|
Сибирский государственный медицинский университет, Томский государственный университет
Работа выполнена при финансовой поддержке РГНФ №13-06-00094
Известно, что особи с некоторыми генотипами обладают повышенной чувствительностью к определенным химическим веществам, в частности к компонентам нефтегазового производства. Например такая особенность зарегистрирована для мышей линии Balb/c и дрозофил линии nc (Soomali et al.,1984) . Исследования в условиях in vitro показали, что клетки людей больных атаксией телеангиектазией и синдромами Блюма и Дауна черезвычайно чувствительны к бензолу (Resoldi et al.,1996). Тем не менее данных относительно чувствительности человека определенного генотипа к различным компонентам нефти нам не известно.
В связи с активным освоением нефтегазовых провинций севера Сибири и развитием вахтового метода освоения природных ресурсов в этом регионе появляется настоятельная необходимость создания научно обоснованных рекомендаций направленных на отбор лиц с определенным генотипом резистентных или, наоборот, чувствительных к компонентам нефтегазового производства и способных выполнять функции по нефтедобыче в условиях севера Сибири.
В связи с изложенным целью настоящей работы явилось изучение генотипической структуры вахтовых рабочих-нефтянников, проживающих в г. Томске, а также роли определенных генотипов у человека в резистентности к мутагенному действию компонентов нефти.
Совершенно очевидно в силу методических причин мы не могли изучить генотипическую структуру всего генома человека да и до последнего времени такого рода исследования были обречены на неудачу. Значительные перспективы в этом плане появились после открытия тканевых антигенов (HLA). Комплекс HLA выгодно отличается от всех известных в настоящее время генетических систем, прежде всего своим черезвычайным полиморфизмом, что позволяет значительно индивидуализировать показатели относительного риска к тем или иным неблагоприятным условиям и заболеваниям для небольшой группы населения и выделить лиц, особенно подверженных действию определенного фактора (Зарецкая Ю.М.,1983, Bender K.,1984 ; Tiwari J., Terasaki P., 1985 , Perier Р.,199 ). Кроме того, в настоящее время доказано важное значение генетической системы HLA в регуляции иммунитета. Гены HLA детерминируют формирование клеточной оболочки, что играет огромное значение в межклеточных взаимоотношениях, в контроле иммунного ответа и других иммунологических феноменах (Schwartz R.H.,1988). Полагают также, что гены, детерминирующие антигены первого и второго классов, являются сами по себе генами иммунного ответа.
Косвенным подтверждением этому служат установленные ассоциации антигенов системы HLA с заболеваниями, в патогенезе которых ведущую роль играют иммунологические механизмы, в частности, с аутоиммунными болезнями (Зарецкая Ю.М., Абрамов В.Ю.,1986; Сибирякова Л.Г. с соавт;1988; Коненков В.И.,1989).
В связи с изложенным целью настоящей работы являлось изучение генотипической ситуации по HLA комплексу антигенов среди жителей г.Томска и роли определенных гаплотипов HLA в чувствительности генетического аппарата клеток к некоторым компонентам нефти.
Материалом послужила кровь 189 вахтовых рабочих-нефтянников, жителей г. Томска, а также контрольной группы - 125 жителей г. Томска не связанных с нефтепроизводством. Во всех случаях это были лица русской национальности, поскольку геногеография тканевых антигенов зависит от этнической принадлежности человека (Зарецкая Ю.М.,1983; Шабалин В.Н.,Серова Л.Д.,1988).
Выявление антигенов HLA на лимфоцитах основано на использовании реакций комплементзависимой цитотоксичности. Принцип метода заключается в двухэтапном воздействии на исследуемые клетки лейкоцитарной сыворотки, содержащей антитела с известной специфичностью, а затем сыворотки кролика содержащей комплимент. Если лейкоциты содержат соответствующий антиген, то они подвергаются лизису, что улавливается по проникновению в клетку прижизненного красителя. Живые клетки в отличие от погибших не окрашиваются.
Использование реакции лимфоцитолизиса для обнаружения HLA-антигенов предложено Terasaki and McCleland, в последующем ими дополненное специально разработанной микротехникой для постановки теста. Полученную от доноров суспензию лимфоцитов разводили до концентрации 3 х 10 х 9 клеток /л. В ячейки для реакции камеры Терасаки предварительно вносили вазелиновое масло с целью обеспечения отсутствия доступа воздуха для течения реакции, затем в каждую лунку закапывали по 1 мкл тестируемой антисыворотки, 1 мкл суспензии лимфоцитов. Инкубировали при 22 градусах С в течение 30 минут., затем добавляли 5 мкл комплемента кролика и еще раз инкубировали 60 мин. при той же температуре. Для окрашивания мертвых клеток в каждую лунку добавляли по 1 мкл 0,3% трипанового синего, разведенного раствором Хенкса 3:1. После этого просматривали реакцию под микроскопом и оценивали по 4-х бальной системе. В работе применяли панель из 116 сывороток , которая согласно 9-го Международного совещания по тканевому типированию индифицирует 16 антигенов HLA-A, 26 антигенов HLA-B и 8 антигенов - HLA-C. Анализ данных проводили на микро-ЭВМ фирмы "Hewlett-Packard 85А" (США)
Рассчитывали частоту встречаемости антигенов, генов, фенотипов, гаплотипов HLA и показатели неравновесного сцепления (Зарецкая Ю.М.,1983). Частоту антигена (ЧА) определяли путем прямого подсчета.
Достоверность различий результатов оценивали с помощью критерия хи-квадрат или точным методом Фишера ( Гублер Е.В., 1983 ) с поправкой на число исследуемых антигенов (Певницкий Л.А.,1988 ).
Нами проведено типирование НLА -антигенов 1 класса у 189 здоровых доноров русской национальности, не состоящих в кровном родстве, занятых в сфере нефтепроизводства. В выборку включали доноров, у которых предки не менее чем в трех поколениях были русской национальности и постоянно проживали в г.Томске. В качестве контроля использованы результаты исследования НLА -антигенов у 125 здоровых доноров русской национальности, не занятых в сфере нефтепроизводства. Установлено,(см.табл.) что в первой группе обследуемых наиболее часто встречались антигены НLА- А1 (25, 0%), А2 (30,2%) , А3 (19,8%) , В8 (21,4%) , В44 (22,9 ), Сw4 (26,1 ) и редко - НLА - А30 (5,2%), А32 (5,2%) , В41 (1,04%).
В то же время у этих доноров выявлены гены маркеры монголоидной популяции: НLА-В48 (2,1%) , В52 ( 6,2% ) и В61 ( 3,1% ). Приведенные данные согласуются с известным мнением, что русские, проживающие в Сибири имеют смешанный тип распределения генов НLА ( Рочинский, Левин, 1978; Бунак, Котова, Прокофьев, Четырина, 1989 ).
В отличие от контроля у рабочих-нефтянников г.Томска выявлена повышенная встречаемость НLA А1 (25,0 против 14,1 % в контроле), Аw25 ( 8,3 против 3,5% ), В8 ( 21,9 против 10,3%; ) , В17 ( 9,4 против 3,5 % ) В48 ( 2,1 против 0,59%), Вw52 ( 6,2 против 2,3% ), Сw6 ( 10,4 против 4,7% ), Сw5 ( 4,2 против 1,2 % ). С другой стороны в г.Томске среди рабочих-нефтянников редко встречались люди с антигенами HLA А2 , А11 , Аw23, Аw32 , В7, В13, В18, В27, В41 и В 49. Среди них отсутствовали люди с антигенами Вw54 и Вw56.
|
