERESPONSE, DNA REPAIR, AND MICRONUCLEI CONTENT IN CELLS FROM TICK-BORNE ENCEPHALITIS PATIENTS КОМПЬЮТЕРНЫИ СПЕКТРАЛЬНЫИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИИ АНАЛИЗ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ И ГРАНУЛОЦИТАРНЫМ ЭРЛИХИОЗОМ ЧЕЛОВЕКА

Полезная информация

 
 

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ (РНК).

Печать E-mail
21.12.2010 г.

СГМУ, г.Томск

Эта работа опубликована в сборнике "НАУКИ О ЧЕЛОВЕКЕ" – Сборник статей молодых ученых и специалистов / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск. - СГМУ. – 2003. – 268 с.

Скачать сборник целиком

За последние десятилетия изучение носителей генетической информации: ДНК и РНК значительно расширило область знаний исследователей интересующихся данной проблемой. К числу особо важных для молекулярно-биотехнологических методов, а также методов очень чувствительных для диагностики различных инфекционных заболеваний, относится полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот метод обладает высокой чувствительностью, высокой специфичностью и позволяет установить присутствие нескольких единичных молекул ДНК или РНК микроорганизма в анализируемом биологическом образце. В качестве матрицы для ПЦР используют высокоочищенную ДНК и РНК. В связи с этим первоочередной задачей исследователя применяющего ПЦР, является выбор метода для выделения ДНК и РНК, который позволит получить максимальное количество высокоочищенного продукта. Особенно осторожно следует подходить к выбору метода выделения РНК, поскольку РНК по сравнению с ДНК более лабильна и чувствительна к действию нуклеаз, кроме того РНК-азы менее чувствительны к действию денатурирующих веществ используемых в наборах.

Целью настоящей работы явилось проведение сравнительного анализа выделения РНК различными методами.
Материалом исследования служила периферическая кровь (с 5%ЭДТА и без ЭДТА). Для проведения сравнительного анализа эффективности выделения РНК использовались наборы: «Рибозоль» (ЦНИИ эпидемиологии г. Москва), TRIZOL™ (GibcoBRL, Life Technologies), набор для выделения РНК на сорбенте (Медиген, г Новосибирск), также для выделения РНК применяли сорбционный метод с использованием диатомового сорбента и метод щелочного лизиса с 0.1%
SDS.

После выделения РНК проводили качественный (электрофорез а агарозном геле) и количественный анализ полученных результатов. Концентрацию нуклеиновых кислот измеряли на спектрофотометре СФ-56, при 260, 280, 320 нм. На основе полученных данных проводили расчет концентрации РНК в анализируемых образцах, исходя из того, что одна единица оптической плотности примерно соответствует 40мкг/мл одноцепочечной ДНК или РНК. Для оценки чистоты образцов использовали отношение между оптической плотностью при 260 и 280 нм. Для чистых препаратов оно должно быть равно 1,8-2.
 
Результаты, полученные в ходе работы, представлены в таблице.
 
Метод Забор крови СРНК нг/мкл 260/280
TRIZOL™ С ЭДТА 32±1.2 1,9
Без ЭДТА 24.1±4.7 2,25
Щелочной лизис С ЭДТА 39±7.1 2,9
Без ЭДТА 13±2 2,4
«Рибозоль» С ЭДТА 380±64.4 2,2
Без ЭДТА 190±18.7 2,3
Диатомовый сорбент С ЭДТА 47.6±18.3 1,2
Без ЭДТА 51±7.6 1,3
«Медиген» С ЭДТА 76±9.3 2,1
Без ЭДТА 83.2±15.5 1,9

В результате проделанной работы установлено, что набор для выделения РНК


«Рибозоль», позволяет получить максимальное количество РНК. Набор, основанный на сорбции РНК на диатомовом сорбенте, показал низкий выход и низкую чистоту конечного продукта, что неприемлемо для успешного проведения ПЦР. Наиболее адекватным набором для проведения РТ-ПЦР, по показателям количества и чистоты, является тризоловый метод TRIZOL™ (GibcoBRL, Life Technologies).

 

Литература:


1. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Под редакцией С. Херрингтона и Дж. Макги. - Мир., 1999. - 535с.


2. Chang S., Puryear J., Cairney J. (1993) A Simple and Efficient Method for Isolating RNA from Pine Trees. Plant Molecular Biology Reporter 11: 113-116.

3. MUD-DNA Extraction Protocol. Departament of Biological Sciences University of South Carolina Columbia.

 

Добавить комментарий

Правила! Запрещается ругаться матом, оскорблять участников/авторов, спамить, давать рекламу.



Защитный код
Обновить

« Пред.   След. »
 
 
Альманах Научных Открытий. Все права защищены.
Copyright (c) 2008-2022.
Копирование материалов возможно только при наличии активной ссылки на наш сайт.

Warning: require_once(/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php) [function.require-once]: failed to open stream: Нет такого файла или каталога in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99

Fatal error: require_once() [function.require]: Failed opening required '/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php' (include_path='.:/usr/local/zend-5.2/share/pear') in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99