В настоящее время актуальным направлением медицины является исследование модуляции апоп-тоза как основного звена патогенеза многих заболеваний, в том числе и персистентных вирусных инфекций [1]. Одна из ведущих ролей в реализации программированной клеточной гибели принадлежит митохондриям. Так, дефект митохондриального пути является одной из причин повышенной жизнеспособности инфицированных вирусом клеток, что приводит к хронизации процесса и обуславливает недостаточную эффективность терапии. Вирус клещевого энцефалита (ВКЭ) также способен модулировать программированную клеточную гибель и тем самым вызывать длительную персистенцию в организме человека [2]. В регуляции митохондрийзависимого апоптоза принимают участие проапоп-тотические и антиапоптотические белки семейства Bcl-2, которые могут стать мишенью действия вирусных агентов. В связи с этим целью настоящего исследования явилось установление особенностей реализации митохондриального пути апоптоза лимфоцитов крови при клещевом энцефалите (КЭ).

В программу исследования были включены 51 пациент (27 женщин и 24 мужчин) в возрасте от 20 до 45 лет: 30 больных с острой лихорадочной формой КЭ легкой или умеренной степени тяжести, а также 21 пациент с длительной персистенцией ВКЭ (хроническое (более 6 мес.) течение). Верификация диагноза КЭ устанавливалась путем сбора эпидемиологического анамнеза, оценки неврологического статуса и проведения лабораторных методов исследования. Все пациенты были обследованы до начала лечения. В контрольную группу были включены 25 здоровых доноров (10 мужчин и 15 женщин) с аналогичными характеристиками по полу и возрасту. Исследовали стабилизированную гепарином (25 ЕД/мл) венозную кровь, взятую из локтевой вены утром до приема пищи. Объектом исследования служили лимфоциты, выделенные из крови путем центрифугирования на слое «Ficoll-Paque» плотностью 1,077.
Регистрацию апоптоза лимфоцитов проводили методом, основанным на определении экспрессии фосфатидилсерина с помощью аннексина V, конъюгированного с FITC методом проточной лазерной цитометрии. Цитофлуориметрическая оценка изменения величины мембранного потенциала митохондрий (Л\|/) осуществлялась с использованием раствора флюорохрома JC-1. Содержание Bad, Bax и Bcl-2 определяли методом вестерн-блоттинга с помощью соответствующих моноклональных антител («Sigma», США). Статистическую обработку полученных данных проводили методами описательной статистики и непараметрического анализа (критерии Крускала-Уоллиса, Манна-Уитни с поправкой Бонферрони). Достоверными считали различия при р<0,05.

Как показали результаты проведенного нами исследования у больных острым КЭ и у пациентов с хронической антигенемией ВКЭ содержания аннексинЛ^-лимфоцитов и лимфоцитов со сниженным Л| достоверно повышался по сравнению со значениями данного параметра у здоровых лиц. Обнаружено также, что число апоптотических клеток и лимфоцитов со сниженным Л| у пациентов с длительной антигенемией ВКЭ было достоверно более низким, чем у больных острым клещевым энцефалитом.
Кроме того, было выявлено нарушение баланса про- и антиапоптотических белков семейства Bcl-2. Так, у пациентов с острым КЭ содержание белка Bax достоверно увеличивалось, а количество Bcl-2 снижалось по сравнению с контрольной группой. С другой стороны, установлено, что у пациентов с острым КЭ наблюдалось снижение содержания белка Bad относительно аналогичного параметра у здоровых доноров. Хроническая антигенемия ВКЭ сопровождалась снижением содержания белка Bax на фоне увеличения Bcl-2 по сравнению с таковым у пациентов с острым КЭ. При этом проапоп-тотический белок Bad уже не выявлялся.

Таким образом, при КЭ одним из механизмов модулирования митохондриального пути апоптоза является нарушение баланса про- и антиапоптотических белков. В остром периоде заболевания усиление апоптоза, возможно, связано с защитной реакцией организма, направленной на противостояние дальнейшей репликации возбудителя [1]. С другой стороны, ВКЭ обладает тропизмом к лимфоидной ткани, поэтому чрезмерная гибель иммунокомпетентных клеток, осуществляющих реализацию противовирусного иммунитета, может обусловливать несостоятельность Т-клеточного звена [2]. Это приводит к смещению иммунного баланса в сторону Th2 и позволяет вирусу длительно сохраняться в организме с формированием хронического инфекционного процесса. При хронической антигенемии ВКЭ преобладающее действие антиапоптотического белка нейтрализует функцию проапоптотиче-ского с последующей инактивацией программированной клеточной гибели [3]. Данный механизм позволяет индуцировать митохондриальный путь апоптоза нормальных клеток и защищать от гибели инфицированные клетки. Дальнейшее изучение молекулярных механизмов регуляции апоптоза ми-тохондриальными белками даст возможность разрабатывать новые подходы к лечению КЭ.