Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

 

Известно, что существуют бинуклеарные [21; 22; 46; 82] и многоядерные лимфоциты [51; 59; 60]. Причем бинуклеарным лимфоцитам посвящено большое количество публикаций, охватывающих значительный период времени [21; 22; 26; 32; 46; 65; 74; 82]. Если двуядерные лимфоциты успешно изучаются на протяжении многих десятков лет, то это свидетельствует как минимум о заинтересованности исследователей, косвенно подтверждая актуальность проведения подобных работ. Основной целью написания настоящего обзора литературы является освещение вопросов формирования и функционирования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов, а также участия лимфоцитов в образовании макрофагальных полинуклеаров преимущественно в патологических условиях. Кроме того, будут затронуты и другие проблемы, так или иначе взаимосвязанные с этими важнейшими аспектами. 

Вначале приведем данные общего плана и сразу скажем, что весьма примечательным фактом следует считать наличие двуядерных лимфоцитов, принадлежащих к клеточным субпопуляциям, несущим различные функции. Описаны, например, бинуклеарные Т- [17; 68] и В-клетки [68]. Отметим также, что производные В-лимфоцитов могут относиться к двуядерным формам. В частности, показано, что существуют бинуклеарные лимфобласты [37] и плазматические клетки [44], но неясно являются ли эти формы лимфобластов и плазмоцитов производными собственно бинуклеарных лимфоцитов или становятся двуядерными на последующих этапах клеточной дифференцировки. 

В любом случае нельзя отрицать доказанность образования двуядерных лимфоцитарных дериватов и самих бинуклеарных лимфоцитов (относящихся к тем или иным популяциям), подтверждающую то положение, что клеткам данного происхождения присуще формирование двуядерных (и иногда полинуклеарных) производных, и дающую основания предполагать наличие общего механизма, ответственного за повышение класса ядерности указанных клеток. 

Представляемые двуядерные формы имеют различную тканевую принадлежность. Например, бинуклеарные лимфоциты находятся в периферической крови [22], но отмечено и существование бинуклеарных Т- и В-спленоцитов [68], то есть нескольких субпопуляций двуядерных дериватов. Попутно заметим, что значительное количество спленоцитов в составе ткани селезенки, включая Т- и В-клетки, по-видимому способствует адекватной идентификации бинуклеаров обоих типов. 

Заслуживающим внимание моментом по праву считается образование двуядерных форм in vitro. Поскольку регистрируются бинуклеарные лимфоциты и в клеточной культуре [6]. Причем в культурах лимфоцитов присутствуют как бинуклеарные, так и многоядерные клетки [51]. Вероятно, что процесс мультинуклеации лимфоцитов in vitro протекает интенсивнее, чем in vivo, учитывая принципиальную невозможность создания в условиях клеточной культуры всех составляющих, детерминирующих развитие клеток in vivo. Поэтому патологический характер формирования двуядерных и полинуклеарных клеток в данном случае не вызывает сомнения, но вряд ли служит единственным объяснением реализации указанных реакций. 

Вышеперечисленные особенности описанных форм лимфоцитов, включая существование нескольких клеточных субпопуляций, специфику их тканевой принадлежности, степень дифференцировки их производных и обстоятельства образования би- и полинуклеаров in vivo или in vitro, мы склонны относить к моментам, наиболее ярко характеризующим настоящий феномен. 

Однако здесь на этапе обсуждения кардинальных составляющих нам придется временно остановиться с тем, чтобы обратиться к рассмотрению методологических аспектов проблемы изучения лимфоцитов. Это потребуется для ясного понимания вопросов образования и поведения их бинуклеарных форм, а также участия лимфоцитов в развитии очагов хронического воспаления и формировании многоядерных клеток, входящих в состав последних. 

На сегодняшний день разработан комплекс высокоинформативных методов исследования, содействующих оценки морфофункциональных характеристик лимфоцитов и уточнению их роли в патологических и компенсаторно-приспособительных процессах. Прежде всего, стоит отметить микроскопическое исследование бинуклеарных лимфоцитов [82], позволяющее проводить идентификацию класса ядерности и типа клеток, а также судить о кариопатологических изменениях у лимфоцитов. В частности, регистрируют бинуклеарные лимфоциты и содержащиеся в них микроядра [32]. 

С практической точки зрения необходимо знать ориентировочные значения показателя частоты встречаемости двуядерных лимфоцитов, являющегося в данном случае важнейшим параметром. Так, определенная нами численность бинуклеарных форм лимфоцитов в культурах перитонеальных клеток составляет менее 1 %. Речь идет, конечно, об интактных первичных клеточных культурах. При любой другой ситуации (наблюдаемой in vitro или in vivo) уровень настоящего показателя может быть совершенно иным и варьировать в широких пределах, но в связи с относительно частым использованием культур перитонеальных клеток при реализации экспериментальных работ мы сочли целесообразным привести именно этот пример. 

Несомненно, что при проведении исследований большое значение имеет выбор качественных препаратов, используемых для цитологического анализа [51]. В противном случае невозможно избежать неадекватной интерпретации результатов исследования, обусловленной и досадными техническими ошибками при детектировании клеточных типов, включая отдельные субпопуляции лимфоцитов и их производных. Имеется в виду не столько регистрация класса ядерности клеток, сколько установление их типа и степени дифференцировки. Например, если в патологических условиях наличествуют бинуклеарные плазматические клетки, являющиеся зрелыми по своим цитоморфологическим признакам [44], то знание этих цитологических характеристик играет роль при дифференцировании многочисленных типов клеток единого происхождения. 

При последующем освещении методологических аспектов исследования лимфоцитов коснемся лишь тех из них, которые максимально отвечают определенным нами целям. Ни при каких обстоятельствах нельзя оставить без внимания регистрацию микроядер в лимфоцитах, успешно применяемую в ходе решения многих прикладных и нередко фундаментальных задач. Оказывается полезной она и при изучении проблем, составляющих основную тему нашего обзора. Справедливо это уже в том плане, что микроядра могут присутствовать в одноядерных, бинуклеарных [6] и в многоядерных лимфоцитах [51], о чем будет упомянуто позже. 

В отношении анализируемых объектов можно заметить, что проведение микроядерного теста на лимфоцитах периферической крови является важным методом исследования [46]. Хотя для обеспечения микроядерного анализа применяются и культуральные технологии [6; 74]. Определение частоты встречаемости микроядер в лимфоцитах успешно реализуется in vitro [63; 69; 71], причем было установлено, что изменение условий инкубации лимфоцитов и их принадлежность к разным клеточным линиям влияют на активность формирования микроядер [8]. Приведем информацию и о первичных клеточных культурах, поскольку интерес представляют особенности образования микроядер в лимфоцитах, непосредственно выделенных от генотипически различных организмов. Ведь изучение генетической обусловленности специфики поведения иммунокомпетентных клеток остается актуальным вопросом [1]. По нашим данным индукция кариопатологических изменений в перитонеальных лимфоцитах, выражающихся в наличие микроядер, имеет генотипическую детерминированность и зависит от сроков инкубации клеток in vitro. Иными словами, культуральные технологии расширяют возможности настоящего теста, но другой составляющей успешного исследования надлежит считать учет наиболее значимых параметров. 

Обычно проводится определение численности микроядер в 1000 бинуклеарных клеток [7; 45]. Существует также показатель общего количества микроядер, отмечаемых в бинуклеарных лимфоцитах [22]. Частота встречаемости микроядер учитывается не только в отношении бинуклеарных [6; 46], но и многоядерных лимфоцитов [51] и, разумеется, одноядерных [6]. Причем при анализе культур лимфоцитов показаны различия по уровню данного параметра у клеток, разнящихся по классу ядерности [51], что содействует поиску взаимосвязи между процессами мультинуклеации и формирования микроядер. 

Кроме того, существуют точки приложения этого теста для сравнения интенсивности развития кариопатологических нарушений в ходе исследований, имеющих другие цели. В частности, заметим, что оценка частоты встречаемости микроядер проводится у бинуклеарных лимфобластов [37]. Поскольку лимфобласты являются производными В-лимфоцитов, то метод применим и для анализа активности формирования микроядер у клеток, находящихся на разных этапах дифференцировки, что, вероятно, позволяет уточнить характер образования данных структур в зависимости от стадии развития бинуклеарных клеток указанного происхождения. 

