Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра биофизики и функциональной диагностики
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 69-й научной итоговой студенческой конференции, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г.Томск, 11-13 мая, 2010 год); под реакцией академика РАМН В.В. Новицкого, член. корр. РАМН Л.М. Огородовой
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,4 мб)
Актуальность: Оксид азота – одна из ключевых сигнальных молекул, регулирующих функции сердечно-сосудистой, нервной и иммунных систем организма. Так, оксид азота принимает участие в регуляции тонуса сосудов, воздействуя на ион-транспортирующие системы гладкомышечных клеток через внутриклеточные сигнальные пути, влияет на осмотическую стойкость эритроцитов, регулирует процесс переноса этими клетками кислорода [2]. Уникальная химическая природа и большое число внутриклеточных мишеней для NO оставляют открытым вопрос, каким образом и насколько специфично реализуется действие оксида азота.
Цель: Исследовать влияние донора оксида азота нитропруссида натрия на устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу.
Материал и методы: В работе использовалась кровь 6 крыс-самцов, массой 200 – 250 г.
Для исследования кислотного гемолиза использовался метод, предложенный в работах [4], с нашими изменениями. Эритроциты получали из гепаринизированной венозной крови (25ед/мл крови). После центрифугирования (1000g, 10мин.4оС), плазму и клетки белой крови удаляли, а эритроциты промывали изоосмотическим раствором NaCl (150мМ). Промытые эритроциты разводили в 1000 раз тем же изоосмотическим раствором NaCl. Часть проб эритроцитов обрабатывалась 10 мкМ нитропруссида натрия, контроль и опыт инкубировали при 370С в течение 10, 15 и 30 минут. Кислотный гемолиз индуцировали добавлением 100мкл 2мМ соляной кислоты, и производили измерения на спектрофотометре СФ 2000-02. В течение 7 мин.
Исследовались следующие параметры: время начала гемолиза, максимальный процент гемолиза, продолжительность гемолиза, время наступления максимального гемолиза, скорость нарастания гемолиза. (рис.1)
Результаты: Исследование проводилось при разных температурах (10, 15 и 30 минут), было выявлено, что при увелечении времени инкубации до 15 минут максимальный процент гемолиза увеличился, а время продолжительности гемолиза уменьшилось. При 30 минутах инкубации время продолжительности гемолиза увеличилось и составило более 7 минут, максимальный процент гемолиза уменьшился, но составял значения больше чем при 10 минутах инкубации.
При добавлении нитропруссида натрия исследуемые показатели, в сравнении с контролем, изменились следующим образом. При 10 минутах прединкубации максимальный процент гемолиза увеличился на 14%±0,07, скорость нарастания гемолиза возросла на 18%±0,09 (р?0,05, n = 6), в то время как продолжительность гемолиза не изменилась. При 15 минутах прединкубации мы также наблюдали усиление гемолиза. Максимальный процент гемолиза увеличился на 27%±0,09, скорость нарастания гемолиза повысилась на 18%±0,1 (р?0,05, n = 6), а время продолжительности гемолиза не изменилось. При 30 минутах инкубации максимальный процент гемолиза увеличился на 18%±0,05, время продолжительности гемолиза уменьшилось в 2,5 раза, а скорость нарастания гемолиза увеличилась на 28%±0,08 (р?0,05, n = 6). Полученные в настоящей работе результаты позволяют предположить, что донор оксида азота натропруссид натрия снижает устойчивость эритроцитов крысы к кислотному гемолизу. Действие оксида азота осуществляется через прямые и опосредованные эффекты. Прямые эффекты наблюдаются в тех случаях, когда с биологическими макромолекулами взаимодействует сам оксид азота, и в основном реализуются через гуанилатциклазу [5]. Непрямые эффекты оксида азота связаны с взаимодействием с тиолами и переходными металлами, в частности, железом [3].
Вывод: Донор оксида азота нитропруссид натрия снижает устойчивость эритроцитов крысы к кислотному гемолизу, наиболее вероятной причиной этого является модификация белков мембраны вследствие взаимодействия оксида азота с SH-группами.
Список литературы:
1. Гительзон, И. И. Эритрограммы как метод клинического исследования крови / И. И. Гительзон, И. А. Тресков. – Н.: Изд-во СО АН СССР, 1959. –140 с.
2. Клещев, А. Л. Биохимические аспекты действия натрия нитропруссида / А. Л. Клещев, М. Л. Демидов, К. Р. Седов // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 1994. – Т.133, № 1. – С. 39–43.
3. Плотников, Е. В. Изучение цитотоксической активности донора оксида азота 3-нитро-4-фенилфуроксана на экспериментальной модели клеток опухолевой линии HELA / Е. В. Плотников // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2001. – Т. 54, № 2. – С. 68–79.
4. Прокопьева, В. Д. Молекулярные механизмы влияния этанола и его метаболитов на эритроциты in vitro и in vivo / В. Д. Прокопьева, Н. А. Бохан. – Т. : Томский университет, 2004. – 160 с.
5. Рябов, Ю. М. Роль NO как регулятора клеточных процессов при формировании полиорганной недостаточности / Ю. М. Рябов, А. М. Азизов // Анестезиология и реаниматология. – 2001. – № 1. – С. 8–13.
