В психофармакологии используют препараты, действующие на медиаторные системы [1]. Диазе-пам является экзогенным лигандом бензодиазепиновых рецепторов. Он изменяет уровень многих нейропептидов, в частности, АКТГ, кортикотропин-рилизинг гормона, энкефалинов, а также эндогенных лигандов бензодиазепиновых рецепторов - эндозепинов (DBI). Однако молекулярные механизмы влияния диазепама на уровень биологически активных пептидов не изучены. Нейропептиды синтезируются в виде высокомолекулярных предшественников, активация которых происходит путем протеолитического процессинга. В конечной стадии процессинга участвует карбоксипептидаза Н (КПН), которая отщепляет остатки аргинина и лизина с С-конца пропептидов [2].

Объектом исследования служили гипоталамус, четверохолмие, мозжечок, стриатум, гиппокамп, большие полушария, гипофиз, надпочечники и семенники самцов лабораторных белых беспородных крыс массой 200-250 г. При изучении острого влияния диазепама на активность КП Н in vivo препарат вводили внутрибрюшинно в физрастворе в дозе 5 мг/кг веса. Контрольные животные получали равное количество физраствора. Крыс декапитировали под наркозом через 0,5, 4, 24 и 72 часа после введения препарата. При изучении хронического влияния диазепама вышеуказанную дозу препарата вводили в течение 10 дней. Через 1 и 3 суток после воздействия животных декапитировали. Для исследования влияния транквилизатора на КП Н in vitro гомогенаты тканей инкубировали с диазепамом в течение 60 мин при 4оС. Концентрация препарата соответствовала дозе при введении in vivo.

Активность КП Н определяли флюорометрическим методом [2] при рН 5,6 по отщеплению дан-сил-фен-ала от дансил-фен-ала-арг как разность прироста флюоресценции в пробах, не содержащих и содержащих гуанидинэтилмеркаптоянтарную кислоту, и выражали в нмоль продукта, образующегося за 1 минуту инкубации на 1 мг белка. Концентрацию белка в пробах определяли методом Lowry. Достоверность отличий между средними значениями определяли с использованием t-критерия Стью-дента.
Обнаружено, что введение диазепама приводило к значительному уменьшению активности КП Н в гипофизе через 24 и 72 часа, гипоталамусе через 4, 24 и 72 часа и надпочечниках через 72 часа, что согласуется с представлениями о стресс-протективном действии диазепама путем ингибирования ги-поталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы и уменьшения секреции и образования АКТГ при его введении [3].
Инъекция диазепама понижала активность КПН в четверохолмии, больших полушариях, мозжечке и гиппокампе через 4, 24 и 72 часа относительно соответствующих значений контроля. При этом наибольшие изменения зафиксированы в больших полушариях и гиппокампе (в 1,3-1,4 раза), в отделах с высоким содержанием холецистокининов и вовлекающихся в развитие эмоциональных реакций и невротических состояний [4]. На основе полученных данных можно предположить, что уменьшение уровня холецистокининов под действием бензодиазепинов [4] вызвано снижением активности КПН. Вещество Р по данным ряда исследователей вовлекается в модуляцию стресса и его уровень повышен у пациентов с депрессивными расстройствами. Понижение уровня этого пептида в гиппо-кампе при введении диазепама [5] можно быть связано с понижением активности КПН. В семенниках активность КП Н снижалась через 72 часа после инъекции диазепама. В половых железах самцов синтезируются энкефалины, холецистокинины и другие биологически активные пептиды, в обмене которых участвует карбоксипептидаза Н, поэтому снижение активности фермента может влиять на уровень пептидов в семенниках.

Диазепам, вводимый в течение 10 дней, вызывал ингибирование гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой и гипоталамо-гипофизарно-гонадной систем, а также отделов, отвечающих за двигательную активность животных через сутки после воздействия. Через трое суток после хронического введения диазепама снижение активности КП Н обнаружено в отделах с высоким содержанием опиоидных пептидов: в гиппокампе и надпочечниках. Следовательно, хроническое введение диазе-пама вызывало наибольшие изменения активности карбоксипептидазы Н через сутки после воздействия.

Таким образом, одним из механизмов изменения уровня биологически активных пептидов диазе-памом может быть изменение активности КП Н.