Заслуживает внимания и сравнение уровней показателя частоты встречаемости микроядер в клетках различной тканевой принадлежности, детерминирующей микроокружение лимфоцитов, обусловливающее их функциональную активность, лежащую в основе процессов формообразования таковых. Поэтому можно отметить факт наличия микроядер в лимфоцитах периферической крови [24] и в спленоцитах [68]. 

Вызывает интерес такая сфера применения метода, как регистрация изменений в рамках отдельных подмножеств лимфоцитов. Перспективными следует считать работы, связанные с использованием Т-лимфоцитов [19; 63], включая их субпопуляции [63], что объясняется возможностью дифференцированно изучать особенности образования микроядер в пределах каждой из субпопуляций, имеющих четко ограниченные функции. Более того, микроядерный анализ проводят и на бинуклеарных Т-лимфоцитах [17]. Здесь требуется знать не только критерии идентификации микроядер и выделять признаки детектирования конкретной популяции лимфоцитов, но и учитывать принадлежность клеток именно к двуядерным производным, что несколько усложняет цитологический анализ с технической точки зрения. 

До сих пор речь шла о количественной оценке феномена образования микроядер. Однако другим важным параметром является характеристика микроядер в бинуклеарных лимфоцитах [6]. Не останавливаясь на этом заметим, что учет таких показателей значительно увеличивает информативность проводимого анализа. Получение данных о структурных и функциональных особенностях микроядер, несомненно, способствует установлению причин их формирования и вносит в результаты исследования качественную составляющую. 

Теперь затронем прикладные вопросы и для иллюстрации укажем одну из практических целей проведения микроядерного анализа. В частности, микроядерный тест применяется для определения генотоксичности [6]. Причем показатели численности бинуклеарных лимфоцитов и содержания в них микроядер могут коррелировать с концентрацией веществ, тестируемых на наличие генотоксического эффекта [32]. Небезынтересно заметить, что при оценке генотоксического влияния химических соединений на образование микроядер в лимфоцитах учитываются и хромосомные аберрации [43]. Тем самым, вероятно, повышается информативность исследования. 

В связи с этим стоит обратить взгляд на такое обстоятельство. Регистрация микроядер в бинуклеарных лимфоцитах проводится параллельно с выявлением нуклеоплазматических мостов [21; 22], структурных изменений хромосом и сестринских хроматидных обменов [10]. Учет всех приведенных параметров и сопоставление их уровней кардинальным образом увеличивает диагностическую ценность анализа и позволяет обоснованно говорить о характере отмечаемых нарушений, что важно при комплексном рассмотрении прикладных и фундаментальных проблем клеточной патологии. В то же время использование микроядерного теста для определения хромосомных повреждений [22] остается вполне адекватным подходом. 

Большое значение для понимания особенностей реализации цитопатологических процессов в зависимости от принадлежности лимфоцитов к одноядерным, би- или полинуклеарным формам имеет сравнительное изучение наблюдаемых изменений в клетках указанных типов. Поэтому оценка частоты встречаемости микроядер у клеток, относящихся к разным классам ядерности [6; 51], а также регистрация повреждения ДНК у моно- и полинуклеарных лимфоцитов [60], должны включать взаимное сопоставление уровней аналогичных показателей, учитываемых для каждой клеточной формы. 

Представив общую информацию о микроядерном анализе и его предназначении в исследовании бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов, мы не закрываем данную тему, поскольку некоторых вопросов методологии осуществления этого теста нам еще предстоит коснуться в более широком плане в рамках соответствующего раздела, что органично вписывается в обсуждение актуальной проблемы микроядер. 

Следует привести сведения и о других важнейших методах исследования лимфоцитов. Идентификация и количественная оценка субпопуляций лимфоцитов основывается на определении экспрессии специфических антигенов клеточной поверхности [27]. Маркировка антигенов клеточной поверхности [73] играет важную роль при решении этих задач. Например, лимфоциты могут нести такие специфические поверхностные антигены, как CD3, CD4, CD8, CD19, CD69 [59; 60], успешно детектируемые современными иммуноцитохимическими методами. В техническом же плане определение клеточных субпопуляций проводится с помощью моноклональных антител [85]. Субпопуляции лимфоцитов классифицируются по кластерам дифференцировки [55] и это способствует их эффективной идентификации. Хотелось бы также напомнить, что для определения субпопуляций лимфоцитов может использоваться проточная цитометрия [80], но иногда имеются особенности реализации анализа. Вероятно, этим обусловлена необходимость оптимизации методов проточной цитометрии для детектирования пролиферации Т-клеток [73]. 

Далее остановимся на целях выделения клеточных подмножеств. Анализ субпопуляций лимфоцитов [52] и, в частности, Т-лимфоцитов [84], непременных участников межклеточной кооперации, играющей роль в фундаментальных биологических процессах, имеют значение для получения информации полезной для развития ряда теоретических представлений в сферах цитофизиологии и клеточной патологии. Идентификация субпопуляций Т-лимфоцитов используется и при оценке активности течения некоторых заболеваний [79], что свидетельствует о попытке решения важных прикладных задач. Достоин внимания также факт определения субпопуляций лимфоцитов для уточнения характера иммунного ответа на присутствие, например, инфекционного агента [52]. На наш взгляд сбор и обобщение подобных данных способно внести весомый вклад в понимание патогенеза отдельных инфекционных заболеваний. 

Было бы излишне говорить о том, что количественный учет лимфоцитов, обладающих признаками принадлежности к соответствующим подмножествам, является базовой компонентой цитологического анализа, призванного в отмеченных случаях оказывать содействие в изучении наблюдаемых реакций. Однако если возможны функциональные нарушения у Т-лимфоцитов [84], то показатель их численности нельзя считать единственным критерием оценки особенностей реализации процессов с участием этих клеток. Стоит заметить, что повреждение ДНК у лимфоцитов, включая полинуклеарные формы [59], вероятно, обусловливает изменение поведения клеток или в последующем влечет их гибель. Поэтому вышеуказанное утверждение справедливо и в отношении альтерации лимфоцитов. Данные обстоятельства диктуют необходимость изучения функциональной активности клеток. 

Поскольку одной из функций лимфоцитов является продукция цитокинов [36], а многие реакции межклеточного взаимодействия контролируются при участии обширного ряда медиаторов, то определение синтеза цитокинов Т- и В-лимфоцитами является первостепенной задачей при изучении клеточной кооперации. С другой стороны, детектирование выработки этих факторов и оценка напряженности данного процесса требуются при проведении исследования функциональных и пролиферативных возможностей клеточных популяций. Некоторые цитокины, такие как IL-7, имеют значение для активации и пролиферации Т- и В-клеток [85], поэтому учет уровня продукции медиаторов способствует правильной интерпретации характера наблюдаемых реакций. 

Впрочем, прямая оценка собственно пролиферативной активности клеток предполагает использование других методов. Стоит заметить, что определение митотического индекса и индекса пролиферации [43] представляется здесь более предпочтительным способом. Соотносясь с вышеуказанным утверждением, позволим себе выразить мнение о необходимости тщательного выбора технологической базы планируемого исследования. 

Приближаясь к заключительной части этого раздела, хотелось бы еще сказать о несколько иных и достаточно специфических областях исследования двуядерных производных и процессов, детерминирующих формирование таковых. К специальным задачам следует отнести вопросы изучения реагирования лимфоцитов в ответ на влияние определенных факторов. Например, проводились исследования поведения бинуклеарных лимфоцитов при воздействии радиотерапии [26] и влияния химических соединений на образование веретена деления [28]. Преследуя аналогичные частные цели, параллельно достигается понимание общих закономерностей функционирования и образования бинуклеарных лимфоцитов. 

Поскольку достаточно много внимания нами было уже уделено методологической базе изучения лимфоцитов, то завершая настоящую тему, остается только указать, что помимо микроядерного теста, регистрации патологических форм митоза и идентификации бинуклеарных и многоядерных производных, сопоставимую с ними по своей значимости роль играют определение субпопуляций лимфоцитов и детектирование синтеза цитокинов этими клетками. Если все перечисленные методы анализа призваны обеспечить решение исследовательских задач, объединенных целью уточнения аспектов формирования би- и полинуклеарных лимфоцитов и установления характера их функционирования, то последние два технологических подхода служат еще и эффективным инструментом изучения роли лимфоцитов в реакциях образования многоядерных производных иного происхождения и в реализации патологических процессов, являющихся следствием развития этих полинуклеаров. Мало того, исследование различных проявлений функциональной активности лимфоцитов оказывается полезным и при детализации особенностей поведения бинуклеарных и многоядерных форм данных клеток. Подробно обсудив методологические аспекты интересующей нас проблемы, и имея основные представления о важнейших технологиях призванных обеспечить получение достоверных результатов анализа, мы подготовились к тому, чтобы непосредственно приблизиться к узловому предмету нашего разговора. 

