Мордовский государственный педагогический институт (г. Саранск)

Показано, что при гестозе вовлеченность в патологический процесс гемато –плацентарного барьера  зависит от изменения клеточного и гуморального ммунитета, накопления в организме матери продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), молекул средней массы (МСМ), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), снижения антиоксидантной защиты и повышения индекса токсичности (иТ) по альбумину.
Ультраструктурные перестройки гемато-плацентарного барьера выражались развитием отека и деструкции, усилением склеротических процессов, отложением масс фибриноида, увеличением полнокровия фетальных сосудов.
Полученные данные дают возможность судить о наличии прямой связи между степенью тяжести гестоза и морфологическими изменениями гемато-лацентарного барьера.
ВВЕДЕНИЕ
Безусловно, неблагополучная экологическая обстановка больших городов является мощным фактором вызывающим нарушение иммунных и метаболических  процессов в системе «мать-плацента-плод» » [1,2,3].Усиливающая эндогенная интоксикация организма создает условия для  обострения  многих заболеваний, в том числе и гестоза беременных. Накопление эндотоксинов в организме больных гестозом может рассматриваться как один из пусковых механизмов развития более выраженных патологических нарушений химической этиологии, оказывающих мощное воздействие на гемато-плацентарный барьер, а через него и на организм плода.
Целью исследования явилось изучение морфологических изменений  гемато-плацентарного барьера при экзо- и эндогенной интоксикации  материнского организма.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Материалом исследования являлась плацента и кровь женщин с физиологическим течением беременности и при беременности, осложненной гестозом различной степени тяжести. Исследовано 62 плаценты и кровь от 163 пациенток. Первую группу составили женщины, проживающие в районе с низким уровнем атмосферных загрязнений; вторую группу – женщины, проживающие в районе с повышенным содержанием в атмосферном воздухе ртути и свинца. Электронно-микроскопические исследования  проводили  по общепринятым методикам. Для идентификации полученного материала полутонкие срезы готовили на LKB-Pyramiton и окрашивали толуидиновым синим. Ультратонкие срезы получали на ультрамикротоме Ultrocut и контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Материал просматривали в электронном микроскопе ЭМ-125. Исследование крови проводилось в III триместре беременности (26-40 недель).
Общее количество Т-лимфоцитов (реакция Е-РОК) и общее количество В-лимфоцитов (М-РОК) определяли по В.И. Никитину [4]. Постановка нагрузочного теста с теофиллином проводилась по Э.Г. Скрябиной, В.И. Чередеву [5]. Активность субпопуляций лимфоцитов определяли с помощью непрямой иммунофлуоресценции с моноклональными антителами к дифференцировочным антигенам поверхности клеток, используя набор моноклональных антител фирмы «Сорбент» [6]. Количественное определение иммуноглобулинов  проводили методом одномерной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле [7]. Антиоксидантную активность (АОА) и перекисное окисление липидов (ПОЛ) исследовали на хемилюминометре «EMILITE  EL- 1105» совмещенным с персональным компьютером [8]. Молекулы средней массы (МСМ) определяли путем осаждения 15% раствором трихлоруксусной кислоты [9], циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)  методом осаждения  3,5% раствором полиэтиленгликоля [10]. Определение показателей общей и эффективной концентрации альбумина проводили флуоресцентным методом на анализаторе АКЛ-01 в соответствии с инструкциями для реактивов Научно-внедренческого центра «Зонд» [11].
Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (t).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При гестозе, на фоне дисфункции иммунной системы  и накопления продуктов эндогенной интоксикации, отмечено резкое увеличение отечных, склерозированных, фибриноидноизмененных и полнокровных терминальных ворсин плаценты.
Для  водянки отмечено снижение Т- супрессоров – на 58% и увеличение IgМ на 22%, что отражает процесс  воспаления, и подтверждается накоплением в плазме крови ЦИК на 16% и МСМ на 33%.  При   нефропатии   легкой  и средней степени происходит дальнейшее снижение Т- супрессоров и увеличение  IgМ, ЦИК, МСМ. Наибольшее иммунодефицитное состояние характерно для нефропатии тяжелой степени, когда по сравнению с физиологической беременностью содержание Т-лимфоцитов снизилось на 25%, Т-супрессоров на 68%, В- лимфоцитов на 19%. Изменилось и функциональное состояние этих клеток. Активность СД3+ (Т-клеток) снизилась на 63%, СД72+ (В-клеток) на 44%.  Повышение Ig M на 60%, ЦИК на 63%, МСМ в 2,4 раза свидетельствует об активном развитии воспалительного процесса.
