Артериальная гипертония - наиболее часто встречающееся сердечно-сосудистое заболевание, характеризующееся изменением взаимоотношения между объёмом циркулирующей крови и общим сосудистым сопротивлением, его распространённость составляет около 20 %, необходимо учитывать, что данная патология является одним из главных факторов риска сердечно-сосудистой и цереброваскулярной заболеваемости и смертности. Наряду с диуретиками, блокаторами кальциевых каналов и Р-блокаторами - ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) уже многие годы являются препаратами выбора, характеризующимися высокой эффективностью, хорошей переносимостью и рядом положительных сопутствующих воздействий: улучшением работы сердца и увеличением его толерантности к физическим нагрузкам. Отличительная особенность ингибиторов АПФ состоит в том, что они сочетают в себе свойства мощного нейрогуморального модулятора, периферического и коронарного вазодилататора. В России зарегистрированы различными фирмами под разными названиями 12 молекул ингибиторов АПФ. До последнего времени были наиболее известны каптоприл и эналаприл, затем к ним добавились: рамиприл, лизиноприл, моэксиприл, периндоприл, фозиноприл, и другие, которые по своей активности и клинической эффективности превосходят эти два препарата при сопоставимой стоимости. Большой интерес представляет такой ингибитор АПФ, как квадроприл (действующее вещество спираприла гидрохлорид), который широко используется для лечения гипертонической болезни. Квадроприл, обладая превосходной переносимостью, считается первым представителем третьего поколения ингибиторов АПФ [1]. Интерес также представляет изучение фармакокинетики данного препарата у пациентов с сердечной недостаточностью, перенёсших инфаркт миокарда в течение последних шести месяцев. Первым и основным этапом в фармакокинетических исследованиях является разработка методики количественного определения вещества в модельных системах и перенесение её на биологические объекты. Поэтому, целью нашей работы явилась разработка вольтамперометрической методики количественного определения квадроприла с последующим проведением фармакокинетических исследований.
В соответствии с поставленной целью требовалось решить следующие задачи:
Подобрать оптимальные условия определения квадроприла на основе стандартного образца вольтамперометрическим методом.
Перенести методику на биологические объекты.
Основными требованиями к методам определения биологически активных веществ является высокая чувствительность, селективность, специфичность и воспроизводимость результатов. При этом предварительная обработка пробы не должна носить осложнённого характера, а длительность единичного анализа должна быть минимальной. Всем этим условиям удовлетворяет современный электрохимический метод вольтамперометрии, который является перспективным при определении лекарственных и токсичных веществ, а также их метаболитов в биологических матрицах, причём абсолютная чувствительность данного метода составляет 10-4 - 10-5 мг/л [2].
В качестве объекта исследования для подбора оптимальных условий электролиза была использована субстанция спираприла гидрохлорида [7-[К-[1(8)-этоксикарбонил-3-фенилпропил]-(Б)-аланил]-1,4-дитиа-7-азаспиро [4,4] нонан-8(Б)-карбоксильной кислоты гидрохлорид моногидрат] М.м. 521,08 г/моль, с содержанием действующего вещества 99,9 %, предоставленная фармацевтической кампанией Арцнеймиттельверк Дрезден Гмбх представляющая собой белый кристаллический порошок растворимый в воде, легко растворимый - в 96 % этаноле и метаноле.
Экспериментальные данные были получены на полуавтоматическом анализаторе ТА-2 (Научно-производственного предприятия «Техноаналит», г. Томск) в комплекте с IBM-совместимым компьютером. Источником информации служили поляризационные кривые. В качестве рабочих электродов использовали ртутно-плёночный, золотой, стекло-графитовый и стекло-углеродный. Электродом сравнения служил - хлор-серебряный. В качестве фоновых электролитов были исследованы растворы: хлоридов натрия, калия, лития, кальция, сульфатов и нитратов натрия, калия, аммония, ацетата аммония и ряда других растворов квалификации ос.ч. их.ч.
Начальным этапом в разработке методики количественного определения спираприла гидрохлорида являлся подбор условий обнаружения аналитического сигнала, при этом оптимальным электродом был признан золотой, так как только на нём был выявлен сигнал спираприла. При выборе фонового электролита руководствовались основными требованиями, предъявляемыми к полярографируемому фону: составные элементы фона не должны вступать в реакцию с анализируемым веществом, а также проявляться на электроде при потенциале его окисления. Мы использовали возможные варианты фоновых электролитов при нейтральной рН среды, при этом аналитического сигнала лекарственного препарата выявлено не было, тогда как подщелачивание до рН равной 9 выявило на фоне 0,01 моль/л раствора калия хлорида чёткий сигнал лекарственного вещества. Проведя развёртку вольтамперограммы в катодном и анодном направлениях, мы сделали вывод о целесообразности использования метода анодной вольтамперометрии, так как при катодном варианте развёртки линия фона была загрязнена. Следующим этапом исследования было установление оптимальных условий электролиза, к которым можно отнести время и потенциал, а также его скорость и границы развёртки. Определяющим фактором методики является потенциал накопления, который должен способствовать максимально полному выделению определяемого вещества без мешающего влияния других ионов. Подбор потенциала проводили в диапазоне значений от (- 2,0) до (- 0,5) В, экспериментальным путем было установлено оптимальное значение данного параметра, составляющее (- 1,7) В, так как мы наблюдали наибольший прирост пика, тогда как смещение данного параметра в более положительную или более отрицательную область приводило к уменьшению величины регистрируемого тока. Для определения оптимального времени электролиза, с целью получения более выраженного сигнала, была использована область значений данного показателя от 30 до 600 с. Максимальная высота пика была выявлена при времени накопления равном 240 с. Наряду с имеющимися параметрами экспериментальным путем была определена рациональная скорость развёртки потенциала, равная 25 мВ/с, при замедлении или увеличении скорости границы сигнала становились нечёткими и, кроме того, возрастал остаточный ток. На основе выбранных параметров была выявлена линейная зависимость величины силы тока в датчике от концентрации лекарственного препарата в электролитической ячейке. Аналогичная линейная зависимость была установлена для лекарственного вещества в присутствии 0,02 мл сыворотки крови в датчике. При этом было установлено, что определению спираприла гидрохлорида в биологическом объекте не мешают компоненты сыворотки крови, это особенно важно для обеспечения экспрессное™ анализа.
Таким образом, в результате проделанной работы нами подобраны оптимальные условия определения квадроприла методом анодной вольтамперометрии в модельных смесях на основе стандартного образца с последующим перенесением методики на сыворотку крови, что послужит основой для выявления фармакокинетических параметров препарата.