Кубанский государственный университет, Краснодар
Исследование физиологии и биохимии высших базидиальных грибов, к которым относят грибы из порядков афиллофоровых, агариковых, гастеромицетов, значительно расширились в последние десятилетия и стали носить более планомерный характер. Этому способствовало успешное культивирование грибов на питательных средах и их способность синтезировать многообразные биологически активные соединения. Около 2000 видов базидиальных грибов из 30 родов считаются съедобными, из них только 20 видов выращивают в коммерческих целях, но всего 5-6 видов культивируют в промышленных масштабах, причем основными являются Agaricus bisporus, Lentinus eddoes, Pleurotus ostreatus. Ассортимент используемых грибов для промышленного культивирования грибов расширяется с каждым годом. Все больше внимания уделяется таким видам грибов как Flammulina velutipes, Panus tigrinus, Volvariella volvaceae, Ganoderma japonicum.
Имеющиеся в настоящее время многочисленные данные о способности высших базидиомицетов синтезировать широкий спектр ценных биологически активных веществ (БАВ) свидетельствуют о важности и перспективности проведения дальнейших поисковых исследований в рамках этой группы грибов [1; 2]. Одним из важнейших направлений в исследованиях высших грибов является изучение синтезируемых ими разнообразных – ферментов, антибиотиков, онкостатиков и многих других биологически активных соединений.
Два обстоятельства, по мнению многих исследователей, оправдывают поиск ферментов пищевого и медицинского назначения среди высших базидиомицетов: наличие среди них большого числа съедобных грибов и отсутствие спороношения в культуре (последнее уменьшает опасность профессиональных заболеваний в условиях производства). Это является серьезным преимуществом высших базидиомицетов.
Данные о содержании протеиназ и их ингибиторов в растениях, обнаруженные нами в литературных источниках, касаются, в основном, активности протеаз и их ингибиторов в представителях класса базидиомицетов.
В научном мире исследованы культуры базидиомицетов способных синтезировать молокосвертывающие ферменты и установлено, что виды Irpex lacteus и Fomitopsis pinicola - образуют протеазы, являющиеся хорошими заменителями химозина. Особое внимание обращает на себя роль протеолитических ферментов и их ингибиторов в процессе пищеварения у человека и животных. Ингибиторы протеиназ могут в существенной степени затруднять пищеварение белков. С другой стороны, находящиеся в растениях протеолитические ферменты стимулируют этот процесс. В связи с этим изучение содержания протеиназ и их ингибиторов в пищевых продуктах приобретает особое значение при разработке вопросов питания человека [3].
Базидиальные макромицеты синтезируют все четыре типа протеолитических ферментов. Степень изученности классов протеиназ различна. Наиболее детально исследованы аспартильные протеиназы базидиомицетов, в связи с высокой молокосвертывающей активностью некоторых культур. Свойства кислых протеиназ культуры Iprex lacteus особенно подробно изучены в связи с использованием их в сыроделии в Японии. Менее изучены металлопротеиназы, еще слабее тиоловые [3].
Сравнительный анализ структурно–функциональных особенностей протеиназ базидиомицетов и аналогичных протеиназ микромицетов и животных позволил отметить определенную степень близости их физико-химических свойств и субстратной специфичности.
Обращает на себя внимание, то, что отдельные таксоны различаются по степени образования протеолитических ферментов, определявшихся по казеину. Самые высокие значения протеолитической активности были получены в культуральных фильтратах из семейства Corioledaea. Для афиллофоровых грибов отмечают более высокую, чем для агариковых, активность молокосвертывающего фермента, также относящегося к группе протеаз. Порядок Aphyllophorales состоит в основном из дереворазрушающих грибов, в семейство Tyromycetoideae входит в основном представители бурой гнили. Культуры именно этих грибов проявили высокую протеолитическую активность: по желатину, казеину, молоку [4].
В порядке Agaricales, самом многочисленном и сложном, наиболее выражена протеолитическая активность у видов в семействах Pleurotaceae, Tricholomataceae, Entolomataceae, Agaricaceae, Coprinaceae, Bolbitaceae. В семействах Pleurotaceae, включающем только ксилотрофные виды, выраженный биосинтез протеиназ фибринолитического действия отмечен у видов из рода Panus и Pleorotus и практически не обнаружен у видов рода Lentinus.
Высокая степень очистки карбоксильной протеиназы из Pycnoporus coccineus позволила японским авторам детально изучить ее протеолитические свойства. Данные по сравнительной специфичности гидролиза в цепи инсулина протеиназой этого гриба и карбоксильными протеиназами из микроорганизмов свидетельствуют о наличии определенного сходства в характере атакуемых им связей [3, 4].
Таким образом, высокоочищенные кислые протеиназы из R. decolorans и Р. coccieneus позволили получить первые сравнительные данные о структурно-функциональных особенностях карбоксильных протеиназ базидиального и микробного происхождения и отметить определенную степень их близости. Из высшего базидиомицета Coprinus впервые была выделена тиолзависимая сериновая протеиназа. В результате очистки достигнута 32–кратная очистка и получен гомогенный фермент с выходом 55%, с молекулярной массой 30 кДа. Фермент наиболее стабилен в области рН 6 – 9. Протеиназа гидролизует азоказеин, азоальбумин, гемоглобин, фибрин, синтетические хромогенные пептидные субстраты. По ряду свойств, протеиназа близка тиолзависимым сериновым протеиназам, выделенным из ряда источников - бацилл, актиномицетов, микроскопических грибов. С помощью аффинной хроматографии в научном мире была выделена карбоксильная протеиназа базидиального гриба Russula decolorans с выходом 48% и очисткой в 186 раз. Молекулярный вес равен 35000 Да, рН- оптимум по расщеплению гемоглобина 2,2, изоэлектрическая точка 4,9. Фермент обладает ярко выраженной молокосвертывающей активностью и полностью инактивируется специфическими ингибиторами карбоксильных протеиназ микроскопических грибов [1, 3, 4].
