Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Участие тучных клеток в комплексе межклеточных взаимодействий определяет актуальность их изучения [1; 2], что представляет не только теоретический интерес, но может служить ряду практических целей. Поскольку многие функции тучных клеток исследованы недостаточно [1; 3], то уточнение особенностей их поведения следует отнести к приоритетным задачам. В культурах перитонеальных клеток, используемых для изучения особенностей реагирования лаброцитов, регистрируется их незначительное содержание, что затрудняет проведение анализа и сказывается на достоверности результатов исследования. Учитывая данный факт, следует подчеркнуть целесообразность разработки методов инкубации тучных клеток, направленных на повышение концентрации лаброцитов в клеточной культуре. 

С целью увеличения численности адгезированных тучных клеток на единицу площади подложки, использовали: смешанные культуры перитонеальных клеток (содержащих лаброциты) и лимфоцитов селезенки; смешанные культуры перитонеальных клеток и лейкоцитов крови; культуры с увеличенной в 2 и в 4 раза концентрацией посадки перитонеальных клеток. Концентрация посадки лимфоцитов селезенки и лейкоцитов крови в смешанных культурах соответствовала концентрации перитонеальных клеток. Культуры клеток, выделенных от мышей линии BALB/c, инкубировали в течение 3 часов. Контролем служили культуры перитонеальных клеток с концентрацией посадки 1000 тыс. клеток в 1 мл взвеси. 

Наиболее оптимальным подходом, позволяющим увеличить численность адгезированных тучных клеток на единицу площади подложки в 10,6 раза, можно считать метод двукратного увеличения концентрации посадки перитонеальных клеток, при котором создаются адекватные условия инкубации лаброцитов. Об этом свидетельствует отсутствие достоверного возрастания количества дегранулирующих клеток. Данный метод также наименее сложен в техническом отношении. Следует указать, что при увеличении концентрации посадки перитонеальных клеток в 4 раза не наблюдается увеличения частоты встречаемости тучных клеток по сравнению с вышеотмеченным методом. При использовании лейкоцитов крови и лимфоцитов селезенки для создания смешанных с перитонеальными клетками культур, отмечали возрастание численности тучных клеток в 2,1 и в 2,7 раза, соответственно. Эти способы не имеют особых преимуществ по сравнению с методом двукратного увеличения концентрации посадки перитонеальных клеток, и являются достаточно трудоемкими. 

Исходя из результатов исследования, наиболее оптимальным методом, позволяющим многократно увеличить количество адгезированных тучных клеток на единицу площади подложки, следует признать способ двукратного повышения концентрации посадки перитонеальных клеток. Возрастание концентрации посадки не приводит к увеличению относительной численности тучных клеток, но влечет увеличение их абсолютного количества соответственно их концентрации во взвеси, и вызывает непропорциональное многократное возрастание числа лаброцитов на единицу площади подложки. Данный факт можно объяснить адекватной адгезией лаброцитов к фидеру из перитонеальных клеток. Предлагаемый метод может использоваться при проведении экспериментов, целью которых является изучение различных аспектов поведения тучных клеток. 

 

Список литературы:

1. Ильин Д.А., Архипов С.А Сравнительная оценка функциональной и интегративной активности макрофагов и лаброцитов в генотипически различных культурах перитонеальных клеток // VII всероссийская конференция по патологии клетки. Москва, 2005. – С. 56 – 57. 

2. Kovanen PT. Mast cell granule-mediated uptake of low density lipoproteins by macrophages: a novel carrier mechanism leading to the formation of foam cells // Ann Med. – 1991. –V. 23. – № 5. – P. 551 – 559. 

3. Metcalfe D.D., Baram D., Mekori Y.A. Mast cells // Physiol. Rev. – 1997. – V. 77. – № 4. – P. 1033 – 1079.