Вначале коснемся принципиальных свойств индукторов формирования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов. В частности, бинуклеарные лимфоциты регистрируются при воздействии физических факторов [65]. Кроме того, при влиянии химических соединений могут наблюдаться нарушения клеточного деления [28], а поскольку некоторые формы патологических митозов детерминируют образование многоядерных клеток [1], то требуется всестороннее рассмотрение роли химических агентов в индукции формирования двуядерных и полинуклеарных лимфоцитов. Образование бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов может быть обусловлено также действием инфекционных агентов [2]. Иными словами, причины формирования описанных производных лимфоцитов значительно разнятся по своей природе. 

Кратко ознакомившись с этиологическими составляющими, было бы логичным подойти к проблемам образования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов вследствие реакций мультинуклеации. Однако сейчас нам предстоит затронуть не только собственно механизмы формирования полинуклеарных клеточных производных, но и обратиться к образованию микроядер, поскольку указанные вопросы тесно взаимосвязаны, а иногда и неотделимы один от другого. 

Забегая немного вперед сразу же заметим, как класс ядерности лимфоцитов детерминирует численность содержащихся в них микроядер. Так, было показано, что в культурах лимфоцитов частота встречаемости микроядер у мультинуклеаров многократно превосходила этот параметр у бинуклеаров [51]. Причем высокая частота встречаемости микроядер в многоядерных лимфоцитах обусловлена нарушением митотического процесса при биполярном и многополюсном клеточных делениях [51]. 

Не только наличие микроядер в многоядерных лимфоцитах связано с патологией митоза при мультиполярном делении клеток [51], но и образование самих мультинуклеаров, несомненно, происходит вследствие многополюсного митоза. Ведь мультиполярные митозы представляют собой один из основных механизмов формирования многоядерных клеток [1]. Действительно, у лимфоцитов могут наблюдаться нарушения процесса двухполюсного митоза и отмечаться мультиполярное деление [28], являющееся трех и более полюсным [51]. Указанные изменения, например, возникают вследствие влияния химических соединений, оказывающих воздействие на образование веретена деления [28], но в принципе не исключены и другие причины дезорганизации веретена деления, детерминирующей наличие многополюсного митоза, ответственного за формирование многоядерных клеток [1]. 

Возвращаясь к сопряженности реакций мультинуклеации лимфоцитов и возникновения у них микроядер, вспомним следующее. Если один и тот же этиологический фактор способен индуцировать формирование микроядер и многополюсные деления у лимфоцитов [28], то предполагается возможность общих механизмов образования данных структур, являющихся знаками кариопатологических изменений, и самих многоядерных и бинуклеарных лимфоцитов. 

Тем не менее, вопрос о том несут ли двуядерные формы лимфоцитов признаки кариопатологического характера или нет, не однозначен, и вероятнее всего в каждой конкретной ситуации ответ на него будет различным. Конечно, учитывая вышеприведенные факты нельзя отрицать роль патологических процессов в образовании бинуклеарных лимфоцитов, но и проведение прямой аналогии с формированием двуядерных и полинуклеарных производных другого (например, макрофагального) происхождения вследствие реализации компенсаторно-приспособительных реакций [1] имеет право на существование, и забывать об этом на наш взгляд было бы неосмотрительно. 

Совершенно иную точку зрения можно выразить по поводу тесно взаимосвязанного с проблемой бинуклеарных форм феномена образования микроядер в лимфоцитах, поскольку регистрация таких структур, несомненно, свидетельствует о развитии кариопатологических изменений, и мы считаем вполне целесообразным уделить особое внимание данному вопросу, посвятив ему специальный раздел в рамках настоящего обзора. 

Достоверно известно, что микроядра являются небольшими структурами, образующимися в результате отставания хромосом и их фрагментов в процессе митотического деления [50]. Присутствие микроядер свидетельствует о повреждении хромосом [42]. Поэтому одним из наиболее эффективных методов, позволяющих определять указанные нарушения, следует считать микроядерный анализ [42]. Этот тест удобен при детектировании цитогенетических повреждений [54] и оценке степени цитогенетической нестабильности [4]. Полезен он и в качестве вспомогательного инструмента при изучении фундаментальных аспектов формирования микроядер, которое дает возможность судить о причинах их появления. 

Перечислим основные группы этиологических факторов, ответственных за образование микроядер. Возникновение микроядер в лимфоцитах может индуцироваться в результате влияния инфекционных агентов [15], развития онкологической патологии [78], воздействия радиации [39; 63] и химических соединений, обладающих мутагенной активностью [18]. Актуальность данных исследований детерминирована формированием микроядер в лимфоцитах при указанных обстоятельствах. 

Доказано, что действие инфекционных факторов вызывает повышение интенсивности образования микроядер в лимфоцитах [15], поэтому учет численности клеток, содержащих микроядра, способствует адекватному прогнозированию течения инфекционных заболеваний. Кроме того, показана различная частота встречаемости микроядер в лимфоцитах периферической крови у пациентов с онкологическими заболеваниями и у лиц, не имеющих данной патологии [78]. Возрастание активности формирования микроядер в лимфоцитах у таких пациентов свидетельствует о генетической нестабильности клеток [53] и может расцениваться как один из признаков развития онкологической патологии. 

Микроядерный анализ позволяет определять интенсивность влияния физических и химических факторов на степень повреждения хромосом [25]. Радиоактивное излучение вызывает увеличение частоты встречаемости клеток с микроядрами [39], поскольку индуцирует повреждение хромосом. Существуют результаты исследований, указывающие на индукцию микроядер в лимфоцитах в ответ на проведение лучевой терапии, при этом частота встречаемости микроядер зависит от выбранного метода лечения [41]. Интересно, что показана различная радиочувствительность у субпопуляций лимфоцитов (Т-хелперов и Т-супрессоров), морфологически выражающаяся в разной частоте встречаемости микроядер в этих клетках после воздействия радиации [63]. Приведем и другой пример. Отмечена индукция образования микроядер у натуральных киллеров (NK) и Т-лимфоцитов вследствие влияния гамма-излучения [54]. При этом формирование микроядер в большей степени индуцируется у NK клеток, чем у Т-лимфоцитов [54]. Логично предположить, что микроядерный анализ полезен для оценки чувствительности субпопуляций клеток к воздействию указанного фактора. 

Микроядерный тест, проводимый на лимфоцитах, с успехом применяется для определения степени влияния химических агентов, сопряженных с профессиональной деятельностью человека [49; 57; 81], поскольку действие токсических веществ приводит к закономерному увеличению количества микроядер в лимфоцитах [30]. Микроядерный анализ нередко применяется для тестирования химических соединений [34; 40]. При изучении токсических свойств вещества в ряде случаев требуется сравнительный анализ частоты встречаемости микроядер в лимфоцитах, полученных от генетически различных организмов [71]. Такие работы, например, дают информацию о генотипически обусловленной резистентности клеток по отношению к тому или иному этиологическому фактору. 

Известно, что некоторые вещества вызывают снижение интенсивности формирования микроядер в лимфоцитах, подвергшихся влиянию факторов, индуцирующих образование данных структур [72]. Это позволяет применять микроядерный анализ с использованием культуры лимфоцитов для тестирования веществ, обладающих протекторным действием на клетки, в которых появление микроядер было индуцировано мутагенами [18]. Выявление химических соединений, имеющих протекторную функцию, способствует расширению арсенала средств, используемых в экспериментальных и терапевтических целях. Другой точкой приложения означенного метода является тестирование фармацевтических препаратов на этапе доклинических испытаний и дополнительная проверка фармакологических средств, применяющихся в клинической практике. Целесообразность подхода объясняется активизацией формирования микроядер в лимфоцитах периферической крови в результате фармакотерапии [24] и возможным наличием мутагенных свойств у фармацевтических препаратов, что требует всестороннего изучения. 

