- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -ГлавнаяОб АльманахеРецензентыАрхив телеконференций- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Сборники АльманахаДругие сборникиНаучные труды- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Образец оформленияИнформационное письмоО проведении телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Материалы I телеконференцииМатериалы II телеконференцииМатериалы III телеконференцииМатериалы IV телеконференцииМатериалы V телеконференцииМатериалы VI телеконференцииМатериалы VII телеконференцииМатериалы VIII телеконференцииМатериалы IX телеконференцииМатериалы Х телеконференцииМатериалы XI телеконференцииМатериалы XII телеконференцииМатериалы XIII телеконференцииУчастники XIII телеконференцииМатериалы XIV телеконференцииУчастники XIV телеконференцииЮбилейная XV Телеконференция Октябрь 2014Участники Юбилейной XV Телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Конференция СМПиЧ-2015Участники СМПиЧ-2015- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -РегистрацияКонтакты
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Войти в почтуЗавести ящик- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Форум- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Поиск по сайту- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Информация для рекламодателей- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Последние статьи

Сборник научных трудов "Актуальные проблемы современной науки", Том 4, №2, 2015 год с материалами участников 17-ой международной телеконференции Ученые предлагают новые методы борьбы с раком МЦ Меир – наука на страже здоровья Ближайшая телеконференция "Современный мир, природа и человек" пройдет с 25 по 30 мая 2015 года Сборник научных трудов "Актуальные проблемы современной науки", Том 4, №1, 2015 год с материалами участников 16-ой международной телеконференции 170 лет со дня рождения Первого Ректора Томского Императорского Университета (ГЕЗЕХУС Николай Александрович) ОСОБЕННОСТИ ИММУНИТЕТА ПРИ БРУЦЕЛЛЕЗЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) Старт телеконференции "Современный мир, природа и человек" Участники телеконференции "Современный мир, природа и человек" Февраль 2015 СОСТОЯНИЕ РЕПРОДУКТИВНОГО ПОТЕНЦИАЛА У БОЛЬНЫХ С ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ КИСТАМИ ЯИЧНИКОВ

Полезная информация

 
 

ЧАСТОТА ВСТРЕЧАЕМОСТИ КЛЕТОЧНЫХ НАРУШЕНИЙ В БУККАЛЬНОМ ЭПИТЕЛИИ ЧЕЛОВЕКА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТИПА ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО КРАСИТЕЛЯ

Печать E-mail
Автор Калаев В.Н., Нечаева М.С., Карпова С.С.   
11.10.2010 г.
Воронежский государственный университет (г. Воронеж)

Эта статья опубликована сборнике научных трудов "Фундаментальные науки и практика" с материалами Третьей Международной Телеконференции "Проблемы и перспективы современной медицины, биологии и экологии" - Том 1 - №4. - Томск - 2010.

 
В настоящее время проводятся исследования по изучению факторов, влияющих на стабильность генетического материала человека с использованием микроядерного теста буккального эпителия [Ингель, 2006; Калаев, 2008; Юркин, 2002; Мейер, 2010; Юрченко, 2007], что обусловлено сравнительной простотой, быстротой и дешевизной анализа, а также отсутствием необходимости в специальном лабораторном оборудовании для культивирования клеток. Кроме того, буккальный эпителий является своеобразным «зеркалом», отражающим состояние всего организма [Гемонов,1969].
Однако эти исследования проводятся с использованием различных цитологических красителей, что может отразиться на результатах исследований. Влияние клеточных красителей на частоту встречаемости клеток с нарушениями было показано Юркиным А.Ю. [2002] и Ингель Ф.И. [2006]. В связи с этим нами была предпринята попытка изучить влияние часто употребляемых клеточных красителей (орсеина, светлого зеленого, метиленового синего, Романовского-Гимза) на частоту встречаемости аберрантных клеток.
Сбор буккального эпителия осуществляли по описанной методике Маймулова с соавт. [1998] с нашими модификациями у 10 спортсменов за 3 дня до соревнований, во время и спустя 3 и 6 дней после соревнований, возраст обследуемых лиц составлял 12-13 лет. Всего было проанализировано 141850 клеток, из них с нарушениями 1654 клетки. Статистическую обработку данных проводили с помощью пакета статистических программ «Stadia». Процедура группировки данных и их обработка изложены в работе Кулаичева [2006].
Нами было показано, что наиболее оптимальным типом красителя по качеству получаемых препаратов является Романовский-Гимза. При окраске этим красителем получаются наиболее чистые препараты, достаточно однородно окрашенные, ядерный аппарат по окраске отличается от цитоплазмы, клетка имеет четкие границы, при этом методика окрашивания достаточно проста и не занимает много времени.
В результате проведенных исследований было показано влияние разных типов красителей на частоту встречаемости аберрантных клеток (Р<0,001, сила влияния 2,3%), микроядер (Р<0,001, сила влияния 1,2%), перинуклеарных вакуолей (Р<0,001, сила влияния 0,5%). Влияния различных типов красителей на частоту встречаемости насечек, протрузий типа «язык» и «разбитое яйцо» показано не было.
Наибольшее количество аберраций в клетках выявляется при использовании светлого зеленого (13,8±0,8‰), орсеина (12,7±0,7‰), Романовского-Гимза (12,3±0,6‰), наименьшее при окрашивании метиленовым синим (7,9±1,0‰). Однако каждый краситель имеет свою специфику при выявлении того или иного типа нарушений (таблица).

