Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра гистологии, эмбриологии и цитологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,4 мб)

 

Актуальность: среди разнообразных форм сосудистой патологии глаза инволюционная центральная хориоретинальная дегенерация (ИЦХРД) составляет от 40% до 76,5% и занимает третье место среди причин слепоты у людей старше 50 лет. Заболеваемость в России ИЦХРД составляет около 15 на 1000 населения [2]. За последнее время оно значительно помолодело и стало диагностироваться не только в пожилом, но и в среднем возрасте, что нередко приводит к инвалидизации трудоспособного населения. Таким образом, становится актуальным поиск и разработка способов лечения, а также  профилактика этого заболевания. Биологической моделью развития возрастной дегенерации сетчатки может являться линия крыс OXYS, созданная в институте цитологии и генетики СО РАН селекцией и инбридингом крыс Wistar. Основной ключевой характеристикой крыс линии OXYS является повышенное радикалообразование, что приводит к таким изменениям в организме, которые характеризуются как синдром ускоренного старения. Клинически по результатам фундоскопии глазного дна признаки макулярной дегенерации у крыс OXYS появляются к 6-ти недельному возрасту, достигают выраженных стадий развития к 4-6 месяцам [3]. Однако морфологическое исследование сетчаток крыс линии OXYS с использованием морфометрического анализа до настоящего времени не проводилось. Подтверждение клинического диагноза крыс OXYS на морфологическом уровне даст возможность использовать эту линию в качестве экспериментальной модели для исследования эффективности патофизиологически направленного действия ряда лекарственных средств.
Цель: выявить возрастные особенности сетчатки у крыс OXYS.
Материал и методы: исследование проведено на 45 половозрелых крысах-самцах линии Wistar и Oxys массой 200-230 г. Были сформированы 3 возрастные группы: 6 месяцев (24 недель), 18 месяцев (64 недели), 24 месяца (96 недель). Каждая возрастная группа включала 5 интактных животных линии Wistar и 10 опытных крыс линии Oxys. Материалом исследования служили сетчатки крыс, изъятые после их умерщвления эфирным наркозом по завершению экспериментов. Центральные участки задней стенки глаза фиксировали в 2,5% растворе глютаральдегида на 0,2 М какодилатном буфере (рН 7,4), постфиксировали в 2% растворе четырехокиси осмия и заливали в смесь смол эпон-аралдит. Полутонкие срезы окрашивали толуидиновым синим, ультратонкие контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца, просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEM–7А. На полутонких срезах производили подсчет нейросенсорных клеток с пикнозом ядра, пикноморфных ассоциативных нейронов и радиальной глии, глионейронального индекса, ганглионарных нейронов с тотальным, очаговым хроматолизом и измененных по темному типу. С помощью окулярной измерительной сетки Автандилова высчитывали численную плотность ядер в наружном ядерном слое на площади 1 мм2, а также удельную площадь сосудов хориоидеи - открытых и с явлениями сладжа, стаза или тромбоза [1]. Статистическая обработка результатов проведена при помощи программы STATISTIСA 6.0. Для оценки достоверности различий при сравнении средних величин использовали непараметрический критерий Манна-Уитни. Различия считались статистически значимыми при уровне значимости р<0,05.
Результаты: морфологический и ультраструктурный анализ сетчатой оболочки крыс OXYS (n=40) и Wistar (n=20) в возрасте 6, 18 и 24-х месяцев выявил определенные закономерности развития хориоретинальной дегенерации у крыс OXYS. Во всех возрастных группах крыс линии OXYS пигментный эпителий был резко вакуолизирован, местами наблюдалось изменение пигментоэпителиоцитов по темному типу с увеличением осмиофилии ядра и цитоплазмы или их полное отсутствие. В возрасте 6 месяцев в сетчатках крыс OXYS количество пикнотичных нейросенсорных клеток (НК) увеличивалось в 3,8 раза по сравнению с аналогичной группой крыс Wistar (0,4±0,02% р<0,05). К 18 месяцам этот показатель возрастал в 1,6 раза (Wistar 0,7±0,16 %), а в возрастной группе 24 месяца наблюдалось достоверное увеличение процента пикнотичных ядер НК не только в сетчатке крыс OXYS, но и Wistar, и значимых различий между ними выявлено не было. Изменения внутреннего ядерного слоя (ВЯС) были ярко выражены в 6 месячной группе, у которых происходило увеличение процента гиперхромных и пикноморфных ассоциативных нейронов в 2 и 5,6 раза соответственно (контроль Wistar: 6,4±0,94% и 0,6±0,12%). В остальных возрастных группах различия между исследуемыми показателями в сетчатках крыс OXYS и Wistar были незначительны. Деструктивные изменения ганглионарных нейронов отмечались только в группе животных OXYS в возрасте 24 месяца. Так, мы наблюдали статистически значимое увеличение процента пикноморфных нейронов и нейронов с тотальным хроматолизом. Дегенеративные изменения радиальных глиоцитов в виде увеличения осмиофилии ядра и цитоплазмы наблюдались уже с 6 месячного возраста и сохранялись в других возрастных группах. Подсчет удельной площади открытых и тромбированных сосудов позволил выявить, что наиболее значительные нарушения сосудистого русла сетчатки проявлялись у крыс OXYS в возрасте 6 месяцев. Так, происходило снижение числа функционирующих сосудов и увеличение удельной площади сосудов со сладжем, стазом или тромбозом. Такая динамика сохранялась до 24 месячного возраста, но в этой возрастной группе значимых различий с контрольной группой Wistar того же возраста уже не обнаруживалось. В 18 и 24 мес. у всех исследуемых животных линии OXYS отмечались грубые изменения сетчатки: полная деструкция пигментного эпителия, нарушение структуры мембраны Бруха с развитием процессов неоангиогенеза – миграцией эндотелиоцитов в окружающую интерстициальную ткань и образованием капиллярных побегов.
Выводы: проведенное исследование показало, что у крыс OXYS возрастные изменения сетчатки начинают развиваться раньше, чем у крыс Wistar. Так, начиная с 6 месячного возраста, у всех исследуемых животных линии OXYS наблюдались значительные деструктивные изменения в пигментном эпителии, НК, нейронах внутреннего ядерного и ганглионарного слоев, радиальной глии, а также в сосудах хориоидеи. К 18 месяцам эти процессы усугублялись, чему свидетельствовало развитие неоангиогенеза. В возрасте 24 месяцев, как у крыс OXYS, так и у Wistar, развивались грубые дегенеративные изменения всех структурных компонентов сетчатки, что, вероятно, связанно с процессами физиологического старения. Таким образом, на основании морфоколичественного и ультраструктурного методов исследования, можно предположить, что наиболее подходящей возрастной группой крыс линии OXYS для использования их в качестве экспериментальной модели хориоретинальной дегенерации, являются 6 месячные животные.

 Список литературы:
1. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия / Г. Г. Автандилов - М.: Медицина, –1990. – 384 с.
2. Либман, Е. С. Слепота, слабовидение и инвалидность по зрению в Российской федерации / Е. С. Либман, Е. В. Шахова // Ликвидация устранимой слепоты. Всемирная инициатива ВОЗ. Мат. Рос. Межрегион. Симпозиума. – Уфа, 2003. – С. 38–42.
3. Преждевременно стареющие крысы OXYS как модель сенильной катаракты человека / Н. Г. Колосова, П. А. Лебедев, А. Ж. Фурсова // Успехи геронтологии. – 2003. Т. 12. С. 143-148.