ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России (Пермь)

     Известно, что фагоцитарная активность лейкоцитов играет важную роль в сохранении гомеостаза организма, отражает его состояние и опосредуется влиянием различных цитокинов и плазменных факторов крови. При этом неспецифический, по сути, фагоцитоз воспринимается не только как показатель активной защиты организма от инфекций, но и как один из основных механизмов развития иммунитета, эффективность которого напрямую зависит от стимуляции или угнетения функционального состояния фагоцитирующих клеток. Ранее разными авторами была изучена активность фагоцитов крови у людей в первом и втором поколении после облучения родителей. Отмечено, что в этом случае фагоцитоз практически не отличается от показателей здоровых людей [1]. Однако в литературе нет данных по активности фагоцитоза после иммунизации потомства, родившегося от облучённых различными дозами ионизирующей радиации родителей.

     Цель работы – сравнительное изучение показателей фагоцитарной активности клеток периферической крови в ответ на антигенное воздействие у мышей первого поколения от родителей, облучённых различными дозами ионизирующей радиации.

     Материалы и методы. Эксперимент провели на потомстве белых беспородных мышей, родителей которых однократно облучили в трёхмесячном возрасте. Использована доза 0,3 Гр (промежуточная) и доза 3 Гр (большая). Для спаривания родителей было подобрано шесть вариантов. В контроле спаривали необлучённых животных. При облучении самцов в дозе 3 Гр потомства получить не удалось, несмотря на неоднократное повторение опыта.

     Все животные, родившиеся от интактных и от облучённых родителей из двух вариантов опыта, были разделены на 4 группы: 1-я – мыши, родившиеся от облучённых самок в дозе 3 Гр и необлучённых самцов (42 животных); 2-я – мыши, родившиеся от облучённых родителей в дозе 0,3 Гр (25 животных); 3-я – необлучённые мыши (контроль – 37 животных); 4-я – интактные мыши, родившиеся от необлучённых родителей (10 животных).

     В двухмесячном возрасте потомство иммунизировали 5% взвесью эритроцитов барана в дозе 0,1 мл. В сроки 5, 7, 14, 30 суток оценивали фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови, используя в качестве объектов фагоцитоза формалинизированные эритроциты барана (ФЭБ, 100×10⁶ эритроцитов/мл) [2]. К 0,1 мл цельной гепаринизированной крови каждой мыши добавляли 0,1 мл суспензии отмытых формалинизированных эритроцитов барана. Пробы инкубировали при температуре 37ºС в течение 20 минут. Содержимое пробирок перемешивали и с помощью автоматической пипетки наносили 0,015 мл смеси на тщательно обезжиренное стекло. Готовили мазок, который фиксировали метанолом и окрашивали по методу Романовскому-Гимза. Подсчитывали под масляной иммерсией (ув. 900) не менее 100 клеток, потенциально способных к фагоцитозу. Для оценки фагоцитарной активности применяли традиционные показатели: фагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарный индекс (ФИ), процент фагоцитоза (ПФ), абсолютное количество фагоцитов (АКФ) [3].

Оценка АКФ позволяет выявить степень фагоцитарной защиты организма, а также реактивную активацию нейтрофилов и моноцитов крови, независимо от генетически детерминированной поглотительной способности этих клеток.

     Результаты. Самые высокие показатели активности фагоцитоза (ПФ, ФЧ, ФИ, АКФ) выявлены у мышей 2-й группы в сроки 5, 7, 14 дней, за исключением 30-х суток, где ФЧ и ФИ несколько ниже, чем в 1-й группе животных (табл.). Эти же показатели (ФЧ и ФИ) во 2-й группе были достоверно снижены к 14-м суткам, становясь ещё меньше к 30-м суткам.

     Самая низкая функциональная активность клеток крови, способных к фагоцитозу, была у мышей 1-й группы, родившихся от облучённых самок дозой 3 Гр. Так на 5-е сутки процент фагоцитов был ниже, чем у животных 2-й группы, и продолжал снижаться до 30-го дня. Слабой была и поглотительная способность клеток, хотя на 7-й день ФИ был максимальным с падением в 3,7-2,3 раза к концу сроков исследования. После 7-го дня уменьшалось абсолютное количество фагоцитов, и к 30-му дню этот показатель был самым низким.

     В контрольной группе поглотительная способность клеток с 5 по 7-й день выше, чем в 1-й группе в 1,2 раза, хотя АКФ продолжало нарастать по 14-й день, снижаясь до исходного уровня к 30-му дню, т.е. оставаясь выше показателей 1-й и 2-й групп (рис.).

     Заключение. Таким образом, иммунизация экспериментальных животных 1, 2, 3-й групп вызывает процесс, связанный с инактивацией антигена, имеющий различную динамику и сопровождающийся достоверным изменением показателей фагоцитоза: ПФ, ФЧ, ФИ, АКФ. Процесс фагоцитоза был более активным и качественным у животных 3-й и 2-й групп. При этом у животных от облучённых родителей (1-й и 2-й группы) фагоцитарный процесс характеризовался быстрой истощаемостью и незавершённостью, так как не достигал исходных показателей, особенно у животных 1-й группы. Это свидетельствует о том, что активная защита организма от антигена у мышей 1-й группы снижена по сравнению со 2-й и 3-й группами, как и их противомикробная резистентность, что очевидно будет отражаться на ослаблении эффективности иммунных процессов в этой группе. Это подтверждает и серологический метод исследования, где показатели антителообразования в 1-й группе были самыми низкими в сроки 5, 7, 14-е сутки.

Литература

1. Аклеев А.В., Косенко М.М. Обобщение результатов многолетнего изучения иммунитета у населения, подвергшегося облучению // Иммунология. – 1991. – № 6. – С. 4-7.

2. Каплин В.Н. Теоретические основы совершенствования диагностики нарушений иммунологической защиты организма // Материалы научной сессии ГОУ ВПО ПГМА Минздрава России. – 1997. – С. 66.

3. Шилов Ю.И., Владыкина В.П., Атнагузина А.Т. Некоторые методические подходы к оценке показателей общего и дифференцированного фагоцитоза лейкоцитов периферической крови. Характеристика различий у здоровых людей // Пермский медицинский журнал. – 1998. – Т. 15. – № 2. – С. 3-6.  

Таблица

Динамика неспецифических показателей фагоцитоза у мышей 1, 2, 3 групп (М±m)

Примечание: * – достоверные различия при p<0,01; сравнение по срокам в динамике.

Рис. Динамика АКФ у животных 1, 2, 3-й групп на 5, 7, 14, 30-е сутки