 Таблица

Частота встречаемости аберраций в буккальных эпителиоцитах человека (‰) в зависимости от типа клеточного красителя

Тип аберраций

Краситель

Орсеин

Светлый зеленый

Метиленовый синий

Романовский-Гимза

Аберрантные клетки

12,7±0,7

13,8±0,8

7,9±1,0

12,3±0,6

Микроядра

3,3±1,4

1,9±0,9

1,9±0,6

6,0±0,4

Перинуклеарные вакуоли

6,5±0,5

10,0±0,6

3,9±0,4

3,7±0,4

Насечки

1,3±0,2

1,0±0,2

1,0±0,1

1,0±0,2

Протрузии типа «язык»

0,9±0,2

0,5±0,1

0,8±0,1

1,1±0,2

Протрузии типа «разбитое яйцо»

0,6±0,1

0,5±0,1

0,7±0,1

0,5±0,1

Оптимальным типом красителя для выявления клеток с микроядрами является Романовский-Гимза, он выявляет 6,0±0,4‰ указанных аберраций. Другие типы красителей могут выявить от 1,9±0,6‰ (окрашивание метиленовым синим) до 3,3±1,4‰ (окрашивание орсеином) нарушений.
Для выявления клеток с перинуклеарными вакуолями оптимальным типом красителя является светлый зеленый, он выявляет 10,0±0,6‰ указанных аберраций. Другие типы красителей могут выявить от 3,7±0,4‰ (Романовский-Гимза) до 6,5±0,5‰ (орсеин) нарушений.
Во всех случаях нами не было отмечено влияния индивидуальных особенностей человека на частоту встречаемости различных типов аберрантных клеток при использовании различных красителей. Т.е. один и тот же краситель окрашивает клетки разных людей одинаково.

Список литературы:
1.    Гемонов В.В. Морфология и гистохимия слизистойистой оболочки полости рта в норме и при некоторых патологических состояниях в эксперименте: Автореф. Дис… докт. мед. наук. - М., 1969. - 39 с.
2.    Ингель Ф.И. Перспективы использования микроядерного теста на лимфоцитах крови человека, культивируемых в условиях цитокинетического блока. Часть 2. Факторы среды и индивидуальные особенности в системе оценки нестабильности генома человека. Дополнительные возможности теста. Методика проведения экспериментов и цитогенетического анализа / Ф.И. Ингель // Экологическая генетика. -2006. –Т.4, №4. –С.38-50.
3.    Калаев В.Н. Оценка генотоксичности окружающей среды в городах республики Молдова по результатам микроядерного теста в буккальном эпителии детей / В.Н. Калаев, А.К. Буторина, М. В. Левински, и [др.] // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. – 2008. – Т.7, № 1. – С. 196-200.
4.    Кулаичев А.П. Методы и средства комплексного анализа данных / А.П. Кулаичев. - М.: ФОРУМ: ИНФА-М, 2006. - 512 c.
5.    Маймулов В.Г. Цитогенетические нарушения в соматических клетках у детей, проживающих в районах с различной интенсивностью загрязнения окружающей среды / В.Г. Маймулов, Л.В. Китаева, Т.В. Верещагина, и [др.]  // Цитология. -1998. –Т.40, №7. –С. 686-689.
6.    Мейер А.Б. Генотоксические и цитотоксические эффекты в буккальных эпителиоцитах детей, проживающих в экологически различающихся районах Кузбасса / А.Б. Мейер, В.Г. Дружинин, А.В. Ларионов // Цитология. – 2010. – Т.52, №4. – С. 305-310.
7.    Юркин А.Ю. Методические особенности анализа микроядер в клетках человека и животных при экологической оценке состояния окружающей среды: Автореф. Дис. … канд. мед. наук / А.Ю.Юркин  – Томск, 2002. – 22 с.
8.    Юрченко В.В. Микроядерный тест на буккальных эпителиоцитах человека / В.В. Юрченко // Полиорганный микроядерный тест в эколого-гигиенических исследованиях / Под ред. Ю.А. Рахманина, Л.П. Сычевой. – М.: Гениус, 2007. – 312 с.

