С помощью методов молекулярной диагностики доказано существование на иммунокомпетентных клетках локальной системы "гормон роста - ИФР-I" и их рецепторов, функционирующей по принципу паракринной и аутокринной регуляции [1]. Эта система остается относительно интактной у больных с дефицитом гипофизарного гормона роста, поэтому часть иммуномодулирующей активности ГР и ИФР-I обеспечивается синтезом этих гормонов самими иммуноцитами. Тем не менее, изменения иммунологических параметров, зарегистрированные во многих исследованиях у пациентов с СТН [2], свидетельствуют о не полной компенсации дефицита гипофизарного соматотропина синтезом его непосредственно клетками иммунной системы. Гетерогенность пациентов с СТН, обусловленная различной этиологией возникшего дефицита гормона роста, определяет, видимо, и различный уровень локальной секреции ГР клетками иммунной системы. В процессы компенсации нарушенных иммунологических параметров и функций включаются, по¬видимому, и другие цитокины, роль которых и характер их изменения у пациентов с дефицитом гормона роста недостаточно изучены [3].
Цель работы - изучить функциональную активность лимфоцитов и цитокиновую продукцию мононуклеарами периферической крови IL-1P и TNF-a у детей с дефицитом гормона роста. Оценить характер изменений изучаемых параметров на фоне заместительной терапии рекомбинантным гормоном роста.
Материалы и методы
Под наблюдением находилось 40 детей (30 мальчиков и 10 девочек) с соматотропной недостаточностью (СТН), средний возраст которых составил 13,7±3,1 лет.
Диагноз СТН поставлен на основании клинико-функциональных показателей: характерных ауксологических изменений (выраженная низкорослость - степень стандартного отклонения роста (SDS роста) <2.0 с сохранением правильных пропорций тела, высокий тембр голоса, "кукольное лицо", микрогенитализм, склонность к гипогликемии, задержка костного созревания более 2-3 лет), а также по результатам 2 последовательных стимуляционных проб с клофелином (0,15 мг\м2 перорально) и инсулином (0,1 ЕД\кг внутривенно). Диагностически значимым для установления тотального дефицита гормона роста (ГР) у детей принят выброс ГР в ответ на стимуляцию менее 7 нг\мл, частичного дефицита ГР - менее 10 нг\мл. Заместительная терапия проводилась рекомбинантным гормоном роста "Генотропин" (Pfaizer, США) в дозе 0,1 МЕ/кг ежедневно в вечернее время. Повторное исследование иммунологических параметров проведено через 3 месяца лечения.
В контрольную группу вошли 20 детей и подростков, средний возраст которых составил 13,2±2,0 года, со средними показателям физического развития, соответствующими признаками биологической зрелости для своего пола и возраста, без хронических заболеваний и не имеющие острых заболеваний за последние 2 месяца.
Для оценки функциональной активности лимфоцитов проводилась стандартная реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) - спонтанная и стимулированная фитогемагглютинином (ФГА) (Петров Р.В., 1984 г).
Супернатант РБТЛ центрифугировался и отбирался в пробирки типа "Эппендорф", который хранили при t=-20оС не более 3 месяцев. Определение фактора некроза опухоли (TNF-a) и интерлейкина-1р (П.-1в) проводилось методом твердофазного иммуноферментного анализа с тест-системами фирмы "Протеиновый контур" (г. Санкт-Петербург), по протоколу, прилагаемому фирмой-производителем.
Статистический анализ проводили с использованием программы "Statistica 5,0". Данные представлены в виде М ± s (среднее ± стандартное отклонение). Статистическую значимость оценивали с помощью t-критерия Стьюдента (при соблюдении закона о нормальном распределении признаков, тест Колмогорова-Смирнова), U -критерия Манна-Уитни (при несоблюдении закона нормального распределения признаков). Достоверность изменения наблюдаемых признаков до и после лечения оценивали с помощью парного t-теста Стьюдента и критерия знаков Wilcoxon для связанных выборок после проверки вида распределения признаков. Значимыми считали различия при p<0,05.
Результаты
Количество трансформированных в бласты лимфоцитов без стимуляции ФГА при СТН оказался достоверно выше, чем в контрольной группе (табл.). Это, вероятно, указывает на исходную напряженность защитных иммунных механизмов. Через 3 месяца заместительной терапии Генотропином уровень спонтанной бласттрансформации лимфоцитов не изменился, а количество бластов в РБТЛ при стимуляции ФГА, статистически значимо увеличилось. Этот факт свидетельствует о непосредственном эффекте ГР на уровень активации функционального статуса лимфоцитов и о компенсаторной направленности выявленных изменений функционального статуса лимфоцитов при дефиците гормона роста.
Интересные результаты получены в отношении продукции мононуклеарами периферической крови TNF-a и IL-1P в ходе РБТЛ. У детей с СТН зарегистрировано преобладание спонтанной продукции над стимулированной в несколько раз, что можно охарактеризовать как "инвертированный" тип секреции. Стимулированная ФГА продукция TNF-a оказалась ниже, чем в контрольной группе, а стимулированная продукция IL-1 P , несмотря на то, что была ниже спонтанной, все же в десятки раз превышала уровень контрольных значений.
Через 3 месяца заместительной терапии Генотропином восстанавливается "нормальный" профиль продукции лимфоцитами TNF-a и IL-1 P - как и в контрольной группе, уровень индуцированной ФГА цитокинопродукции стал преобладать над уровнем спонтанной продукции. Однако, если после лечения уровень и профиль секреции TNF-a практически не отличался от показателей контрольной группы, то в отношении IL-1 P отмечалось изменение профиля секреции, но уровень секреции оставался очень высоким. Значительно увеличилась продукция IL-1 P при стимуляции ФГА (табл.).
Известно, что неотъемлемой составной частью биологического действия IL-1 P является его стимулирующее влияние на метаболизм соединительной ткани. IL-1 P стимулирует пролиферацию фибробластов, увеличивает продукцию простагландинов, ростовых факторов, ряда цитокинов, включая колониестимулирующие факторы, интерлейкины и интерферон. Стимулируя пролиферацию и функциональную активность, как остеобластов, так и остеокластов, IL-1 P может с одной стороны, индуцировать процессы образования соединительной и костной ткани, а с другой стороны, способствовать резорбции хряща и кости. Экспериментальные данные свидетельствуют о стимуляции под влиянием IL-1 P функциональной активности клеток и блокировании естественного процесса программированной клеточной гибели. Некоторые эффекты, оказываемые IL-1 P на метаболизм соединительной и костной ткани, непосредственно связаны с основным биологическим эффектом соматотропина - влиянием его на линейный рост у ребенка и на процесс ремоделирования костной ткани. Поэтому можно предположить, что в части функций существует однонаправленность биологических эффектов IL-1 P и гормона роста и на иммунную систему, следовательно, значительно более высокие уровни секретируемого лимфоцитами IL-1 P при дефиците гормона роста необходимы для поддержания нормального уровня функциональной активности лимфоцитов.