В синцитиотрофобласте отмечено появление большого числа вакуолей, набухание  митохондрий с нарушением строения крист, резкое расширение канальцев эндоплазматической сети, увеличение размеров лизосом, сморщивание и уплотнение ядер.  Для нефропатии  тяжелой степени характерно уменьшение в ядре содержания конденсированного хроматина, просветление нуклеоплазмы, деструкция клеточных мембран. Некротические процессы часто завершаются отмиранием отдельных участков синцитиотрофобласта с оголением базальной мембраны фетальных сосудов.  Причиной дезинтеграции клеточных мембран является перекисное окисление липидов [12,13]. Показано нарастание уровня ПОЛ и снижение АОА в зависимости от тяжести гестоза. Так при водянке уровень ПОЛ  вырос на 32%, а АОА снизилась на 25%. При нефропатии тяжелой степени ПОЛ выросло в 2,3 раза, при этом  АОА понизилась на 56%.
Известно, что повреждение клеточных мембран влечет за собой проникновение антигенов плода в организм матери, при этом образуются циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) [14,15]. Как показали наши исследования, содержание ЦИК при гестозе, нарастая соответственно тяжести заболевания, достигло максимального значения при нефропатии тяжелой степени (увеличилось на 63%). Циркулирующие иммунные комплексы, откладываясь под базальной мембраной эпителия и субэпителиально, вызывают воспаление фетальных сосудов. Нами показано, что в эндотелии фетальных сосудов сначала отмечаются признаки повышенной пиноцитозной активности, затем наступает выбухание тела клетки в просвет сосуда, появление множественных перегибов  ядерной мембраны. Усиленная везикуляция эндотелия   указывает на активный транспорт жидкости через клетку. При этом в структурах гемато-плацентарного барьера развиваются процессы отека и деструкции.
При развитии гестоза среди термальных ворсин плаценты увеличивается количество полнокровных ворсин, в которых слой синцитиотрофобласта сужен, особенно в тех местах, где капилляры близко подходят к его краю. Общее количество органелл синцитиотрофобласта уменьшено. Базальная мембрана трофобласта и базальная мембрана эндотелия, сливаясь, образуют общий базальный слой. Эндотелий фетальных сосудов уплощен. Данные изменения приводят к формированию истинных синцитиокапиллярных мембран, направленных на минимизацию расстояния между кровью матери и плода.
В ответ на венозный застой и гипоксию активизируются фибробласты стромы терминальных ворсин, в функции которых входит продукция коллагена. Фибробласты имеют развитую гранулярную эндоплазматическую сеть, пластинчатый комплекс Гольджи. Вблизи наружной мембраны отмечено множество секреторных вакуолей. В межклеточное пространство от фибробластов отходят коллагеновые фибриллы. Терминальные ворсины, содержащие большое количество коллагеновых волокон, приобретают вытянутую форму.
 В зависимости от тяжести гестоза в плаценте отмечено нарастание доли фибриноида. Показано, что при водянке на апикальной поверхности синцитиотрофобласта, на месте его деструкции, происходит отложение отдельных нитей фибрина, образующих постепенно однородный пласт. При нефропатии легкой и средней степени  фибриноид заполняет большую часть синцитиотрофобласта,  доходя до мембраны фетальных сосудов. При нефропатии тяжелой степени большие пласты фибриноида имеют линейное или фрагментированное расположение. Часть сосудов облитерировано. Отложение фибриноида в плаценте может рассматриваться и как компенсаторный процесс, играющий роль иммунологического барьера [16], и как патологическое изменение, нарушающее плодово-материнский обмен через гемато-плацентарный барьер [17].