Последнее обновление ( 12.04.2011 г. )
 

Комментарии  

  1. #1 Энглевский Николай Написать письмо
    2010-10-2509:02:51 Отличная работа! Не зря мы на кафедре чаще всего красили по Романовскому-Гимза
    Спасибо, очень интересная работа!
  2. #2 Владислав Николаевич Написать письмо
    2010-10-2523:42:13 Благодарим за высокую оценку нашей работы! Что Вы красите Романовским-Гимза?
  3. #3 Eugene Daev Написать письмо
    2010-12-0117:01:22 Очень странно! В статье указано, что материал собирали у спортсменов на 4 разных стадиях. Одноако: 1) какое это имеет отношение к названию работы; 2) где эти данные; 3) по какой из 4 групп представлены материалы в таблице; 4) можно ли называть строку "Аберрантные клетки" типом аберраций???
    Это все существенно снижает впечатление от данной публикации. А часть данных (о динамике показателей в зависимости от времени сбора материала) вообще потеряна.
    Не менее странно, что при примерно общей частоте аберрантных клеток (искл. метилен.синьку) разные красители выявляют разные типы перестроек. Значит, не один из них не оптимален, и данные по одному должны дополняться данными с использованием других окрасок.
    В тестах на аберрации обычно учитывают несколько типов, и вряд ли краситель, лучше выявляющий только один из них, будет оптимален для подобных тестов.
    Или же речь идет о неспецифике окрашивания?
    Не хватает серьезного обсуждения.
  4. #4 Владислав Николаевич Написать письмо
    2011-02-1621:23:01 Спасибо за конструктивные и подробные замечания к нашей статье. Мы ознакомились с ними и постараемся учесть в нашей дальнейшей работе.
    Отвечаем на ряд поставленных Вами вопросов:
    1. Наши исследования мы проводили на группе спортсменов в разные сроки до и после соревнований. В статью вошли общие данные за все 4 дня взятия соскобов. Анализ динамики нарушений и влияние на нее типа цитологического красителя мы планируем проанализировать в наших следующих статьях.
    2. Под термином “аберрантные клетки” мы подразумевали сумму всех клеточных нарушений, анализируемых нами при окрашивании различными красителями.
    3. Да, действительно, вы правы, что ни один краситель по существу не является идеальным для выявления всех типов аберраций, но по совокупности показателей (выявляемый спектр нарушений, общее число нарушений) Романовский-Гимза наиболее оптимален.
  5. #5 Мирослав Написать письмо
    2011-10-2811:00:42 Здесь не только красители. Не просматривается корректность исследования.
  6. #6 Алина Владимировна Написать письмо
    2012-03-0110:47:54 Удивляет очень многое.
    От набора красителей до отсутствия ссылок на яд.образований ранее описанных авторами.которые давно работают в этой области.
  7. #7 Владислав Николаевич Написать письмо
    2012-10-1518:24:41 Уважаемый Мирослав!
    В чем Вы не просматриваете корректности исследований? Можете ли подробнее изложить свою мысль?
  8. #8 Владислав Николаевич Написать письмо
    2012-10-1518:29:58 Уважаемая Алина Владимировна!
    Мы воспользовались наиболее распространенными красителями, применяемыми для окраски.
    Более подробный список ссылок на работы других авторов представлен в статье, опубликованной в журнале "Цитология", № 1 , 2012 год.
  9. #9 Леонид Написать письмо
    2013-03-2708:55:52 Спасибо за обзор. Очень полезная информация для методического этапа работы по выбору наиболее чувствительного красителя. Что касается Вашего исследования - всё четко, логично и понятно. А всех авторов, работающих с теми или иными красителями в цитологии, перечислить невозможно и не стоит пытаться ))))

Добавить комментарий

Правила! Запрещается ругаться матом, оскорблять участников/авторов, спамить, давать рекламу.



Защитный код
Обновить

« Пред.   След. »
 
 
Альманах Научных Открытий. Все права защищены.
Copyright (c) 2008-2017.
Копирование материалов возможно только при наличии активной ссылки на наш сайт.

Warning: require_once(/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php) [function.require-once]: failed to open stream: Нет такого файла или каталога in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 79

Fatal error: require_once() [function.require]: Failed opening required '/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php' (include_path='.:/usr/local/zend-5.2/share/pear') in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 79