Среди актуальных проблем современной офтальмологии важное значение имеет разработка эффективных методов хирургического лечения пролиферативной витреоретинопатии, осложняющей течение различных видов патологии заднего отрезка глаза. Успех оперативного вмешательства может быть достигнут лишь при условии максимального удаления кортикальных слоев стекловидного тела и эпиретинальных мембран, однако механическая витрэктомия опасна развитием серьезных ятроген-ных осложнений. Перспективным направлением решения проблемы лечения витреоретинальной пролиферации является применение протеолитических ферментов, в частности, коллализина. Цель - в эксперименте in vitro изучить специфичность действия коллализина на фиброзную ткань и определить терапевтически оптимальную дозу препарата при его интравитреальном введении.

 

Материал и методы. В ходе 1-й серии экспериментов в качестве объекта исследований были выбраны сухожилия крупного рогатого скота, из которых предварительно выкраивались одинаковые продольные полосы шириной 5,0 мм, длиной 100,0 мм, толщиной 3,0 мм. Полосы сухожилий помещались в 2 емкости, одна из которых была заполнена 20,0 мл изотонического раствора хлорида натрия, другая - 20,0 мл раствора коллализина (доза - 10,0 клостридиальных единиц КЕ). При этом один край каждой сухожильной полосы фиксировался к краю емкости, второй край - через катушечный блок к подвешенному грузу массой 0,5 кг.

В течение 14 часов эксперимента каждый час измерялась длина сухожильных полос. Во 2-й серии экспериментов для определения терапевтически оптимальной дозы коллализина при интравитреальном введении в качестве объекта исследования были выбраны свежие энуклеирован-ные глаза (n=28) половозрелых свиней. Глаза фиксировали иглами к пенопластовой основе за оставшиеся фрагменты глазодвигательных мышц. Коллализин предварительно разводился в различных дозах - от 1, до 14,0 КЕ в 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Препарат вводился в стекловидное тело через прокол склеры в 5,0 мм от лимба в одном из косых меридианов. В качестве контроля служили энуклеированные глаза свиней (n=14), в которые интравитреально вводился 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия.
Через 1 час после инъекции каждое глазное яблоко вскрывалось вдоль экватора. Стекловидное тело извлекалось и пропускалось через жестяное сито в емкость с градуированной миллилитровой шкалой. С помощью секундомера определялась объемная пропускная способность (ОПС) стекловидного тела.

Результаты и обсуждение. В ходе 1 -й серии экспериментов установлено, что длина сухожильных полос, помещенных в емкость с раствором коллализина, увеличивалась каждый час в среднем на 2,1 мм. При этом максимальное увеличение длины - до 6,0 мм было отмечено через 1 час от начала эксперимента.
Длина сухожильных полос, находящихся в емкости с изотоническим раствором хлорида натрия, также постепенно увеличивалась, однако не более 0,3 мм каждый час. В течение 1 часа от начала эксперимента прирост составил 1,0 мм.
В течение 14 часов общий прирост длины сухожильных полос составил в экспериментальной группе - 29,5 мм, в контрольной - 4,25 мм. При этом необходимо отметить, что растяжение сухожильных полос, находящихся в растворе коллализина, наблюдалось в течение первых 10 часов, после чего длина сухожилий оставалась постоянной. В контроле сухожильные полосы растягивались лишь в течение первых 3 часов.
По данным 2-й серии экспериментальных исследований ОПС стекловидного тела в контрольной группе составила 1,5 мл/с.
В экспериментальной группе уже при интравитреальном введении 2,0 КЕ коллализина ОПС составляла 1,95 мл/с. При введении же 10,0 КЕ фермента ОПС возрастала на 4,7 мл/с, составляя 6,25 мл/с.

В среднем при введении каждой дополнительной единицы препарата от 1,0 до 10,0 КЕ показатель ОПС стекловидного тела увеличивался на 3,73 мл, увеличение же общей ОПС при введении от 1,0 до 10,0 КЕ коллализина составило 37,3 мл/с.
При введении каждой дополнительной единицы фермента от 10,0 до 14,0 КЕ исследуемый показатель возрастал в среднем на 13,3 мл/с, увеличение обшей ОПС составило 53,5 мл/с.
Необходимо отметить, что при увеличении дозы коллализина от 1,0 до 10,0 КЕ интенсивность витре-олиза в соответствии с изменением ОПС стекловидного тела была в 2 раза меньше, чем при увеличении дозы препарата от 10,0 до 14,0 КЕ.

Выводы. Таким образом, полученные в ходе экспериментальных исследований результаты подтверждают субстратную специфичность коллализина, избирательно действующего на соединительную ткань. При этом коллагенолитическое действие фермента сохраняется в течение 10 часов, однако максимальный эффект наблюдается через 1 час от начала эксперимента.
Терапевтически оптимальной для интравитреального введения дозой коллализина является 10,0 КЕ, т.к. при инъекции меньшей дозы препарата интенсивность витреолиза выражена недостаточно, в то время как введение более 10,0 КЕ фермента может индуцировать нежелательное повреждение прилежащих хориоретинальных структур и других тканей глазного яблока.