Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра фармакологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Актуальность: Экстракция растительного сырья, измельченного до фрагментов меньше 100 нм, позволяет обогащать извлечения биологически активными веществами за счет перевода в биологически доступную форму минорных компонентов межклеточного матрикса растительных клеток. В таких фитопрепаратах возрастает содержание аминокислот, низкомолекулярных углеводов, полифенолов, эфирных масел. Они оказывают более выраженное фармакологическое действие и приобретают новые лечебные свойства.
Цель: Изучить в эксперименте противовоспалительное и анальгетическое действие экстрактов крапивы двудомной, полученных из листьев, подвергнутых нанодиспергированию или измельченных до размера 1 мм, в сравнении с эффектами диклофенака.
Материал и методы: Сухие экстракты (экстрагент – 40% этанол) листьев крапивы, подвергнутых нанодиспергированию или измельченных до размера 1 мм, предоставлены ООО «Биолит» (Томск). Экстракт нанодиспергированных до размера 40–70 нм листьев крапивы содержит в 3,5–5 раз больше ?-каротина и хлорофилла, чем экстракт листьев крапивы, приготовленный без использования нанотехнологии. В экстрактах крапивы определяли содержание и активность (константа скорости окисления) антиоксидантов кинетическим методом в модельной реакции инициированного окисления кумола при 60 0С в присутствии инициатора. Эксперименты проводили в осенне-зимний период на 30 белых крысах-самцах массой 180–200 г и 40 белых мышах обоего пола массой 20–24 г. Экстракты крапивы и референтное противовоспалительное средство диклофенак вводили в желудок в виде суспензии на 1% крахмальной слизи: экстракты в дозах 100 и 250 мг/кг, диклофенак в дозе 10 мг/кг. Контрольные животные получали 1% крахмальную слизь. После завершения экспериментов мышей умерщвляли дислокацией шейного отдела позвоночника, крыс – декапитацией под эфирным наркозом. Острую воспалительную реакцию вызывали инъекцией 1% раствора агара Дифко в изотоническом растворе NaCl под плантарный апоневроз правой задней лапки мышей (0,05 мл) и крыс (0,1 мл). Экстракты крапивы и диклофенак вводили однократно за 1 ч до инъекции флогогена. На пике экссудативного воспаления, через 3,5 ч, взвешивали воспаленные лапки. Степень подавления отека вычисляли в процентах по формуле: прирост массы лапки в контроле – прирост при введении препаратов / прирост массы в контроле. Для оценки анальгетического эффекта мышей помещали на нагретую до 650С пластинку и замечали время до начала облизывания воспаленной или интактной конечности. В экспериментах на крысах объем отечной конечности измеряли онкометрически через 1, 3, 8 и 24 ч после введения агара Дифко. Противовоспалительную активность рассчитывали в процентах как отношение разности между объемом лапки до введения флогогена и объемом во время замера у крыс, получавших препараты, к аналогичной разности в контроле. Антипролиферативное действие оценивали у крыс при модели хлопковой гранулемы. Экстракты крапивы и диклофенак вводили ежедневно в течение 7 сут. На 8-е сут животных умерщвляли, ватные тампоны с грануляционно-фиброзной тканью извлекали, высушивали до постоянной массы при 550С и взвешивали. Рассчитывали разницу между массой высушенной гранулемы и исходной массой хлопковых тампонов. Степень угнетения пролиферации вычисляли в процентах по формуле: масса грануляционно-фиброзной ткани в контроле – масса при введении препаратов / масса в контроле [1]. Результаты обрабатывали методом парных сравнений по критерию Манна–Уитни, вероятность ошибочного вывода не превышала 5% (р<0,05).
Результаты: Экстракты крапивы в дозах 100 и 250 мг/кг подавляли развитие всех форм экспериментальной воспалительной реакции. Повышение дозы до 250 мг/кг не сопровождалось усилением противовоспалительного действия.