Увеличение ЦИК в крови матери при гестозе, по мнению Л.К. Фазлеевой [18], Т.А. Старостиной и соавт. [14], может привести к развитию антителозависимого нефрита.  В наших исследованиях нефропатический синдром, развивающийся при гестозе, характеризовался гипоальбуминемией. При нефропатии тяжелой степени уровень сывороточного альбумина в крови женщин снизился на 22%, эффективная концентрация альбумина (ЭКА) на 50%, связывающая способность альбумина (ССА)  на 52%. Дефицит общей концентрации альбумина и его связывающей способности приводит к снижению транспорта метаболитов различного происхождения и его дезоинтоксикационной функции, что способствует нарастанию эндогенной интоксикации. Подтверждением является рост индекса токсичности по альбумину (иТ) при нефропатии тяжелой степени в 3 раза.
Таким образом, полученные данные дают возможность судить о наличии прямой связи между морфологическими изменениями гемато-плацентарного барьера и эндогенной интоксикацией материнского организма при гестозе. Установленные особенности могут быть использованы для мониторинга болезни в экологически неблагоприятных районах.

Список  литературы
1 Динерман А.А. Роль загрязнителя окружающей среды в нарушении эмбрионального развития. - М., 1980. - 29 с.
2. Бонашевская Т.И. Структурно-функциональные изменения плаценты под влиянием атмосферных загрязнений //Архив анат., гистол. и эмбриол.-1985.- Т. LXXXVIII.  № 2.- С. 72-76.
3. Гусева Г.С. Морфофункциональное состояние плаценты  родильниц, имевших производственный контакт с ртутью: Автореф. дис. … канд. мед. наук. - Саранск, 1997. - 16 с.
4. Никитин В.М. Справочник иммунологических методов. - Киев: Медицина, 1982.- 79 с.
5. Скрябина Э.Г., Чередев В.И. Возможности и ограничения теста чувствительности Е-розеткообразования к теофиллину для диагностического состояния Т-системы человека //Лаб. дело.-1987. - № 1.- С. 5-8.
6. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. - М.: Изд-во ВНИРО, 1995.- 219 с.
7. Галицкий Я.Д. Усовершенствование определения иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле // Лаб. дело.-1987. - № 12.- С. 925-927.
8. Токмаков А.А. Применения люминола в аналитической  биохимии //Успехи соврем.  биол.-1993.- Т. 113. - № 2.- С. 247-251.
9. Брасюк Д.Л. Модификация метода определения молекул средней массы //Клин. лаб. диагностика.- 1995. - № 1.-С. 18.
10. Вельбри С.К., Лиллеорг А.Л., Линдстрем С.Л. Одновременная оценка уровня иммунных комплексов и иммуноглобулинов для характеристики патологических процесса // Лаб. дело.- 1988. - № 5.- С. 7-11.
11. Грызунов Ю.А., Миллер Ю.И., Добрецов Г.Е., Пестова А.Б. Флуоресцентный способ определения массовой концентрации альбумина сыворотки крови человека // Клин. лаб. диагностика.- 1994. - № 5.- С. 27-30.
12. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. Итоги науки и техники //Биофизика.- 1991.- Т. 29.- С. 252.
13. Чудинова В.В., Алексеев С.М., Захарова Е.И., Евстигнеева Р.П. Перекисное окисление липидов и механизм антиоксидантного действия витамина Е //Биоорганическая химия. - 1994. - Т. 20. - № 10. - С.1029-1045.
14. Старостина Т.А.,    Белокриницкий Д.В.,    Кудряшова Н.М.,     Размахнина Н.И., Голощапова О.В., Середина Т.А. Циркулирующие иммунные комплексы и иммуноглобулины А, М, G в системе мать-плод при физиологической беременности и гестозе //Акуш. и гин. - 1992. - № 2.-С.19-21.
15. Гончаревская З.Л. Клинико-иммунологические критерии в диагностике гестозов: Автореф. дис. … канд. мед. наук. - Москва, 1998.- 25 с.
16. Говалло В.И. Иммунология репродукции.- М.: Медицина, 1987.- 304 с.
17. Гармашева И.Л., Константинова Н.Н. Введение в перинатальную медицину. - М.: Медицина, 1978.- 294 с.
18. Фазлеева Л.К. Циркулирующие иммунные комплексы в системе мать-плод //Акуш. и гин.- 1984. - № 6 - С. 66-67.