Институт экологии человека СО РАН (ИЭЧ СО РАН), *Кемеровский Государственный Университет
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 2), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Одним из ведущих источников загрязнения окружающей среды Кузбасса являются промышленные предприятия, производственные отходы которых значительно ухудшают экологическую ситуацию в регионе. В настоящее время остро стоит проблема оценки опасности загрязнителей среды для генетического аппарата человека, которые могут воздействовать как на соматические, так и на половые клетки, создавая угрозу, как для современных, так и последующих поколений.
Другим важным аспектом проблемы воздействия производственной среды на геном человека является потенциальная возможность влияния токсических факторов на функциональную активность отдельных генов. Большой риск вызывает возможность модификации активности жизненно важных генов, контролирующих, например, биосинтез белка в клетке. К ним относится большая группа генов - гены рДНК. В результате их функциональной активности формируется такая структура ядра, как ядрышко.
В нормальных условиях размеры и структура ядрышек в большинстве случаев адекватны интенсивности клеточного белкового синтеза. В условиях патологии высокая функциональная активность клетки часто сопровождается изменением объема, а иногда и количества ядрышек. Поэтому представляет большой интерес изучение структуры и функционального состояния ядрышка у рабочих, контактирующих с комплексом производственных мутагенов.
Целью настоящего исследования являлось изучение количественных характеристик ядрышек у рабочих Салаирского горно-обогатительного комбината (СГОК). Производственная среда Салаирского горно-обогатительного комбината характеризуется наличием угольной пыли, кремний – содержащих аэрозолей, цианистого натрия. Для подсчета количества ядрышек периферической крови осуществляли подготовку препаратов с использованием стандартного полумикрометода культивирования лимфоцитов (Hungerford P., 1964). Изучение ядрышек проводили на препаратах хромосом, окрашенных раствором азотнокислого серебра по методу Howell W. и Black D. (1980). На препаратах, приготовленных от каждого обследованного, было проанализировано по 100 ядер лимфоцитов. Показатель «среднее количество ядрышек в ядрах лимфоцитов» для каждого обследуемого определяли как арифметическое среднее. Рассчитывали частоту встречаемости клеток с 1-6 ядрышками в процентах на 100 клеток. Размеры аргентофильных зон ядра оценивали следующим образом. Для каждого донора фотографировали по 30 ядер лимфоцитов с хорошей Ag-окраской. Цифровые изображения анализировали с помощью ППП «Adobe Photoshop 7.0». Оценивали площадь ядра и окрашенной серебром зоны в пикселях. Площадь ядрышка выражали в процентах от площади ядра и подсчитывали среднее для 30 измеренных клеток значение (Амосова А.В. и др., 1986). Результаты исследования обрабатывали с помощью ППП «STATISTIKA for Windows 6.0».
Было получено свыше 2000 цифровых фотографий аргентофильных зон ядер лимфоцитов. Анализ размеров аргентофильных зон ядер лимфоцитов позволил установить, что в группе рабочих на долю ядрышка приходится 15,47% от общей площади ядра, тогда как в контроле 19,90% (табл.1).
Это указывает на существование значимых отличий в функциональной активности генов рДНК. Причиной наблюдаемого снижения транскрипционной активности рибосомных генов может служить комплексное токсическое воздействие производственной среды на геном рабочих, приводящее к снижению экспрессии генов. Последствиями такого явления могут стать нарушения клеточного метаболизма, способные приводить к стойким нарушениям здоровья.
На следующем этапе исследования анализировали количество ядрышек на ядро лимфоцита в обследованных группах. У рабочих Салаирского горно-обогатительного комбината среднее число ядрышек на ядро лимфоцита несколько больше и составило 1.77, тогда как в группе контроля – 1.47. Однако проверка показала отсутствие достоверности наблюдаемых отличий. Возможно, это связано с малым объемом выборки и значительной межиндивидуальной вариабельностью.
У каждого обследованного донора встречались клетки с разным числом ядрышек. Частота встречаемости этих клеток варьировала. У рабочих Салаирского горно-обогатительного комбината чаще всего встречались клетки с одним, реже всего клетки с четырьмя ядрышками. Клетки с большим числом ядрышек не были зафиксированы. Тогда как в группе контроля чаще всего встречались клетки с одним и двумя ядрышками. Реже - с тремя ядрышками. Клетки с большим числом ядрышек не встречались.
В группе рабочих СГОК с частотой 24% встречались клетки с четырьмя ядрышками в ядре, тогда как в контрольной группе таких клеток не было. В опытной группе частота встречаемости трёхядрышковых клеток составляет 40,5%, тогда как в контроле - 24%, т.е. несмотря на отсутствие достоверных отличий между опытной и контрольной группами по среднему числу ядрышек в ядре, было выявлены отличия в частоте встречаемости отдельных типов клеток.
Таким образом, в результате проведенной работы впервые было зафиксировано уменьшение транскрипционной активности генов рДНК у рабочих промышленного предприятия. Подобная модификация в функционировании генома не может не вызывать опасения. Снижение белок-синтезирующей активности в клетках иммунной системы способно провоцировать развитие стойких нарушений здоровья.