Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова

Селезенка является органом иммуногенеза, в котором сосредоточена лимфоидная ткань. Лимфоидная ткань, являясь структурной составляющей иммунного ответа организма, тонко реагирует на многочисленные экзогенные и эндогенные факторы. При токсических поражениях печени в патологических процесс будут вовлекаться и органы иммуногенеза, в том числе и селезенка. Учитывая частоту встречаемости токсических поражений печени и необходимость в новых методах лечения, а также недостаточную изученность изменения органов иммуногенеза при этом процессе, целью нашего исследования явилось изучить динамику изменений содержания серотонина (С) и катехоламинов (КА) в структурах селезенки крыс под воздействием иммуномодулятора «Трансферфактор» в различных дозах на 7,14,21 дни эксперимента.
Материалы и методы. Объектом исследования служила селезенка 25 белых беспородных крыс-самцов массой 180—200 г. в весенний период года при экспериментальном токсическом гепатите (ЭТГ). Последний моделировали внутримышечным введением 0,2 мл 50% масляного раствора четырех хлористого углерода в дозе 0,6 г/кг. Выделяли 5 группы животных:1-я– интактные крысы (n=5); 2-я – контрольная (крысы которым вводилось 0,2мл растительного масла); 3-я-крысы с экспериментальны токсическим гепатитом (n=5); 4-я– и 5-я– группа крысы с ЭТГ, которым ежедневно давали Трансферфактор классик в дозе 0,5 г/кг и 1 г/ кг.
Тимус, печень и селезенку животных забирали под глубоким эфирным наркозом. В данной работе представлено изучение селезенки. Из ткани селезенки готовили криостатные срезы, которые обрабатывали гистохимическими методами Фалька и Кросса для выявления аминосодержащих и гистаминсодержащих структур селезенки. Также применялась окраска полихромным толуидиновым синим по Унна для контроля состояния тканевых мукополисахаридов и гепарина в тучных клетках
Полученные препараты рассматривали под световым и люминесцентным микроскопом ЛЮМАМ-4.
Морфологическая картина селезенки контрольных животных, получавших внутримышечно по 0,2 мл растительного масла, не отличается от наблюдаемой в норме у интактных крыс.
В селезенке интактных крыс при окраске гематоксилин–эозином различимы белая и красная пульпа. Лимфоидная ткань представлена лимфоидными узелками(2–3 в поле зрения) с четкими границами и хорошо выраженными реактивными центрами. Центральная артерия в лимфоидном узелке располагается ассиметрично. Маргинальная и мантийная зоны хорошо выражены.
При окраске по методу Унна наблюдалось интенсивное окрашивание мальпигиевых телец в темно–синий цвет. По ходу сосудов встречались тотально дегранулированные бета2–метохроматичные тучные клетки .Число мегакариоцитов составляло 4 в поле зрения.
При окраске методом Фалька в селезенке интактных крыс центральная артерия определялась в виде четкого зеленоватого кольца с равномерной окраской. Содержание биоаминов в центральной артерии составляло: катехоламинов КА-11 у.е., серотонина С-14 у.е. Периартериальная зона практически не содержала гранулярных люминесцирующих клеток (ГЛК).В центре размножения выявлялись скопления ГЛК. ГЛК имели полигональную крупную форму и содержание КА-16,7 у.е. и С-19,8 у.е. ГЛК маргинальной зоны были представлены разнообразными по размеру и форме клетками. Содержание КА и С в них составляло 19,2 у.е. и 24,9 у.е. соответственно. Содержание биоаминов в красной пульпе ¬ КА-4,6 у.е. и С-5,9 у.е. ГЛК красной пульпы были немногочисленны.
При введении яда CCl4 выявлялись разные по размеру лимфоидные узелки. Граница между красной и белой пульпой была нечеткой. Реактивные центры были выражены не во всех фолликулах. В красной пульпе наблюдалось расширение венозных синусов, в части которых определялись макрофаги и лимфоциты.
При окраске по методу Унна в препаратах не определялись мегакариоциты, в белой пульпе произошло частичное разрушение лимфоцитов.
При окраске по методу Фалька обнаружены следующие изменения структур селезенки: более слабая люминесценция белой пульпы, в ряде лимфоидных узелков не дифференцируется центральная артерия из-за низкой интенсивности люминесценции стенки. В маргинальной зоне исчезли ГЛК. На 7 сутки эксперимента на темном фоне реактивного центра были видны единичные ГЛК мелких размеров. Содержание биоаминов в ГЛК реактивного центра было в 2 раза ниже по сравнению с таковым у интактных животных. На 14 сутки эксперимента концентрация биоаминов начинает увеличиваться, но по–прежнему остается сниженной в 1,6 раз по сравнению с интактными животными. На 21 сутки эксперимента содержание биоаминов в ГЛК реактивного центра продолжило возрастать, но не достигло такового у интактных животных, оно в 1,3 раза ниже нормы.
