Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам пятого конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича.- Томск, СибГМУ.- 2004.- 413 с.

Скачать сборник целиком

Проточная цитометрия - это современная технология быстрого измерения характеристик клеток или их органелл и последующего физического отделения интересующей субпопупяции клеток или микрочастиц на основании анализа измеренных характеристик. Проточная цитометрия базируется на всем арсенале цитохимических флуоресцентных методов анализа как структурных компонентов клеток, так и внутриклеточных процессов. От классической цитохимии её отличает гораздо большая производительность -исследуются выборки от 1 тысячи до нескольких миллионов клеток, а от классической биохимии или молекулярной биологии - то, что она позволяет исследовать молекулярные характеристики, не усредненные по всей популяции, а индивидуальные для каждой из клеток, входящих в выборку [1].
Методологические приемы проточной цитометрии высокоинформативны и наиболее полно отражают состояние клетки., так как цитометр способен регистрировать до 6 оптических параметров клеток, включая 4 параметра флуоресценции с использованием двухлазерной оптической системы. На основе анализа полученных нами данных о субпопуляционном составе лимфоцитов периферической крови методом иммуноцитохимии считаем, что применение проточной цитометрии дает возможность оценить распределение нескольких клеточных маркеров в одной пробе и представляет широкие возможности для выбора различных флуоресцентных реагентов и их сочетаний при проведении исследований клеток иммунной системы.
Проточная цитометрия, по нашему мнению, незаменима при оценке апоптоза. Данный методологический подход позволяет определить, на какой стадии апоптоза находится клетка. Выявление клеток на ранних стадиях апоптоза осуществляется посредством аннексина У, который взаимодействует с фосфатидилсерином -компонентом клеточной мембраны. Для более поздних этапов апоптоза характерно наличие в клетке гиподиплоидного набора ДНК, выявляемого с помощью пропидия иодида. ДНК-гистограммы позволяют четко разделить клетки, находящиеся в G1-, S- и G2/M-фазах клеточного цикла. Целый набор различных флуорохромов сделал возможным количественные исследования таких физиологических параметров как концентрация свободных ионов кальция, уровень окислительных процессов, величина митохондриального потенциала, активность различных клеточных ферментов (в том числе каспаз - эффекторов апоптоза), а также интенсивность экспрессии отдельных генов (bcl-2, p53 и других) [2]. Считаем, что совокупность информации о содержании ДНК, молекулярных маркеров апоптоза и клеточной пролиферации, полученной методом проточной цитометрии, имеет большое значение для комплексной оценки механизмов регуляции апоптоза.
Таким образом, проточная цитометрия, несмотря на высокие материальные затраты, имеет достаточно широкие возможности не только для изучения механизмов регуляции программированной гибели клеток, но и для решения различных диагностических и исследовательских задач, делая лабораторные исследования технологичными, точными и своевременными.

Литература:
1)    Cualing H.D. Automated analysis in flow cytometry. // Cytometry. - 2000. - Vol. 42, N2. - P. 110-113.
2)    Horsburg T., Martin S., Robson A.J. The application of flow cytometry to histocompatibity testing. // Transplant. Immunology. - 2000. - Vol. 8, N1. - P. 3-15.