Эта статья опубликована в сборнике статей по материалам XII Российского конгресса молодых  ученых  с  международным  участием "Науки о человеке"  (Томск, 26-27 мая 2011 г.) / под ред.   Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2011. – 104 с. 

Скачать сборник целиком (PDF, 1,6 MB)

Введение. В настоящее время исследователи всего мира большое внимание уделяют изучению иммунотропной активности растительных полисахаридов. Ранее нами были опубликованы результаты изучения иммунотропной активности водорастворимых полисахаридов из травы клевера лугового (T. pratense), где было установлено существенное влияние данных полисахаридов на активацию макрофагов, что указывает на перспективность их дальнейшего изучения в качестве противоаллергического средства [1]. T. pratense семейства Fabaceae используется в народной медицине как отхаркивающее, мочегонное, мягчительное, болеутоляющее средство, при злокачественных опухолях и др. [2]. Известно, что химическая структура полисахаридов (ПС) природного происхождения тесно связана с их биологическими свойствами. Начальным этапом изучения структуры ПС является установление их мономерного состава.

Целью работы явилось изучение мономерного состава полисахаридного комплекса T. pratense.

Материал и методы. Полисахаридный комплекс (ПСК) выделяли из травы T. pratense методом двукратной экстракции (1:100 мл экстрагента+0,5% р-р HCl; нагревание 1 час; отстаивание 24 часа; далее нагревание 1 час) и последующим диализом через полупроницаемую мембрану. Содержание уроновых кислот (УК) определяли карбазол-серным методом [3], в пересчете на кислоту галактуроновую; белка - методом Лоури [4], в пересчете на бычий сывороточный альбумин (фракция V). Разделение ПСК на фракции проводили на DEAE-целлюлозе (Servacelle DEAE-52, США). Моносахариды идентифицировали хромато-масс-спектрометрическим методом в виде соответствующих триме- тилсилильных производных моносахаридов после предварительного гидролиза 2М кислотой трифторуксусной в течение 5 час при 100 °С.

Результаты. Выход ПСК T. pratense составил 1,5±0,1 %; содержание УК в ПСК - 74,64±0,23%. Общее содержание белка - 0,56±0,01%. При фракционировании ПСК на DEAE-целлюлозе получено 5 основных фракций (PS62-1, PS62-2, PS62-3, PS62-4, PS62-5). Полученные фракции охарактеризованы по содержанию белка, нейтральных и кислых полисахаридов

Рис. Содержание нейтральных, кислых полисахаридов и белка во фракциях полисахаридного комплекса из травы T. pratense

Из рисунка видно, что фракции PS62-1 и PS62-2 представлены преимущественно нейтральными сахарами (97,26 и 97,56% соответственно) и содержат минорные количества кислых ПС (1,58 и 2,44% соответственно). Фракции PS62-3 и PS62-4 отличаются от других высоким содержанием кислых ПС (59,01 и 51,02% соответственно). Кроме того, только одна фракция PS62-1 содержит небольшое количество белка (около 1%), который может находиться как в связанной с полисахаридными молекулами форме, так и в виде свободной примеси.

Мономерный состав этих фракций показал, что гидролизат PS62-1 состоит из D-глюкозы (75.68%), D-галактозы (20.08%), D-арабинозы (1.84%), D-рамнозы (0.35%) и D-ксилозы (0.5%). Гид- ролизат PS62-2 состоит из D-галактозы (27.97%) и D-глюкозы (72.04%). Основными мономерными звеньями PS62-3 являются кислота галактуроновая (38.75%), галактоза (33.16%), рамноза (15.52%), ксилоза (4.95%), арабиноза (3.47%) и глюкоза (4.14%). Полисахарид PST-4 состоит из галактозы, рамнозы и кислоты галактуроновой в соотношение 1,5:1,4:1. Полисахарид PST-5 состоит из галактозы и рамнозы в соотношении примерно 2,1:1.

Заключение.

1. Установлено, что полисахаридный комплекс T. pratense состоит из 5 основных компонентов (PS62-1, PS62-2, PS62-3, PS62-4, PS62-5).
2. PS62-1 состоит преимущественно из D-глюкозы (75.68%) и D-галактозы (20.08%); PS62-2 - D-галактозы (27.97%) и D-глюкозы (72.04%); PS62-3 -преимущественно из галактуроновой кислоты (38.75%), галактозы (33.16%) и рамнозы (15.52%); PS62-4 - галактозы (37.32%), рамнозы (37.1%) и кислоты галактуроновой (25.57%); PS62-5 - галактозы (67.98%) и рамнозы (32.02%).