В научном мире рассмотрены различные формы участия протеолитических ферментов в патогенезе и защите растений. Наряду с внеклеточными протеиназами, фитопатогенные микроорганизмы продуцируют специфические эффекторы, обладающие протеолитической активностью и способные действовать на белки внутри растительной клетки. В свою очередь, растения для защиты от патогенных микроорганизмов используют как внеклеточные, так и внутриклеточные протеиназы. Среди последних особая роль принадлежит вакуолярным процессирующим ферментам (легумаинам), которые выполняют функции каспаз в растительной клетке[9].
Таким образом, уровень знаний о протеолитических ферментах грибных организмов неравнозначен. Особое место среди мицелиальных грибов занимают базидиомицеты, которые сегодня по праву рассматриваются как перспективные продуценты белка кормового и пищевого достоинства.
Дефицит животного сырья и несовершенство микробных препаратов - стимулировали интерес к базидиальным грибам как возможным продуцентам тромболитических протеаз. Некоторые обстоятельства оправдывают поиск ферментов пищевого и медицинского назначения среди высших базидиомицетов, методов и инструментов их исследования [8,10].
Исследование специфичности протеиназ по отношению к синтетическим и природным субстратам у базидиомицетов различных таксономических и экологических групп закладывает научные основы понимания функциональной роли этих ферментов в жизнедеятельности базидиальных грибов, взаимосвязи грибных организмов с другими компонентами биоценозов, позволяет оценить уровень пластичности ферментных систем базидиомицетов в различных экологических условиях [5,6,8].
Изучение протеолитической активности высших базидиомицетов представляет несомненный интерес, так как позволяет получить более полную картину их биохимической деятельности и одновременно выяснить распределение этой активности по таксономическим группам. Кроме того, острый дефицит протеолитических ферментов во всем мире стимулировал развернутые исследования по поиску продуцентов протеиназ растительных организмов [7,9].
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Chang S.-T. Global impact of edible and medicinal mushrooms on humanwelfare in the 21st century: nongreen revolution// International Journal of Medicinal Mushrooms, 1999, V.1, p.1-7
2. Wasser S.P., Weis A.L. Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives (review)// International Journal of Medicinal Mushrooms, 1999, V.1, p.31-62.
3. Kawai M., Mukai N. Studies of milk clotting enzymes produced by Basidiomycetes Screening test of Basidiomycetes for the production of mi1k clotting enzymes. -Agric.Biol.Chem., 1970, V.34, No.2, p.159-163.
4. Kawai M. Studies of milk clotting enzymes produced by Basidiomycetes. III. Partial purification and some properties of the enzyme produced by Irpex lacteus Fr.// Agr. Biol. Chem. 1971. V.35. P.1517-1525.
5. Proteolytic enzymes of filamentous fungus // Evolution of Filamentous Plant Pathogens: Gene Exchange across Eukaryotic Kingdoms / Current Biology Canada, Sept. 2004, Vol. 16, No 19, p. 1857-1864.
6. Выделение и очистка ферментов лигнинолитического комплекса базидиального гриба Trametes pubescens (Schumach.) Pilát и исследование их свойств // О. В. Никитина, С. В. Шлеев, Е. С. Горшина, Т. В. Русинова, В. А. Сереженков, Д. Ш. Бурбаев, Л. В. Беловолова, А. И. Ярополов. Биохимия. 2005, том 70, вып. 11 . С. 1548-1555.
7. Алифатическая амидаза из Rhodococcus rhodochrous – представитель семейства нитрилаз/цианидгидратаз // С. И. Перцович, Д. Т. Гуранда, Д. А. Подчерняев, А. С. Яненко, В. К. Швядас. Биохимия. 2005, том 70, вып. 11. С. 1556-1565.
8. Выделение и свойства внеклеточной фитазы A Penicillium canescens // О. А. Синицына, Е. А. Федорова, А. В. Гусаков, И. В. Упоров, Л. М. Соколова, Т. М. Бубнова, О. Н. Окунев, A. M. Чулкин, Ю. П. Винецкий, А. П. Синицын. Биохимия. 2006, том 71, вып. 09. С. 1260-1268.
9. Участие протеолитических ферментов во взаимодействии растений с фитопатогенными микроорганизмами // В. В. Мосолов, Т. А. Валуева. Биохимия. 2006, том 71, вып. 08 С. 1034-1042.
10. Methods in Enzymologie // Proteolytik Enzymes /Academic Press, New York, San Francisco, London, 1970, Vol. 19, p. 436-445.
Читайте также:
Комментарии
2010-01-2903:56:42 Изучение протеолитической активности высших базидиомицетов, в частности Agaricaceae, представляет несомненно научный интерес, так как открывает горизонты поиска продуцентов молокосвертывающих ферментов.