Челябинская Государственная Медицинская Академия

Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 2), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

Организм представляет собой систему, элементами которой являются клетки. Одним из свойств этой системы является ее смерть. Смерть организма - постепенно протекающий процесс, который имеет как свои особенности при различной патологии, так и некоторые общие закономерности. На современном этапе развития науки пришло понимание, что организм как целое перестает существовать раньше прекращения жизнедеятельности каждой из своих частей. Таким образом, биологическая система гибнет как система раньше, чем полностью истощаются материальные ресурсы ее составных элементов [4].
Установление давности наступления смерти входит в число самых актуальных проблем судебной медицины. Одним из основных направлений в разработке данной проблемы является развитие лабораторных исследований посмертных процессов, протекающих в органах, тканях и жидкостях [1,3,5]. Полученные, таким образом, результаты, наряду с показателями традиционных методов оценки давности наступления смерти, могут быть использованы для решения вопроса о времени, прошедшем после наступления смерти. Целью исследования явилось изучение зависимости изменения некоторых параметров (процентного содержания нейтрофилов крови и их функциональной активности) от давности наступления смерти организма.
Материалы и методы исследования. 
Исследования выполнены на  белых нелинейных лабораторных крысах обоего пола весом 170-280 грамм. Эвтаназия осуществлялась путем погружения животных в глубокий медикаментозный наркоз с последующей декапитацией. Трупы  крыс находились при температуре окружающей среды 16-21 С. Кровь забирали из полостей сердца шприцем, предварительно смоченным в растворе гепарина (500 ЕД/мл). Забор осуществляли сразу и через 3,6,18,24,48 часов после гибели животного.
Подсчет абсолютного числа лейкоцитов крови осуществлялся по общепринятой методике в камере Горяева. Определение процентного содержания фракций лейкоцитов крови проводилось путем подсчета этих фракций в мазке крови. Фагоцитарная функция нейтрофилов крови исследовалась по общепринятой методике [2] с использованием взвеси стандартных частиц полистирольного монодисперсного латекса диаметром 1,7 мкм (получен из НИИ синтетического каучука, Санкт-Петербург) в концентрации 108 частиц/мл. Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма осуществлялась с помощью спонтанного и индуцированного тестов восстановления нитросинего тетразолия [2]. 
Полученные результаты и их обсуждение.
В результате проведенных серий исследований, сразу после наступления смерти особи и через 3,6,18,24,48 часов от момента наступления смерти организма, были получены ниже приведенные результаты. В таблице 1 представлены средние значения и стандартные отклонения следующих показателей: число лейкоцитов крови в 1 литре, процент нейтрофильных лейкоцитов крови, отношение нейтрофильных лейкоцитов к лимфоцитам крови. Так же в этой таблице представлены показатели функциональной активности нейтрофилов. Фагоцитарная функция оценивалась по активности фагоцитоза и интенсивности фагоцитоза. Оценка внутриклеточного кислородзависимого метаболизма определялась с помощью спонтанного и индуцированного НСТ-теста и функционального резерва нейтрофилов (частного от деления показателей индуцированного и спонтанного НСТ-теста).

Таблица 1.

Иммунные показатели трупной крови в зависимости от давности наступления смерти. (Х±δ)

Из представленных результатов следует, что в посмертном периоде наблюдаются определенные изменения исследованных иммунных показателей крови.
А именно, происходит постепенное снижение процентного содержания нейтрофильных лейкоцитов трупной крови и соотношения нейтрофилов крови к лимфоцитам крови в течение первых двух суток после наступления смерти. К 48 часам от момента наступления смерти наблюдается почти полное исчезновение нейтрофилов  в трупной крови, забранной из полостей сердца животных.
Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов трупной крови постепенно и планомерно снижается с увеличением сроков от момента наступления смерти. Причем наиболее сильное падение показателей фагоцитарной активности происходит в первые сутки с момента наступления смерти.
Тест с нитросиним тетразолием показал, что в первые шесть часов с момента наступления смерти имеет место повышение уровня внутриклеточного кислородзависимого метаболизма. Далее происходит его снижение, и к концу первых суток интенсивность спонтанного и индуцированного НСТ-тестов почти во всех исследованиях была рана нулю.
На втором этапе данные были подвергнуты статистической обработке с использованием пакета статистических программ “Statistica, version 6.0” компании StatSoft, Inc. Для статистического анализа параметров были выбраны непараметрические методы исследования. Сначала статистический анализ осуществлялся с использованием критерия Крускала-Уоллиса (сравнение нескольких независимых групп). Сравнивались значения исследованных параметров, разбитых на группы в зависимости от времени прошедшего с момента наступления смерти организма.
В итоге, были получены следующие результаты:
Для следующих показателей – процент нейтрофильных лейкоцитов крови, отношение нейтрофилов к лимфоцитам крови, активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, интенсивность спонтанного и индуцированного НСТ-теста и функциональный резерв нейтрофилов, выявлены статистически значимые различия между группами исследований в зависимости от времени забора крови после наступления смерти организма (для р<0,05).
Для показателя - абсолютного числа лейкоцитов в единице объема крови, не выявлено статистически значимых различий между группами исследований в зависимости от времени забора крови после наступления смерти организма (для р>0,05).
Дальнейший анализ зависимости изменения иммунологических показателей от давности наступления смерти проходил с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена. В результате было выявлено: процент нейтрофильных лейкоцитов крови - -0,71, отношение нейтрофильных лейкоцитов к лимфоцитам крови - -0,71, активность фагоцитоза - -0,93, интенсивность фагоцитоза – -0,92, интенсивность спонтанного НСТ-теста - -0,51, интенсивность индуцированного НСТ-теста - -0,64 (для р<0,05).
Приведенные данные позволяют сделать вывод о наличии обратной зависимости между изменениями величин исследованных показателей и давностью наступления смерти, то есть с увеличением срока, прошедшего с момента наступления смерти, происходит снижение значений изученных иммунологических показателей. Однако, зависимость между давностью наступления смерти и изменением изученных параметров не является линейной, а подчиняется более сложным математическим законам.
Таким образом, после наступления биологической смерти в иммунной системе происходят существенные изменения, динамика которых находится в зависимости от давности наступления смерти.
Использование иммунологических методов исследования дает возможность решать вопрос о давности наступления смерти в первые двое суток.
Методики исследования просты, не требуют применения дорогостоящей аппаратуры и могут быть использованы в лаборатории любого бюро судебно-медицинской экспертизы. Однако, для внедрения иммунологических методов исследования в современную судебно-медицинскую практику (для определения давности наступления смерти) необходимы более полные и всесторонние исследования.

Список литературы:
1.    Авакян А.А., Алавердян М.И. Морфологическая картина белой крови и фагоцитарная активность лейкоцитов у трупов. – В кн.: Сборник трудов кафедры судебной медицины I Ленинградского медицинского института, № 2. Л., 1958., С. 83-86.
2.    Долгушин И.И., Бухарин О.В. Нейтрофилы и гомеостаз. – Екатеринбург: УрО РАН, 2001.
3.    Кадиев Б.Б. Установление давности наступления смерти по динамике посмертных изменений в форменных элементах крови. // Судебно-медицинская экспертиза. - 1987. - №1. – С. 14-17.
4.    Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (Апоптоз). – М.: Медицина, 2001 г.