Подводя итог обсуждения отмеченных проблем, следует сделать ряд обобщений. Итак, поскольку нарушение процесса митоза вследствие воздействия биологических, химических и физических факторов закономерно вызывает образование микроядер, то идентификация этих структур указывает на нестабильность функционирования клеток. Здесь необходимо подчеркнуть высокую эффективность регистрации лимфоцитов с микроядрами, являющуюся практически значимым методом диагностики заболеваний, а также позволяющую выявлять токсические и мутагенные свойства химических соединений. Изучение фундаментальных аспектов образования микроядер в лимфоцитах способствует расширению представлений об особенностях развития заболеваний и уточнению роли этиологических факторов в индукции патологических процессов. 

На данном пункте заканчивается рассмотрение первого комплекса очерченных выше задач для того, чтобы обратиться к другой сфере стоящих перед нами вопросов. Теперь мы изложим основополагающие моменты, характеризующие подмножества лимфоцитов и касающиеся особенностей их функционирования и взаимодействия. Это требуется для предварения предметного анализа роли лимфоцитов в патологических реакциях и, прежде всего, в формировании макрофагальных полинуклеаров, определяющих обстоятельства развития очагов хронического воспаления. 

Известно, что субпопуляции лимфоцитов включают NK, Т- и В-лимфоциты [55]. Причем имеется несколько субпопуляций Т-клеток [23]. В частности, среди Т-лимфоцитов выделяют Т-хелперы и Т-супрессоры [80]. Небезынтересно отметить существование возрастных и гендерных различий количественного состава субпопуляций лимфоцитов [80], которые необходимо учитывать при интерпретации результатов клинических и экспериментальных исследований. Напоминая эти хорошо известные данные, хочется подчеркнуть сложность и многогранность рассматриваемых вопросов, предопределяющиеся гетерогенностью клеточных типов объединенных понятием лимфоцитов и влиянием ряда условий, детерминирующих качественный и численный состав популяций указанных клеток. 

Другим кардинальным аспектом можно считать всю совокупность взаимосвязей, интегрирующих отдельные клеточные элементы в единое целое. Если Т- и В-клетки относятся к важнейшим компонентам иммунной системы, то уже на сам факт их кооперации [9] придется обратить внимание. Настоящее положение во многом объясняется сугубо прикладными интересами. Так, отмечена целесообразность изучения механизмов взаимодействия Т- и В-клеток, поскольку это способствует пониманию клинических и патологических проявлений отдельных заболеваний [9] и может содействовать адекватной диагностики и прогнозированию течения таковых. Кооперация Т- и В-лимфоцитов имеет и фундаментальное значение, определяющееся ролью указанных взаимодействий в реализации патологических и компенсаторно-приспособительных процессов, детерминирующих в том числе и формирование полинуклеарных производных, непосредственно участвующих в комплексе физиологических и патологических реакций. По всей видимости, это в немалой степени сопряжено со следующим обстоятельством. Кооперация между Т- и В-клетками существует для контроля иммунного ответа [36]. 

Однако не только кооперация лимфоцитов в иммунном ответе [85], но и назначение отдельных клеточных подмножеств небезынтересно в плане проблемы управления иммунными реакциями. Действительно, лимфоциты обладают регуляторными функциями, причем существуют регуляторные Т- и В-лимфоциты [36]. Описаны различные субпопуляции Т-клеток, контролирующих иммунные реакции посредством продукции цитокинов и образованием межклеточных контактов [36]. Попутно заметим, что участие Т-клеток в межклеточных взаимодействиях [47] заслуживает пристального внимания при рассмотрении базовых составляющих, образующих предмет нашей темы, о чем будет сказано в соответствующем разделе обзора литературы. 

Кроме того, и В-лимфоциты могут быть представлены различными субпопуляциями клеток, контролирующих развитие аутоиммунных и воспалительных заболеваний путем выработки некоторых цитокинов и вследствие формирования межклеточных контактов [36]. Следует также отметить, что В-лимфоциты продуцируют и антитела [36]. Данный аспект не получил должного развития в том смысле, что роль антител в процессах мультинуклеации практически не изучена, хотя ряд инфекционных агентов, являющихся индукторами продуцирования антител, относится к гранулемогенным факторам, обусловливающим формирование полинуклеарных производных (входящих в состав очагов хронического воспаления) и по-видимому обладающим кариопатологическим эффектом. 

Учитывая совокупность вышеизложенных сведений, касающихся специфики поведения лимфоцитов, перейдем к обсуждению их роли (преимущественно Т-клеток) в образовании гигантских многоядерных клеток и очагов хронического воспаления, в развитии которых мультинуклеары принимают непосредственное участие. Речь пойдет о таких гигантских полинуклеарах, как клетки инородных тел [1; 12], Лангханса [1; 58], Тутона [62; 86] и остеокласты [3; 35]. 

Обратим внимание на следующий факт. В некоторых типах очагов хронического воспаления вместе с клетками Лангханса и эпителиоидными клетками присутствуют Т- и В-лимфоциты [76], причем малоизученными остаются механизмы кооперации между клетками Лангханса и эпителиоидными клетками, содействующими активации Т-лимфоцитов [77]. Это заслуживает рассмотрения вследствие того, что в развитии гранулематозов отмечена роль Т-лимфоцитов иммунологической памяти [33; 48; 83]. Необходимо указать, что существует несколько механизмов иммунологической памяти, базирующихся на участии разных типов Т-хелперов, имеющих различное значение в формировании гранулематозов [20]. Попутно можно упомянуть об учете соотношения численности Т-хелперов и Т-супрессоров в качестве прогностического критерия при данных заболеваниях [31]. Однако поскольку иногда гранулемы формируются независимо от состояния Т-клеточного звена иммунитета [70], то интерес вызывает наличие взаимосвязи между угнетением функции В-лимфоцитов памяти и реализацией гранулематозных процессов [11]. 

При изучении вышеуказанных реакций наблюдаются затруднения, обусловленные комплексным характером клеточной кооперации, но несомненно, что в развитии очагов хронического воспаления участие лимфоцитов преимущественно детерминировано их регуляцией посредством медиаторов процесса слияния макрофагов (о чем будет сказано далее), на котором основано образование гигантских многоядерных клеток. Справедливо это и в отношении клеток Лангханса [1]. 

Теперь следует привести сведения о роли лимфоцитов в формировании других типов мультинуклеаров макрофагального происхождения. В частности, гигантские клетки Тутона встречаются совместно с лимфоцитами [66], при этом значение лимфоцитов, как продуцентов фузогенных медиаторов [64], скорее всего, состоит в обеспечении формирования полинуклеарных макрофагальных дериватов. Действительно, присутствие в ксантогранулеме вместе с лимфоцитами и гигантских многоядерных клеток, в том числе клеток Тутона [16], может быть объяснено продукцией лимфоцитами медиаторов [14], обеспечивающих клеточное слияние [56], определяющее образование многоядерных производных [1]. 

Не меньший интерес представляют данные о развитии гигантских клеток инородных тел и очагов хронического воспаления, содержащих таковые [5], в результате реализации межклеточной кооперации с участием лимфоцитов. В ходе взаимодействия с лимфоцитами у клеток инородных тел увеличивается степень выработки медиаторов [13]. Причем эти клетки являются источником провоспалительных цитокинов [13; 38], что детерминирует роль многоядерных производных в формировании очагов хронического воспаления. С другой стороны, Т-клетки также участвуют в гистогенезе воспалительного очага [61]. Например, лимфоциты активируют фузию макрофагов и к источникам цитокинов, индуцирующих этот процесс, вероятно, относятся Т-лимфоциты [64]. У лимфоцитов, взаимодействующих с макрофагами и гигантскими клетками инородных тел, возрастает продукция IFN-γ [14], играющего роль в обеспечении клеточного слияния [56]. Возможно, что данная причина обусловливает нахождение в тканях лимфоцитарных инфильтратов с клетками инородных тел [29]. 

Если при взаимодействии с клетками инородных тел происходит активация лимфоцитов, относящихся преимущественно к Т-клеткам [14], синтезирующим фузогенные медиаторы, то не исключено регулирование образования гигантских многоядерных форм, базирующееся на клеточной кооперации. Это тем более вероятно, что при взаимодействии с лимфоцитами у гигантских клеток инородных тел возрастает продукция таких цитокинов, как IL-1β и TNF-α [13]. Взаимная детерминированность процесса кооперации лимфоцитов и клеток инородных тел состоит в том, что изменение интенсивности синтеза фузогенных медиаторов, контролирующих формирование полинуклеаров, происходит у обоих участников взаимодействия, благодаря чему реализуется динамическая регуляция реакций мультинуклеации. 