Содержание биоаминов в красной пульпе на 7 сутки эксперимента в 1,5 раза снизилось по сравнению с таковым у интактных животных. На 14 сутки эксперимента концентрация биоаминов продолжила снижаться в 1,9 раз. На 21 сутки эксперимента в красной пульпе интенсивность люминесценции продолжила снижаться в 2 раза по сравнению с интактными животными. На 21 сутки эксперимента в красной пульпе обнаружены мелкие ГЛК.
При исследовании селезенки крыс, получавших Трансферфактор в дозе 0,5 г/кг, обнаружено увеличение размеров лимфоидных узелков, но герминативные центры не увеличивались в размерах и состояли из 3–5 бластных клеток. Граница между лимфоидными фолликулами и красной пульпой была размыта, выявлялся выход лимфоцитов в красную пульпу. Сосуды менее расширены, чем при введении яда.
При окраске по Унна в цитоплазме лимфоцитов появилась метахромазия, что говорит о явлении бласттрансформиции. Число мегакариоцитов увеличилось до 5–6. Выявлялись скопления метохроматичных тучных клеток и мегакариоцитов, вокруг каждого лимфоидного узелка был заметен четкий ободок из пролиферирующих лимфоцитов. По периферии мальпигиевых телец располагалось много мегакариоцитов и дегранулировавших тучных клеток.
При окраске по методу Фалька на 7 день эксперимента у крыс этой группы выявлялись крупные ГЛК разной формы в герминативном центре. Содержание биоаминов в них не изменилось по сравнению с нормой. На 14 сутки эксперимента содержание КА и С в ГЛК реактивного центра снизилось в 1,4 раза. На 21 сутки содержание биоаминов в ГЛК реактивного центра продолжило снижаться в 1,5 раза.
В красной пульпе у крыс на 7 день эксперимента содержание КА и С снизилось по сравнению с интактными животными в 1,4 раза.На 14 сутки эксперимента в красной пульпе содержание биоаминов оставалось на том же уровне. К 21 суткам оно возросло до нормы.
У крыс, получавших Трансферфактор в дозе 1 г/кг, при окраске гематоксилин–эозином сохранялась картина крупных фолликулов с размытыми границами. В лимфоидных узелках были заметны расширенные герминативные центры, в которых располагались крупные лимфоидные клетки в состоянии митотического деления.
При окраске по методу Унна заметен был четкий ободок из пролиферировавших клеток вокруг узелка. Число мегакариоцитов достигает нормы ( 4 в поле зрения).
При исследовании методом Фалька на 7 сутки эксперимента концентрация биоаминов в ГЛК в реактивного центра снизилась в 1,2 раза по сравнению с интактными животными. На 14 сутки эксперимента содержание КА и С в ГЛК центра размножения возросло в 1,2 раза. На 21 сутки эксперимента оно продолжило повышаться и превысило норму в 1,6 раз .
В красной пульпе на 7 сутки эксперимента содержание КА и С не изменилось по сравнению с интактными животными. На 14 сутки эксперимента концентрация биоаминов возросла в 1,2 раза. На 21 сутки эксперимента в красной пульпе выявлялись скопления гранул в виде цепочки, содержание биоаминов продолжило увеличиваться в 1,4 раза выше нормы .
Выводы: 1.На фоне экспериментального токсического гепатита в структурах селезенки наблюдается выраженное снижение содержания серотонина и катехоламинов, особенно в красной пульпе и гранулярных люминесцирующих клетках реактивного центра лимфоидного узелка.
2.Наибольшее снижение содержания биоаминов при экспериментальном токсическом гепатите в красной пульпе наблюдается на 21 день эксперимента, а в гранулярных люминесцирующих клетках реактивного центра на 7 день эксперимента.
3.При лечении Трансферфактор в дозе 0,5 г/кг содержание биоаминов в гранулярных люминесцирующих клетках реактивного центра возвращается к норме на 7 сутки, а содержание катехоламинов и серотонина в красной пульпе – на 21 сутки.
4.При лечении Трансферфактор в дозе 1 г/кг содержание катехоламинов и серотонина в красной пульпе и в гранулярных люминесцирующих клетках реактивного центра возвращается к норме на 7 сутки.
5.Наиболее оптимальной дозой иммуномодулятора Трансферфактор, по нашим данным, является 1 г/кг

 

	Аминоциты		Лаброциты
	По Кроссу	По Фальку	По Кроссу	По Фальку
Dклетки в мкм	41,3	43,2	17,2	19,2
Размер гранул в мкм	4,1	4,3	0,2	0,2
Количество гранул	14,8	14,5	40,5	38,7
Интенсивность свечения	31,3	51,0	67,5	61,3
Цвет гранул	Темно–зеленый	зеленый	Светло–желтый	Изумрудно–зеленый