Экстракты крапивы препятствовали развитию острого экссудативного воспаления, вызванного у мышей и крыс агаром Дифко. Под влиянием экстракта крапивы, приготовленного методом нанотехнологии, и диклофенака выраженность отека у мышей снижалась на 55–61%, латентный период болевой реакции, вызванной термическим раздражением, увеличивался в 2–2,2 раза по сравнению с показателями в контроле. Экстракт листьев крапивы, измельченных до милличастиц, подавлял развитие отека достоверно слабее, на 44–49%, и удлинял время до появления боли в 1,5–1,7 раза. В экспериментах на крысах агаровый отек прогрессировал в течение 3 ч с ростом объема воспаленной лапки вдвое, затем он постепенно становился менее выраженным, хотя и спустя 24 ч объем лапки оставался увеличенным на 30%. Во все сроки эксперимента экстракт нанодиспергированных листьев крапивы тормозил экссудацию в большей степени, чем препарат, полученный экстрагированием листьев, измельченных до миллиразмера. Антиэкссудативное влияние экстракта крапивы, приготовленного методом нанотехнологии, не уступало действию диклофенака: уже через сутки у крыс, получавших эти препараты, объем лапки возвращался к исходному.
Экссудативная стадия воспаления с повышенной проницаемостью капилляров завершается пролиферацией мезенхимальных клеток. На модели «хлопковой гранулемы» экстракт нанодиспергированных листьев крапивы и диклофенак в равной степени и значительнее экстракта листьев крапивы, измельченных до размера 1 мм, уменьшали массу грануляционно-фиброзной ткани. У крыс, защищенных экстрактом нанодиспергированных листьев крапивы и диклофенаком, степень угнетения пролиферации составляла 29–38%, при введении экстракта крапивы, полученного из фрагментов листьев размером 1 мм, – 18–22%.
В экстракте нанодиспергированных листьев крапивы содержание антиоксидантов составляет 2,3 моль/кг, константа скорости окисления – 4,8 л/моль с; в экстракте, полученных из листьев, измельченных до размера 1 мм, эти показатели равны соответственно 1,3 моль/кг и 1,4 л/моль с.
Механизм противовоспалительного и анальгетического эффектов препаратов крапивы обусловлен антиоксидантным действием ?-каротина и других веществ этого растения – аскорбиновой кислоты, рутина, ?-токоферола, флавоноидов [2]. Антиоксиданты растений прямо нейтрализуют свободные радикалы нейтрофилов и макрофагов и эндопероксиды, образующиеся в циклоксигеназной реакции, а также потенцирует антиперекисную защиту. Ингибирование перекисного окисления сопровождается снижением продукции провоспалительных и алгогенных факторов – простагландинов, кининов, интерлейкинов-1, 6, 8, интерферона-?, фактора некроза опухоли-?, комплемента и молекул клеточной адгезии, ослаблением синтеза коллагена и гликозаминогликанов в фибробластах [3]. Больший терапевтический эффект экстракта листьев крапивы, полученного нанодиспергированием исходного сырья, связан с тем, что в результате обработки возрастает содержание ?-каротина и других биологически активных веществ, обладающих антиоксидантными свойствами.
Выводыя: Экстракт листьев крапивы с размером частиц 40–70 нм оказывал более выраженный противовоспалительный эффект, чем экстракт этого растения, приготовленный из листьев, измельченных до размера 1 мм, и по эффективности не уступал действию эталонного нестероидного антифлогистика – диклофенака.

Список литературы
1. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств / под ред. Р.У. Хабриева. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 2005. – 832 с.
2. Alrord, L. The use of nettle stings for pain // Altern. Ther. Health Med. – 2007. – Vol. 13, N 6, – P. 58-60.
3. Chrubasic, J.E., Roufogalis B.D., Wagner H., Chrubasic S. A comprehensive review in the nettle effect and efficacy profiles. Part I. Herba urtica // Phytomedicine.–  2007. – Vol. 14, N 6. – P. 423-435.