Из приведенных фактов, в числе прочего, можно сделать вывод о приоритетном значении Т-лимфоцитов в образовании гигантских многоядерных клеток, присутствующих в очагах хронического воспаления, развитие которых со всей очевидностью обусловливают патологические процессы. Однако Т-лимфоциты являются также непременными участниками реакций формирования многоядерных клеток, относящихся к обычным тканевым составляющим. В связи с этим можно отметить роль активированных Т-клеток в регуляции остеокластогенеза [67]. В частности, продуцируемый Т-клетками IL-17 усиливает остеокластогенез, но поскольку IFN-γ подавляет данный процесс, то вряд ли клетки типа Th1 являются его стимуляторами [67]. Логично предположить, что отдельные субпопуляции Т-лимфоцитов имеют различные функции в регуляции образования остеокластов. 

Многие особенности участия лимфоцитов в обеспечении реакций формирования гигантских полинуклеаров в физиологических и патологических условиях нуждаются в подробном объяснении, но общность узловых компонентов этих процессов практически неоспорима, как и в известной мере, предопределяющее таковую единое макрофагальное происхождение описанных многоядерных производных. Получение информации о характере отношений лимфоцитов с макрофагами позволяет изучить специфику межклеточных взаимодействий, на которых базируется мультинуклеация макрофагальных дериватов, и подойти к пониманию наблюдаемых изменений у лимфоцитов в зависимости от сопутствующих обстоятельств. 

Например, при исследовании особенностей кооперации макрофагов с лимфоцитами в культурах перитонеальных клеток и спленоцитов нами было показано существование различий в ходе контактных взаимодействий лимфоцитов с макрофагами, детерминированных тканевой принадлежностью этих клеток и длительностью их инкубации in vitro. Вероятно, наличие контакта между макрофагами и лимфоцитами позволяло последним испытывать меньший дефицит в пластических и энергетических субстратах (донорами которых выступают макрофаги), что сказывалось на степени оптимизации течения внутриклеточных процессов у лимфоцитов и определялось по нашим данным меньшей интенсивностью развития у них кариопатологических нарушений. 

При рассмотрении межклеточных взаимодействий интересна и их роль в индукции амитоза. Необходимость в проведении таких исследований объясняется тем, что амитоз имеет значение для адекватного функционирования клеток [1; 75] и для формирования многоядерных макрофагов, являясь наряду с фузией другим механизмом образования полинуклеаров [1]. Изучение кооперации лимфоцитов с макрофагами позволяет уточнить роль межклеточных отношений в активизации амитоза у макрофагов. Нами было выявлено, что наличие контактов между макрофагами и лимфоцитами вызывает увеличение интенсивности амитотического деления ядер у макрофагов и отмечена генотипическая обусловленность индукции амитоза вследствие указанного взаимодействия in vitro. 

Поскольку предшественниками гигантских многоядерных клеток, принадлежащих к различным типам и участвующих в патологических и компенсаторно-приспособительных процессах, являются мононуклеарные макрофаги, то исследование изменений характера их функционирования вследствие модифицирующего влияния со стороны лимфоцитов следует признать целесообразным подходом, помогающим уже на этапе предшествующем формированию полинуклеаров видеть возможные пути их развития, детерминирующие структурно-функциональные особенности клеток. 

В завершении настоящего обзора хотелось бы не только подчеркнуть роль лимфоцитов в реализации патологических реакций и образовании полинуклеарных производных, но и выразить мнение о том, что бинуклеарные и многоядерные формы лимфоцитов занимают свое четко определенное место среди би- и полинуклеаров различного происхождения, а их изучение способствует развитию представлений об универсальном значении процессов мультинуклеации, наблюдаемых как в физиологических условиях, так и учитываемых при рассмотрении вопросов общей патологии. 

Поэтому особое внимание привлекают факты, свидетельствующие о наличие бинуклеаров в рамках нескольких субпопуляций лимфоцитов и о существовании указанных форм на отдельных этапах клеточной дифференцировки. Детальное изучение этих особенностей открывает перспективы в понимании роли процессов, составляющих фундамент развития некоторых заболеваний. Тогда как различная тканевая принадлежность двуядерных производных и их регистрация in vivo и in vitro позволяют провести оценку характера образования бинуклеаров в зависимости от условий формирования последних, помогая исследованию мультинуклеации лимфоцитов. 

Принципиально гетерогенные по своей природе факторы, являющиеся причинами формирования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов, запускают, вероятно, только один из фундаментальных механизмов образования полинуклеаров, состоящий в индукции патологических форм митоза. Он же детерминирует и образование микроядер в лимфоцитах независимо от их класса ядерности, который предопределяет численность микроядер в клетках. Однако конкретной причиной формирования полинуклеаров следует считать мультиполярный митоз, а образование микроядер, как правило, обусловлено отставанием хромосом и их фрагментов в ходе митотического деления. Впрочем, вряд ли тут можно говорить о каком-либо противоречии, поскольку именно клетки с высоким классом ядерности (сами являющиеся результатом мультиполярного митоза) в последующем часто имеют нарушения митотического процесса, в том числе и приводящие к формированию микроядер. Не будем забывать и о существовании комбинированных форм патологических митозов. В любом случае не вызывает сомнения наличие взаимосвязи реакций мультинуклеации и образования микроядер у лимфоцитов. Кроме того, как уже было отмечено индукция многополюсных митозов и процессов формирования микроядер вследствие какой-либо одной общей причины, заставляет предполагать присутствие единого механизма реализации этих реакций. 

Руководствуясь стремлением не допустить излишних повторов относительно темы микроядер, ограничимся замечаниями по поводу практической значимости регистрации названных структур и нашей заинтересованности фундаментальными аспектами местоположения клеток с микроядрами в проблеме полинуклеаров. В то же время в отличие от лимфоцитов с микроядрами, конечно несущими признаки кариопатологического характера, более серьезные затруднения возникают при попытке отнесения би- и полинуклеарных лимфоцитов к клеткам с подобными изменениями. Ведь здесь мы вынуждены еще и ориентироваться на сопутствующие условия, определяющие реализацию компенсаторно-приспособительных или патологических процессов. 

Разумеется, объективно ответить на множество возникающих вопросов невозможно без твердой опоры на комплекс высокоинформативных методов исследования. Вместе с тем результативность изучения процессов формирования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов детерминирована степенью соответствия методов анализа поставленным задачам и адекватностью выбора принципов моделирования реакций мультинуклеации in vitro или их исследования in vivo. С другой стороны, наличие нескольких субпопуляций лимфоцитов, участвующих в различных реакциях межклеточной кооперации, затрудняет постижение их роли в формировании гигантских многоядерных клеток, разнящихся как по классу ядерности и по своему структурному типу, так и по тканевой принадлежности, предопределяющей микроокружение и, следовательно, особенности образования указанных клеточных форм. 

Хотя доказано, что именно Т-лимфоциты способствуют клеточной фузии, на которой базируется образование гигантских макрофагальных полинуклеаров в патологических условиях. Есть также основания считать Т-лимфоциты регуляторами остеокластогенеза, но в последнем случае остается ряд не вполне уточненных моментов и возникают сомнения относительно как физиологического, так и патологического характера этих взаимодействий. Несмотря на успешное изучение роли Т-лимфоцитов в образовании макрофагальных полинуклеаров различных типов практически неизвестно значение В-лимфоцитов в реакциях мультинуклеации, но полностью исключить их участие в данном процессе невозможно и на это есть соответствующие косвенные указания. 

Более того, во многих отношениях не уточнен характер регуляции формирования многоядерных макрофагальных производных вследствие продукции цитокинов лимфоцитами и их контактных взаимодействий с клетками предшественниками полинуклеаров. Поэтому особый смысл приобретает исследование кооперации последних с отдельными субпопуляциями лимфоцитов. Поскольку и сами лимфоциты служат объектом влияния со стороны клеток, составляющих их микроокружение (в том числе полинуклеаров и их предшественников) и модифицирующих активность лимфоцитов, то трудности в изучении этих процессов даже без привязки к конкретным условиям, наблюдаемым, например, в очаге хронического воспаления, или к типу формирующихся полинуклеаров, становятся понятными со всей ясностью. 

Кроме того, при обсуждении вышеуказанных аспектов мы даже не затрагиваем вопросы образования полинуклеаров немакрофагального происхождения в ходе кооперации их предшественников с субпопуляциями лимфоцитов, но лишь упоминаем о возможности таковой для иллюстрации невероятной сложности настоящей проблемы и подчеркиваем необходимость комплексного подхода при решении подобных задач. Придется признать, что отрывочные сведения о мультинуклеации у тех или иных популяций лимфоцитов и об их роли в образовании многоядерных производных различного происхождения не дают нам исчерпывающего ответа. 

