Labirint.ru - ваш проводник по лабиринту книг
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -ГлавнаяОб АльманахеРецензентыАрхив телеконференций- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Сборники АльманахаДругие сборникиНаучные труды- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Образец оформленияИнформационное письмоО проведении телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Материалы I телеконференцииМатериалы II телеконференцииМатериалы III телеконференцииМатериалы IV телеконференцииМатериалы V телеконференцииМатериалы VI телеконференцииМатериалы VII телеконференцииМатериалы VIII телеконференцииМатериалы IX телеконференцииМатериалы Х телеконференцииМатериалы XI телеконференцииМатериалы XII телеконференцииМатериалы XIII телеконференцииУчастники XIII телеконференцииМатериалы XIV телеконференцииУчастники XIV телеконференцииЮбилейная XV Телеконференция Октябрь 2014Участники Юбилейной XV Телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Конференция СМПиЧ-2015Участники СМПиЧ-2015- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -КонтактыФорум
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Поиск по сайту

Последние статьи

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ ВЛИЯНИЕ ВИРУСНОИ ИНФЕКЦИИ КЛЕЩЕВЫМ ЭНЦЕФАЛИТОМ НА ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ БОЛЕЗНИ РОЛЬ ГЕНА GSTM1 В ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ КЛЕТОК КРОВИ и ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ГРАНУЛОЦИТАРНОМ АНАПЛАЗМОЗЕ ЧЕЛОВЕКА ГЕНЕТИЧЕСКИИ ПОЛИМОРФИЗМ И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ Т- ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ АРТРИТОМ, АССОЦИИРОВАННЫМ В КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ КЛИНИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИКСОДОВОГО ВЕСЕННЕ-ЛЕТНЕГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫИ СТАТУС И АДАПТИВНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗМА ПЕРВОКЛАССНИКОВ ШКОЛ г. НЕФТЕЮГАНСКА ТЮМЕНСКОИ ОБЛАСТИ Материалы трудов участников 14-ой международной выездной конференции русскоязычных ученых в Китае (Sanya, Haynan Island) "Современный мир, природа и человек", том 8, №3. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И АПОПТОТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ В ПРОЦЕССЕ СТИМУЛЯЦИИ АНТИГЕНОМ БОРРЕЛИИ THE ANALYSIS OF SOME INDICES OF IMMUNERESPONSE, DNA REPAIR, AND MICRONUCLEI CONTENT IN CELLS FROM TICK-BORNE ENCEPHALITIS PATIENTS КОМПЬЮТЕРНЫИ СПЕКТРАЛЬНЫИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИИ АНАЛИЗ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ И ГРАНУЛОЦИТАРНЫМ ЭРЛИХИОЗОМ ЧЕЛОВЕКА

Полезная информация

 
 

АПОПТОЗМОДУЛИРУЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ БЕЛКА ТЕПЛОВОГО ШОКА 90 КДА В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ

Печать E-mail
Автор Кайгородова Е.В., Белкина М.В., Марошкина А.Н., Черкасова Е.А., Клименченко М.А.   
17.02.2011 г.
ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России» (г. Томск)
НОЦ молекулярной медицины, кафедра фундаментальных основ клинической медицины, кафедра патофизиологии

Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Проблемы и перспективы современной науки" с материалами Четвертой Международной Телеконференции "Фундаментальные науки и практика" - Том 3 - №1. - Томск - 2011.

 


В настоящее время актуальным направлением медицины является исследование модуляции апоптоза как важного патогенетического звена многочисленных заболеваний. Согласно современным представлениям, формирование злокачественных опухолей также имеет в своей основе нарушение программированной гибели клетки [1, 2]. Реализация танатогенной программы зависит от наличия или активации многочисленных факторов и процессов, модулирующих программированную клеточную гибель. К ним можно отнести как постоянно существующие в клетке белки, такие как семейство Bcl-2 и IAP, так и индуцируемые стрессом молекулы, к числу которых относятся белки теплового шока (Heat shock proteins - Hsp) [3]. В последнее время именно белкам теплового шока отводят существенную роль в дизрегуляции апоптоза опухолевых клеток, в которых данные белки экспрессируются в изобилии. Было показано, что оверэкспрессия Hsp90 коррелирует с плохим прогнозом острой миелоидной лейкемии и миелоидными дисплазийными синдромами [2, 4]. Наряду с этим остаётся нерешённым вопрос о молекулярных механизмах участия вышеуказанного шаперона в дизрегуляции апоптоза опухолевых клеток. В связи с этим, целью работы явилась оценка роли белка теплового шока 90 в апоптозе опухолевых клеток линии Jurkat.

