|
Пятигорская государственная фармацевтическая академия
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2007 год, Том 4, выпуск 3), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н.
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (13 мб)
За последние годы наука обогатила современную медицину новыми малотоксичными и эффективными фитопрепаратами. Известно, что проросшие семена зерновых культур содержат комплекс биологически активных веществ: белков, аминокислот, полисахаридов, витаминов и других веществ. Так как в процессе прорастания зерен значительно увеличивается содержание аминокислот, задачей нашей работы явилось: разработать условия определения количественного содержания суммы аминокислот в проращенных зернах ячменя.
Проращивали зерна ячменя в течение трех суток, в этих условиях длина проростков составляла 2 – 3 мм. Затем сырье высушивали и измельчали. Для качественной идентификации использовали метод хроматографии в тонком слое сорбента. На пластинку «Сорбфил» в качестве свидетеля наносили 10 мкл 0,05 % раствора кислоты глютаминовой в спирте этиловом 96 % [1]. Параллельно наносили 10 мкл спиртового извлечения из проращенных зерен ячменя. Хроматографировали восходящим способом в системе н-бутанол – ледяная уксусная кислота – вода (4:1:1). Проявляли хроматограмму 1 % раствором нингидрина в спирте этиловом 96 % с последующим нагреванием пластинки в течение 10 – 15 минут в сушильном шкафу при температуре 105°С . Аминокислоты обнаруживали в виде четырех пятен розового цвета со значением Rf 0,83±0,05; 0,69±0,05; 0,51±0,05; 0,38±0,05. Наибольшее по размеру пятно соответствовало кислоте глютаминовой, поэтому содержание суммы аминокислот рассчитывали в пересчете на кислоту глютаминовую.
Для количественного фотоколориметрического определения использовали реакцию с нингидрином. Установлена длина волны, соответствующая максимуму светопоглощения окрашенного раствора (590 нм). Изучено влияние на оптическую плотность ряда факторов: концентрации и количества спиртового раствора нингидрина, значения рН, количества фосфатного буферного раствора, времени нагревания на водяной бане. Результаты приведены в таблице 1.
Относительную ошибку метода определяли путем анализа стандартного образца кислоты глютаминовой в оптимальных условиях. Установлено, что относительная погрешность составляет ±1,18 %.
Проведено определение содержания суммы аминокислот в проростках зерен ячменя. Точную навеску высушенных и измельченных зерен ячменя (около 1 г) обрабатывали спиртом этиловым 70 % при нагревании на водяной бане в течение 1 часа. Извлечение фильтровали и проводили реакцию с нингидрином. Установлено, что содержание суммы аминокислот в проращенных зернах ячменя составляет 0,75 %.
Таким образом, установлены оптимальные условия реакции c нингидрином и разработана методика количественного определения суммы аминокислот в проращенных зернах ячменя, которая отличается достаточной точностью и специфичностью.
Таблица 1 – Оптимальные условия количественного определения суммы амнокислот
|
Фактор
|
Оптимальные условия
|
|
количество 1%
раствора нингидрина
|
3 мл
|
|
оптимальное
значение рН
|
6,8
|
|
количество
фосфатного буфера
|
1 мл
|
|
время нагревания
|
30 минут
|
Литература
1. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2 ч. / М. Шаршунова, В.Шварц, Ч. Михалец. – М., 1980. – Ч. 2. – С. 482.
|