Все же предположим, что достижение успеха в решении большинства отмеченных задач, постановку которых уже можно считать первоначальным этапом изучения актуальных аспектов участия лимфоцитов в мультинуклеации, позволит использовать накопленную, обобщенную и систематизированную информацию для разработки перспективных методов диагностики и коррекции заболеваний, имеющих в основе своего развития реакции образования многоядерных клеток, детерминирующие реализацию последующих патологических процессов. 

Тогда как в концептуальном плане наибольший интерес вызывают проблемы формирования и функционирования бинуклеарных и многоядерных лимфоцитов в зависимости от условий их существования и положение этих клеток в ряду би- и полинуклеарных производных иного происхождения, что может содействовать созданию современной классификации многоядерных клеток и стать значительным вкладом в разработку полинуклеарной теории. 

Список литературы: 

1. Ильин Д.А. Многоядерные макрофаги. - Новосибирск: Наука, 2011. - 56 с. 

2. Ильинских И.Н., Новицкий В.В., Ильинских Е.Н., Ильинских Н.Н., Ткаченко С.Б. Инфекционная кариопатология / Под ред. Н.Н. Ильинских. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 2005. - 168 с. 

3. Abe K. Cells of bone tissues // Clin. Calcium. - 2003. - V. 13. - № 4. - P. 399-404. 

4. Abou-Eisha A. Evaluation of cytogenetic and DNA damage induced by the antibacterial drug, trimethoprim // Toxicol. In Vitro. - 2006. - V. 20. - № 5. - Р. 601-607. 

5. Akbulut M., Utku Y., Soysal S. Lipogranuloma of the cervix in a postmenopausal patient with a uterine prolapse // Arch. Gynecol. Obstet. - 2008. - V. 277. - № 3. - P. 277-279. 

6. Arsoy N.S., Neuss S., Wessendorf S., Bommer M., Viardot A., Schьtz P., Speit G. Micronuclei in peripheral blood from patients after cytostatic therapy mainly arise ex vivo from persistent damage // Mutagenesis. - 2009. - V. 24. - № 4. - P. 351-357. 

7. Bajic V., Spremo-Potparevic B., Milicevic Z., Zivkovic L. Deregulated sequential motion of centromeres induced by antitumor agents may lead to genome instability in human peripheral blood lymphocytes // J. BUON. - 2007. - V. 12. - № 1. - P. 77-83. 

8. Beetstra S., Salisbury C., Turner J., Altree M., McKinnon R., Suthers G., Fenech M. Lymphocytes of BRCA1 and BRCA2 germ-line mutation carriers, with or without breast cancer, are not abnormally sensitive to the chromosome damaging effect of moderate folate deficiency // Carcinogenesis. - 2006. - V. 27. - № 3. - Р.517-524. 

9. Besliu A., Banica L., Predeteanu D., Vlad V., Ionescu R., Pistol G., Opris D., Berghea F., Stefanescu M., Matache C. Peripheral blood lymphocytes analysis detects CD100/SEMA4D alteration in systemic sclerosis patients // Autoimmunity. - 2011. - V. 44. - № 5. - P. 427-436. 

10. Bilban-Jakopin C. Chromosomal changes in somatic cells in seminoma patients after treatment with ionizing radiation or cytostatics // Neoplasma. - 2000. - V. 47. - № 1. - P. 48-55. 

11. Bleesing J.J., Souto-Carneiro M.M., Savage W.J., Brown M.R., Martinez C., Yavuz S., Brenner S., Siegel R.M., Horwitz M.E., Lipsky P.E., Malech H.L., Fleisher T.A. Patients with chronic granulomatous disease have a reduced peripheral blood memory B cell compartment // J. Immunol. - 2006. - V. 176. - № 11. - P. 7096-7103. 

12. Brodbeck W.G., Shive M.S., Colton E., Ziats N.P., Anderson J.M. Interleukin-4 inhibits tumor necrosis factor-alpha-induced and spontaneous apoptosis of biomaterial-adherent macrophages // J. Lab. Clin. Med. - 2002. - V. 139. - № 2. - P. 90-100. 

13. Chang D.T., Colton E., Anderson J.M. Paracrine and juxtacrine lymphocyte enhancement of adherent macrophage and foreign body giant cell activation // J. Biomed. Mater. Res. A. - 2009. - V. 89. - № 2. - P. 490-498. 

14. Chang D.T., Colton E., Matsuda T., Anderson J.M. Lymphocyte adhesion and interactions with biomaterial adherent macrophages and foreign body giant cells // J. Biomed. Mater. Res. A. - 2009. - V. 91. - № 4. - P. 1210-1220. 

15. Chieco-Bianchi L., Saggioro D., Del Mistro A., Montaldo A., Majone F., Levis A.G. Chromosome damage induced in cord blood T-lymphocytes infected in vitro by HTLV-I // Leukemia. - 1988. - V. 2. - № 12. - Р. 223-232. 

16. DeStafeno J.J., Carlson J.A., Meyer D.R. Solitary spindle-cell xanthogranuloma of the eyelid // Ophthalmology. - 2002. - V. 109. - № 2. - P. 258-261. 

17. Duffaud F., Orsiиre T., Digue L., Favre R., Botta A. Importance of micronucleus tests in cultured binuclear T lymphocytes for the detection of genotoxic events in cancer patients // Bull. Cancer. - 1998. - V. 85. - № 3. - P. 267-271. 

18. Fimognari C., Berti F., Cantelli-Forti G., Hrelia P. Effect of sulforaphane on micronucleus induction in cultured human lymphocytes by four different mutagens // Environ. Mol. Mutagen. - 2005. - V. 46. - № 4. - Р. 260-267. 

19. Fimognari C., Berti F., Nusse M., Cantelli-Fortii G., Hrelia P. In vitro anticancer activity of cyanidin-3-O-beta-glucopyranoside: effects on transformed and non-transformed T lymphocytes // Anticancer Res. - 2005. - V. 25. - № 4. - Р. 2837-2840. 

20. Freeman C.M., Stolberg V.R., Chiu B.C., Lukacs N.W., Kunkel S.L., Chensue S.W. CCR4 participation in Th type 1 (mycobacterial) and Th type 2 (schistosomal) anamnestic pulmonary granulomatous responses // J. Immunol. - 2006. - V. 177. - № 6. - Р. 4149-4158. 

21. Gajski G., Garaj-Vrhovac V., Orescanin V. Cytogenetic status and oxidative DNA-damage induced by atorvastatin in human peripheral blood lymphocytes: standard and Fpg-modified comet assay // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2008. - V. 231. - № 1. - P. 85-93. 

22. Garaj-Vrhovac V., Gajski G., Ravliж S. Efficacy of HUMN criteria for scoring the micronucleus assay in human lymphocytes exposed to a low concentration of p,p'-DDT // Braz. J. Med. Biol. Res. - 2008. - V. 41. - № 6. - P. 473-476. 

23. Genster N., Ma Y.J., Munthe-Fog L., Garred P. The pattern recognition molecule ficolin-1 exhibits differential binding to lymphocyte subsets, providing a novel link between innate and adaptive immunity // Mol. Immunol. - 2014. - V. 57. - № 2. - P. 181-190. 

24. Grujicic D., Milosevic Djordjevic O., Arsenijevic S., Marinkovic D. The effect of combined therapy with ritodrine, erythromycin and verapamil on the frequency of micronuclei in peripheral blood lymphocytes of pregnant women // Clin. Exp. Med. - 2007. - V. 7. - № 1. - Р. 11-15. 

25. Hamurcu Z., Demirtas H., Ascioglu O., Donmez-Altuntas H., Aktas E. Micronucleus evaluation in mitogen-stimulated lymphocytes of PUVA treated patients // Tohoku J. Exp. Med. - 2002. - V. 198. - № 1. - Р. 11-21. 

26. Hartweg H., Schmitt H.E., Renner K. Studies on the behavior of binuclear lymphocytes following radiotherapy // Strahlentherapie. - 1967. - V. 133. - № 2. - P. 245-251. 

27. Hauser A., Schrattbauer K., Najdanovic D., Schlossnickel R., Koch A., Hejtman M., Krugluger W. Optimized quantification of lymphocyte subsets by use of CD7 and CD33 // Cytometry A. - 2013. - V. 83. - № 3. - P. 316-323. 