Материал и методы.
Материалом для исследования служили опухолевые клетки линии Jurkat (Т-лимфобластный лейкоз человека), полученные из банка клеточных культур НИИ цитологии РАН (г. Санкт-Петербург). Клетки культивировали в чашках Петри  при 37*С и 5% СО2 в питательной среде, содержащей 90% RPMI-1640, L-глутамин (0,3 мкг/мл), гентамицин (100 мкг/мл) и 10% эмбриональной телячьей сыворотки («Gibco», США), инактивированной при 560С в течение 30 мин. Клетки поддерживали в логарифмической фазе роста постоянным пересевом культуры каждые 2-3-е суток; жизнеспособность клеток оценивали с помощью трипанового синего.
В качестве индуктора апоптоза опухолевых клеток применяли rTNFα человека («Abcam», Великобритания) в концентрации 1, 5, 10 и 30 нг/мл. Для выявления роли белка теплового шока 90 (Hsp90) в регуляции программированной гибели клеток в культуру добавляли селективный ингибитор Hsp90 17-AAG («Sigma Aldrich», США) в концентрации 5 мкМ/мл и инкубировали в течение 18 ч при температуре 37º С и 5% СО2 в присутствии rTNFα и без него.
Оценку реализации апоптоза проводили методом флуоресцентной микроскопии на микроскопе Axiostar plus («Carl Zeiss», Германия) с использованием FITC-меченного аннексина V и пропидий иодида («Catlag», США) согласно инструкции фирмы-производителя.
Изменения трансмембранного потенциала митохондрий определяли методом проточной цитофлуориметрии с помощью набора «MitoScreen» («BD Pharmigen», США).
Активность каспазы-8 и -3 определяли с помощью спектрофотометрического метода согласно инструкции фирмы-производителя («Abcam», Великобритания).
Полученные данные обрабатывали методами статистического анализа с помощью программы SPSS 13,0. Проверку нормальности распределения количественных показателей проводили с использованием критерия Шапиро-Вилка. Достоверность различий оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (для выборок, подчиняющихся ненормальному закону распределения) и двухвыборочного критерия Стьюдента (для выборок, подчиняющихся нормальному закону распределения) . Данные представлены в виде медианы (Ме), верхнего и нижнего квартилей (Q1-Q3). Статистически значимыми различия считались при р<0,05.
 
Результаты
При добавлении в культуральную среду rTNFα и ингибитора 17-AAG отмечалось наиболее значимое увеличение числа апоптотически измененных клеток линии Jurkat по сравнению с интактной культурой (р<0,01) (рис.1). Было установлено, что ингибитор Hsp90 повышает активность каспазы 8 в опухолевых клетках линии Jurkat относительно аналогичного показателя в интактной культуре  до (1,00 (0,98 - 1,30) усл.ед.,  и 0,53(0,46 - 0,58) усл.ед., соответственно). При этом эффект 17-AAG на данную каспазу не отличался от эффекта r-TNFα (0,85 (0,76 - 0,94) усл.ед.). Нами высказано предположение, что Hsp90 регулирует  рецепторный путь реализации апоптоза не только через RIP, Akt, NF-κB [10], но и напрямую, ингибируя превращение прокаспазы 8 в активную форму. Оценка активности каспазы 3 в опухолевых клетках линии Jurkat показала, что при ингибировании Hsp90 активность каспазы-3 увеличивается в 5 раз (р=0,04)  по сравнению с интактной культурой.
Оценка содержания клеток с деполяризованной митохондриальной мембраной в культурах линии Jurkat при добавлении ингибитора 17-AAG и совместного его действия с r-TNFα показала увеличение данного параметра  в 1,7 раза по сравнению с интактными клетками  (p=0,02). Полученные результаты свидетельствуют о влиянии Hsp90 на целостность мембраны митохондрий.
Таким образом, белок теплового шока 90 играет антиапоптотическую роль в клетках линии Jurkar. Угнетение активности данного белка приводит к активации каспазы-8 и -3 , снижению трансмембранного потенциала митохондрий и, как следствие, запуску  апоптотической программы опухолевых клеток. 17-AAG потенцирует rTNFα -индуцированный апоптоз. Применение селективного ингибитора 17-AAG в качестве индуктора апоптоза опухолевых клеток открывает новые возможности в существующих подходах к лекарственному лечению злокачественных новообразований.
Работа выполнена в рамках Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 – 2013 годы (ГК № П1203; ГК 02.740.11.0311), поддержана грантами Carl Zeiss и Совета по грантам при Президенте РФ (МК-480.2011.7).

Image
 
Рис.1 Количество апоптотически изменных опухолевых клеток при различных условиях культивирования
Примечание: 1 – интактные клетки; 2 – клетки, инкубированные с rTNFα (30 нг/мл); 3 – клетки, инкубированные с 17-AAG (5мкМ);
4 – клетки, инкубированные rTNFα (30 нг/мл) и 17-AAG (5мкМ) 

Список литературы
1.    Кайгородова Е.В., Рязанцева Н. В., Новицкий В. В., Белкина М. В., Марошкина А. Н. Роль белка теплового шока 90 в регуляции апоптоза опухолевых клеток // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2010.- Т.150. №10.- С.424-427.
2.    Duval A., Olaru D., Campos L., et al. Expression and prognostic significance of heat-shock proteins in myelodysplastic syndromes. Haematologica. 2006; 91(5):713-714.
3.    Zhao C., Wang E. Heat shock protein 90 suppresses tumor necrosis factor alpha induced apoptosis by preventing the cleavage of Bid in NIH3T3 fibroblasts. Cell Signal. 2004; 16 (3):313-321.
4.     Flandrin P, Guyotat D, Duval A, et al. Significance of heat-shock protein (HSP) 90 expression in acute myeloid leukemia cells. Cell Stress Chaperones. 2008;13(3):357-364.
Последнее обновление ( 12.04.2011 г. )
 

Добавить комментарий

Правила! Запрещается ругаться матом, оскорблять участников/авторов, спамить, давать рекламу.



Защитный код
Обновить

След. »
 
 
Альманах Научных Открытий. Все права защищены.
Copyright (c) 2008-2020.
Копирование материалов возможно только при наличии активной ссылки на наш сайт.

Warning: require_once(/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php) [function.require-once]: failed to open stream: Нет такого файла или каталога in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99

Fatal error: require_once() [function.require]: Failed opening required '/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php' (include_path='.:/usr/local/zend-5.2/share/pear') in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99