СибГМУ (Томск)
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам пятого конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.- Томск, СибГМУ.- 2004.- 413 с.
Скачать сборник целиком
Изучению антимутагенеза - феномена снижения частоты спонтанных или индуцированных мутаций с помощью антимутагенов посвящено множество работ, подробно рассмотренных в многочисленных обзорах [1,4,5]. Вместе с тем его механизм, интимные процессы формирования антимутагенного эффекта, мишени действия антимутагенов остаются недостаточно изученными.
В настоящее время изменение эффективности репараций повреждений ДНК рассматривается как один из основных механизмов действия антимутагенов [2].
Ранее проведенными исследованиями, с помощью микроядерного анализа [3] нами был осуществлен скрининг среди известных растений Сибирской флоры на предмет выявления наиболее перспективных в антимутагенном отношении видов; в дальнейшем из сырья наиболее активных видов был составлен сбор, активность которого также была подтверждена с помощью вышеуказанного метода анализа. Однако остались невыясненными механизмы антимутагенного действия суммарного комплекса биологически активных веществ из растений, чему и были посвящены наши дальнейшие испытания.
Активность репарационной системы ДНК исследовали с помощью метода сцинтилляционной радиометрии. Исследование проводили на культуре клеток лимфоцитов, которые культивировали по общепринятой методике (Воут,1968). Использовали ФГА фирмы "Difco" США. В качестве источника УФ-излучения применяли две бактерицидные лампы БУФ-15, расположенные на фиксированном (30 см) расстоянии от объекта. Использовали УФ-излучение (длина волны 254 нм) в дозе 15 Дж/м*2, мощностью 1,6 Дж/с. 0,1 мл крови в каждом случае делили на три равные части, одну часть облучали УФ 10 сек., вторую - 15 сек., третью часть (контроль) облучению не подвергали. Каждую из этих порций крови по капле распределяли на 3 лунки в иммунологический планшет. В каждую лунку добавляли по 0,2 мл питательной среды 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и содержащей SH-тимидин (10 мкКюри/мл среды). Клетки инкубировали в термостате 2 часа при температуре 37 С°. После 2-х часовой инкубации пробы фильтровали через миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,2 ц и промывали дистилированной водой (20 мл на пробу), 5%-м раствором трихлоруксусной кислоты (2 мл на пробу) и 96-м этиловым спиртом (1 мл на пробу). В просушенных фильтрах измеряли радиоактивность кислотонерастворимой фракции в импульсах в секунду на сцинтилляционном счётчике Mark (США). Индекс стимуляции определяли по большому среднему значению числа импульсов в облучённых пробах к таковому в контроле (Засухина Г.Д.,1975). В клетках здоровых доноров индекс стимуляции репаративного синтеза ДНК составлял или превышал 2,0 при частичном ингибировании - колебался от 1,3 до 1,9 при глубоком ингибировании - не превышал 1,2 усл. единиц.
таблица 1
Уровень активности эксцизионных ДНК-репаративных процессов в культурах Т-лимфоцитов здоровых
доноров после введения экстракта из лекарственных растений и витамина А
|
Показатели |
Контроль |
Больные |
после введения витамина А |
после введения экстракта |
Индекс стимуляции ДНК-репаративной активности (в усл. ед.) |
УФ |
2,9±0,4 |
2,2±0,2* |
5,7±1,1* |
4-НХО
(4-нитрохинолин - 1-оксид) |
3,2±0,4 |
2,0±0,3* |
7,6±1,8* |
Примечание: Звездочками отмечены достоверные отличия от контроля: одной при Р<0,01; двумя при P<0,05
Результаты изучения последствий стимуляции ДНК-репарации УФ-облучением и введением 4-НХО представленные в таблице 1 свидетельствуют о том, что индекс стимуляции различен при введении витамина А и экстракта из сбора лекарственных растений. Если витамин А практически слабо влиял на этот показатель, преимущественно в сторону снижения изучаемого показателя, то при введении экстрактов растений этот показатель был достоверно выше, чем в контроле: 5,7±1,1 при стимуляции УФ-лучами (в контроле 2,9±0,4) и 7,6±1,8 при стимуляции 4-нитрохинолин-1-оксидом - (в контроле 3,2±0,4).
Таким образом, описанные данные позволяют предполагать, что именно способность к активации ДНК-репаративных процессов лежит в основе антимутагенного эффекта экстракта из сбора лекарственных растений.
Литература:
1. Алекперов У.К. Антимутагенез: Теоретические и практические аспекты. М.: Наука, 1984. 100 с.
2. Засухина Г.Д. Мутагенез, антимутагенез, репарация ДНК / Г.Д. Засухина, Т.А. Синельщикова // Вестник РАМН. - 1993. - №4. - С.9-15.
3. Микроядерный анализ и цитогенетическая нестабильность / Ильинских Н.Н., Новицкий В.В., Ванчугова Н.Н., Ильинских И.Н. - Томск, 1992. - 272с.
4. Серебряный А.М. Стимулированная репопуляция как основа феноменов антимутагенеза и адаптивного ответа у растений / А.М. Серебряный, Н.Н. Зоз // Генетика. - 2002. - Т.38, №3. - С.340-346.
5. Inhibitors of mutagenesis and their relevance to carcinogenesis / C. Ramel, U.K. Alekperov. B.N. Ames et al.// Mutat.Res. 1986. V.168. №1. P.47-65.
|