28. Henrich R.T., Nogawa T., Morishima A. In vitro induction of segregational errors of chromosomes by natural cannabinoids in normal human lymphocytes // Environ. Mutagen. - 1980. - V. 2. - № 2. - P. 139-147. 

29. Holzapfel A.M., Mangat D.S., Barron D.S. Soft-tissue augmentation with calcium hydroxylapatite: histological analysis // Arch. Facial. Plast. Surg. - 2008. - V. 10. - № 5. - P. 335-338. 

30. Huen K., Gunn L., Duramad P., Jeng M., Scalf R., Holland N. Application of a geographic information system to explore associations between air pollution and micronucleus frequencies in African American children and adults // Environ. Mol. Mutagen. - 2006. - V. 47. - № 4. - Р. 236-246. 

31. Hunninghake G.W., Crystal R.G. Pulmonary sarcoidisis: a disorder mediated by excess helper T-lymphocytes activity at sites of disease activity // N. Engl. J. Med. - 1981. - V. 305. - № 8. - P. 429-434. 

32. Ibrulj S., Duriciж E. Genotoxicity of oxazepam--the micronucleus cytochalasin-B test // Med. Arh. - 2002. - V. 56. - № 2. - P. 61-64. 

33. Ichiyasu H., Suga M., Iyonaga K., Ando M. Role of monocyte chemoattractant protein-1 in Propionibacterium acnes-induced pulmonary granulomatosis // Microsc. Res. Tech. - 2001. - V. 53. - № 4. - Р. 288-297. 

34. Islas-Gonzalez K., Gonzalez-Horta C., Sanchez-Ramirez B., Reyes-Aragon E., Levario-Carrillo M. In vitro assessment of the genotoxicity of ethyl paraoxon in newborns and adults // Hum. Exp. Toxicol. - 2005. - V. 24. - № 6. - Р. 319-324. 

35. Iwai K., Koike M., Ohshima S., Miyatake K., Uchiyama Y., Saeki Y., Ishii M. RGS18 acts as a negative regulator of osteoclastogenesis by modulating the acid-sensing OGR1/NFAT signaling pathway // J. Bone Miner. Res. - 2007. - V. 22. - № 10. - P. 1612-1620. 

36. Jamin C., Achour A., Youinou P., Pers J.O. Regulatory lymphocytes: A new cooperation between T and B cells for a better control of the immune response // Presse. Med. - 2014. - V. 43. - № 1. - P. 18-26. 

37. Joksiж G., Markoviж B. Cytogenetic changes in persons exposed to polychlorinated biphenyls // Arh. Hig. Rada Toksikol. - 1992. - V. 43. - № 1. - P. 29-35. 

38. Jones J.A., Chang D.T., Meyerson H., Colton E., Kwon I.K., Matsuda T., Anderson J.M. Proteomic analysis and quantification of cytokines and chemokines from biomaterial surface-adherent macrophages and foreign body giant cells // J. Biomed. Mater. Res. A. - 2007. - V. 83. - № 3. - P. 585-596. 

39. Kang C.M., Lee H.J., Ji Y.H., Kim T.H., Ryu S.Y., Kim S.R., Jo S.K., Kim J.C., Kim S.H. A cytogenetic study of Korean native goat bred in the nuclear power plant using the micronucleus assay // J. Radiat. Res. - 2005. - V. 46. - № 2. - Р. 283-287. 

40. Kim B.M., Choi J.Y., Kim Y.J., Woo H.D., Chung H.W. Desferrioxamine (DFX) has genotoxic effects on cultured human lymphocytes and induces the p53-mediated damage response // Toxicology. - 2007. - V. 229. - № 3. - Р. 226-235. 

41. Kinashi Y., Sakurai Y., Masunaga S., Suzuki M., Nagata K., Ono K. Evaluation of Micronucleus Induction in Lymphocytes of Patients Following Boron-Neutron-Capture-Therapy: A Comparison with Thyroid Cancer Patients treated with radioiodine // J. Radiat. Res. - 2007. - V. 48. - № 3. - Р. 197-204. 

42. Kirsch-Volders M., Fenech M. Inclusion of micronuclei in non-divided mononuclear lymphocytes and necrosis/apoptosis may provide a more comprehensive cytokinesis block micronucleus assay for biomonitoring purposes // Mutagenesis. - 2001. - V. 16. - № 1. - Р. 51-58. 

43. Kocaman A.Y., Topaktaє M. Genotoxic effects of a particular mixture of acetamiprid and alpha-cypermethrin on chromosome aberration, sister chromatid exchange, and micronucleus formation in human peripheral blood lymphocytes // Environ. Toxicol. - 2010. - V. 25. - № 2. - P. 157-168. 

44. Kojima M., Murayama K., Igarashi T., Masawa N., Shimano S., Nakamura S. Bone marrow plasmacytosis in idiopathic plasmacytic lymphadenopathy with polyclonal hyperimmunoglobulinemia: a report of four cases // Pathol. Res. Pract. - 2007. - V. 203. - № 11. - P. 789-794. 

45. Kopjar N., Garaj-Vrhovac V., Kasuba V., Rozgaj R., Ramiж S., Pavlica V., Zeljeziж D. Assessment of genotoxic risks in Croatian health care workers occupationally exposed to cytotoxic drugs: a multi-biomarker approach // Int. J. Hyg. Environ. Health. - 2009. - V. 212. - № 4. - P. 414-431. 

46. Kopjar N., Kasuba V., Miliж M., Rozgaj R., Zeljeziж D., Gajski G., Mladiniж M., Garaj-Vrhovac V. Normal and cut-off values of the cytokinesis-block micronucleus assay on peripheral blood lymphocytes in the Croatian general population // Arh. Hig. Rada Toksikol. - 2010. - V. 61. - № 2. - P. 219-234. 

47. Kroeger D.R., Rudulier C.D., Peters N.C., Bretscher P.A. Direct demonstration of CD4 T cell cooperation in the primary in vivo generation of CD4 effector T cells // Int. Immunol. - 2012. - V. 24. - № 8. - P. 519-527. 

48. Law K.F., Jagirdar J., Weiden M.D., Bodkin M., Rom W.N. Tuberculosis in HIV-positive patients: cellular response and immune activation in the lung // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. - 1996. - V. 153. - № 4. - Р. 1377-1384. 

49. Lewinska D., Palus J., Stepnik M., Dziubaltowska E., Beck J., Rydzynski K., Natarajan A.T., Nilsson R. Micronucleus frequency in peripheral blood lymphocytes and buccal mucosa cells of copper smelter workers, with special regard to arsenic exposure // Int. Arch. Occup. Environ. Health. - 2007. - V. 80. - № 5. - Р. 371-380. 

50. Lindberg H.K., Wang X., Jarventaus H., Falck G.C., Norppa H., Fenech M. Origin of nuclear buds and micronuclei in normal and folate-deprived human lymphocytes // Mutat. Res. - 2007. - V. 617. - № 1-2. - Р. 33-45. 

51. Lindholm C., Norppa H., Hayashi M., Sorsa M. Induction of micronuclei and anaphase aberrations by cytochalasin B in human lymphocyte cultures // Mutat. Res. - 1991. - V. 260. - № 4. - P. 369-375. 

52. Liu L.L., Chao P.L., Zhang H.L., Tong M.L., Liu G.L., Lin L.R., Su Y.H., Wu J.Y., Dong J., Zheng W.H., Yang T.C. Analysis of lymphocyte subsets in HIV-negative neurosyphilis patients // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2013. - V. 75. - № 2. - P. 165-168. 

53. Lou J., He J., Zheng W., Jin L., Chen Z., Chen S., Lin Y., Xu S. Investigating the genetic instability in the peripheral lymphocytes of 36 untreated lung cancer patients with comet assay and micronucleus assay // Mutat. Res. - 2007. - V. 617. - № 1-2. - Р. 104-110. 

54. Louagie H., Philippй J., Vral A., Cornelissen M., Thierens H., De Ridder L. Induction of micronuclei and apoptosis in natural killer cells compared to T lymphocytes after gamma-irradiation // Int. J. Radiat. Biol. - 1998. - V. 73. - № 2. - P. 179-185. 

55. Mazzoccoli G., Sothern R.B., Parrella P., Muscarella L.A., Fazio V.M., Giuliani F., Polyakova V., Kvetnoy I.M. Comparison of circadian characteristics for cytotoxic lymphocyte subsets in non-small cell lung cancer patients versus controls // Clin. Exp. Med. - 2012. - V. 12. - № 3. - P. 181-194. 

56. Most J., Neumaer H.P., Dierich M.P. Cytokine-induced generation of multinucleated giant cells in vitro reguires interferon- and expression of LFA-1 // Eur. J. Immunol. - 1990. - V. 20. - № 8. - Р. 1661-1667. 

57. Murray E.B., Edwards J.W. Differential induction of micronuclei in peripheral lymphocytes and exfoliated urothelial cells of workers exposed to 4,4'-methylenebis-(2-chloroaniline) (MOCA) and bitumen fumes // Rev. Environ. Health. - 2005. - V. 20. - № 3. - Р. 163-176. 

58. Nordborg C., Nordborg E., Petursdottir V. The pathogenesis of giant cell arteritis: morphological aspects // Clin. Exp. Rheumatol. - 2000. - V. 18. - № 4. - P. 18-21. 

59. Oh E., Lee E., Im H., Kang H.S., Jung W.W., Won N.H., Kim E.M., Sul D. Evaluation of immuno- and reproductive toxicities and association between immunotoxicological and genotoxicological parameters in waste incineration workers // Toxicology. - 2005. - V. 210. - № 1. - P. 65-80. 

60. Oh E., Im H., Kang H.S., Jung W., Won N.H., Lee E., Sul D. Comparison of immunnological and genotoxicological parameters in automobile emission inspectors exposed to polycyclic aromatic hydrocarbons // Environ. Toxicol. Pharmacol. - 2006. - V. 21. - № 1. - P. 108-117. 

61. Ohtsuki Y., Miyazaki J., Kamei Y., Yonezawa M., Sugamoto T., Furihata M. Three cases of sclerosing lipogranuloma: an immunohistochemical study // Med. Mol. Morphol. - 2007. - V. 40. - № 2. - P. 108-111. 

62. Patrizi A., Neri I., Bianchi F., Guerrini V., Misciali C., Paone G., Burnelli R. Langerhans cell histiocytosis and juvenile xanthogranuloma. Two case reports // Dermatology. - 2004. - V. 209. - № 1. - P. 57-61. 

63. Petcu I., Savu D., Thierens H., Nagels G., Vral A. In vitro radiosensitivity of peripheral blood lymphocytes in multiple sclerosis patients // Int. J. Radiat. Biol. - 2006. - V. 82. - № 11. - Р. 793-803. 

64. Rodriguez A., Macewan S.R., Meyerson H., Kirk J.T., Anderson J.M. The foreign body reaction in T-cell-deficient mice // J. Biomed. Mater. Res. A. - 2009. - V. 90. - № 1. - P. 106-113. 

65. Roy-Taranger M., Mayaud G., Davydoff-Alibert S. Binuclear lymphocytes in the blood of individuals irradiated by a low dose // Rev. Fr. Etud. Clin. Biol. - 1965. - V. 10. - № 9. - P. 958-965. 

66. Satchi K., Loughnan M.S., McKelvie P.A., McNab A.A. Bilateral epibulbar xanthomas--a case report // Cornea. - 2010. - V. 29. - № 2. - P. 225-227. 

67. Sato K., Takayanagi H. Regulation of osteoclastogenesis by activated T cells // Nippon. Rinsho. - 2005. - V. 63. - № 9. - P. 1529-1532. 

68. Sawant S.G., Couch D.B. Induction of micronuclei in murine lymphocytes by morphine // Environ. Mol. Mutagen. - 1995. - V. 25. - № 4. - P. 279-283. 

69. Schmid O., Speit G. Genotoxic effects induced by formaldehyde in human blood and implications for the interpretation of biomonitoring studies // Mutagenesis. - 2007. - V. 22. - № 1. - Р. 69-74. 

70. Simpson L.O., Blennerhassett J.B., Browett P.J., Newhok C.J. Pseudo-lymphocyte monocytes - the memory cells responsible for the development of epithelioid cell granulomata. A new hypothesis // Pathology. - 1981. - V. 13. - № 3. - P. 557-569. 

71. Steiblen G., Orsiere T., Pallen C., Botta A., Marzin D. Comparison of the relative sensitivity of human lymphocytes and mouse splenocytes to two spindle poisons // Mutat. Res. - 2005. - V. 588. - № 2. - Р. 143-151. 

72. Sudheer A.R., Muthukumaran S., Devipriya N., Menon V.P. Ellagic acid, a natural polyphenol protects rat peripheral blood lymphocytes against nicotine-induced cellular and DNA damage in vitro: with the comparison of N-acetylcysteine // Toxicology. - 2007. - V. 230. - № 1. - Р. 11-21. 

73. Sun Y., Sun Y., Lin G., Zhang R., Zhang K., Xie J., Wang L., Li J. Multicolor flow cytometry analysis of the proliferations of T-lymphocyte subsets in vitro by EdU incorporation // Cytometry A. - 2012. - V. 81. - № 10. - P. 901-909. 

74. Tanaka K., Tchaijunusova N.J., Takatsuji T., Gusev B.I., Sakerbaev A.K., Hoshi M., Kamada N. High incidence of micronuclei in lymphocytes from residents of the area near the Semipalatinsk nuclear explosion test site // J. Radiat. Res. (Tokyo). - 2000. - V. 41. - № 1. - P. 45-54. 

75. Tang N., Li C., Xu J. Experimental study on regenerative capacity and form of corneal endothelial cells in the primate // Zhonghua Yan Ke Za Zhi. - 1998. - V. 34. - № 1. - P. 28-30. 

76. Tani-Ishii N., Osada T., Watanabe Y., Umemoto T. Histological findings of human leprosy periapical granulomas // J. Endod. - 1996. - V. 22. - № 3. - P. 120-122. 

77. Turk J.L. The mononuclear phagocyte system in granulomas // Br. J. Dermatol. - 1985. - V. 113. - S. 28. - Р. 49-54. 

78. Varga D., Hoegel J., Maier C., Jainta S., Hoehne M., Patino-Garcia B., Michel I., Schwarz-Boeger U., Kiechle M., Kreienberg R., Vogel W. On the difference of micronucleus frequencies in peripheral blood lymphocytes between breast cancer patients and controls // Mutagenesis. - 2006. - V. 21. - № 5. - Р. 313-320. 

79. Wang D.X., Lu X., Zu N., Lin B., Wang L.Y., Shu X.M., Ma L., Wang G.C. Clinical significance of peripheral blood lymphocyte subsets in patients with polymyositis and dermatomyositis // Clin. Rheumatol. - 2012. - V. 31. - № 12. - P. 1691-1697. 

80. Wong W.S., Lo A.W., Siu L.P., Leung J.N., Tu S.P., Tai S.W., Lam S.C., Wong K.F. Reference ranges for lymphocyte subsets among healthy Hong Kong Chinese adults by single-platform flow cytometry // Clin. Vaccine Immunol. - 2013. - V. 20. - № 4. - P. 602-606. 

81. Xing C.H., Ji Z.Y., Li G.L., Yin S.N. Study on repair capacity of DNA damage associated with chronic benzene poisoning // Wei Sheng Yan Jiu. - 2006. - V. 35. - № 4. - Р. 423-425. 

82. Xu S.J., Wang J.X., Yang D.P. An investigation on the chromosomal damage in nurses occupationally exposed to antineoplastic drugs // Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi. - 2003. - V. 37. - № 2. - P. 119-120. 

83. Yamaguchi E. Studies on the responsiveness of alveolar T cells to proliferative stimuli and on surface antigens // Hokkaido Igaku Zasshi. - 1993. - V. 68. - № 2. - Р. 224-236. 

84. Yan X., Zhao X., Jiao S.C., Hu Y., Sun S.J., Wu L.L., Wu Z.Y. Detection of T lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with advanced lung adenocarcinoma // Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao. - 2012. - V. 34. - № 3. - P. 234-238. 

85. Їelazowska-Rutkowska B., Wysocka J., Ratomski K., Kasprzycka E., Skotnicka B. Increased percentage of T cells with the expression of CD127 and CD132 in hypertrophic adenoid in children with otitis media with effusion // Eur. Arch. Otorhinolaryngol. - 2012. - V. 269. - № 7. - P. 1821-1825. 

86. Zelger B.W., Sidoroff A., Orchard G., Cerio R. Non-Langerhans cell histiocytoses. A new unifying concept // Am. J. Dermatopathol. - 1996. - V. 18. - № 5. - P. 490-504.