Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии

По данным ВОЗ около трети населения планеты инфицированы микобактериями туберкулеза (МБТ), причем подавляющее большинство инфицированных имеют латентную, неактивную форму болезни. Ежегодно 8-10 млн инфицированных переходят в фазу активации. В период с 2002 по 2020 гг. ожидается около 1 млрд новых случаев заражения Mycobacterium tuberculosis, если не произойдет существенного улучшения контроля над распространением инфекции [3].
Существует концепция, согласно которой подверженность заболеванию обусловлена сочетанием в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон, реализующийся при взаимодействии с Mycobacterium tuberculosis. Показано, что функционирование цитокиновой сети при туберкулезе зависит от многих причин, в число которых входят индивидуальные различия в продукции иммунорегуляторных молекул, обусловленные рядом генетических особенностей [1, 2]. Поиск маркеров восприимчивости к инфекции среди аллелей генов цитокинов – новый, малоизученный раздел исследований. Так, согласно данным литературны, к иммуногенетическим маркерам туберкулеза относят гены интерлейкина (IL) IL 12В и IL2 [4].
В связи с этим, целью настоящего исследования явилось определение характера распределения аллельных вариантов генов IL12В и IL2 среди больных туберкулезом, проживающих на территории г. Томска и Томской области, и оценка степени их ассоциированности с уровнем продукции соответствующих цитокинов.
В программу исследования вошли 78 пациентов европеоидного происхождения, проживающих на территории г. Томска и Томской области, с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких (46 мужчин и 32 женщины в возрасте от 19 до 55 лет, средний возраст – 32,7±2,1 лет), находившихся на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулёзной больнице. В контрольную группу были включены 82 здоровых  донора с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту.
Материалом исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой вены утром натощак. Концентрацию IL-12 и IL-2 в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с прилагаемой инструкцией («ProCon», Россия). Оптическую плотность регистрировали на микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия). Выделение ДНК проводили сорбентным методом с помощью коммерческого набора «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфных участков генов цитокинов (1188A/C гена IL12B и  Т-330G гена IL2) осуществляли с использованием рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома (ПДРФ-анализ) согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия) с применением специфических праймеров. В дальнейшем продукты амплификации генов IL12В, IL2 подвергали действию рестриктазы TaqI. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле.
Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по t-критерию Стъюдента и U-критерию Манна-Уитни. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий ?2 Пирсона и точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с помощью критерия отношения шансов (OR) с расчетом для него 95% доверительного интервала.
В ходе иммуногенетического исследования было установлено, что среди больных туберкулезом легких достоверно чаще чем среди здоровых доноров встречается гетерозиготный вариант по аллелю Т полиморфного участка T-330G гена IL2 (44,4%), реже – гомозиготный (46,9%). Полиморфизм T-330G гена IL2 расположен в промоторной области и, возможно, влияет на уровень продукции кодируемого цитокина. Проведенное нами исследование показало, что с гомозиготным по аллелю Т генотипом ассоциирован более высокий уровень секреции IL 2 (21,76±3,08 пг/мл), чем у гетерозигот (20,95±4,36 пг/мл) и гомозигот (16,92±1,56 пг/мл) по аллелю G. Таким образом, наличие в генотипе человека аллеля G полиморфизма T-330G гена IL 2 свидетельствует о дефиците клеточного звена иммунной системы, что в свою очередь является фактором риска развития туберкулезной инфекции.
Исследование характера распределения генотипов полиморфизма А-1188С гена IL12B позволило найти ассоциацию данного полиморфного участка гена с туберкулезом. Было установлено, что среди больных туберкулезом статистически значимо чаще встречались гетерозиготы с генотипом АС (50%), с этим же генотипом был связан и риск развития туберкулезного процесса (OR=1,65, р=0,012). Вероятность заболеть туберкулезом обладателей гомозиготного генотипа СС оказалась значительно ниже, чем у индивидов с гетерозиготным и гомозиготным генотипом АА полиморфного участка А-1188С гена IL12. При этом характер распределения аллелей полиморфизма А-1188С гена IL12B у больных туберкулезом достоверно не отличался от такового у здоровых доноров. Проведенные нами исследования ассоциированности генотипа клеток продуцентов IL-12 с уровнем его спонтанной продукции показал, что генотип СС гена IL12B чаще выявляется среди индивидов с высоким уровнем продукции цитокина. Однако статистически значимой зависимости продукции этого цитокина от генотипа промоторного региона А-1188С гена IL12B обнаружено не было.
Таким образом, течение инфильтративного туберкулеза легких у жителей г. Томска и Томской области сопровождается снижением продукции IL2 на фоне повышения уровня секреции IL12 мононуклеарами периферической крови. Иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении подверженности туберкулезу легких, является аллель Т и гомозиготный генотип ТТ  полиморфизма T-330G  гена IL2 и генотип СС полиморфизма А-1188С гена IL12B. Подверженность туберкулезной инфекции ассоциирована с аллелем G, генотипами TG и GG полиморфизма T-330G гена IL2, а также с генотипом АС полиморфного участка А-1188С гена IL12.

Список литературы:
1.    Перельман, М. И. Туберкулёз. / М. И. Перельман, В. А. Корякин, Н. М. Протопопова. – М. : Медицина, 1990. – 304 с.
2.    Сенников, С. В. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний / С. В. Сенников, А. Н. Силков, В. А. Козлов //   Иммунология. – 2002. – №4. – С. 243-250.
3.    Шкарин, А. В. Уровень цитокинов в плазме крови у больных активным инфильтративным туберкулезом легких / А. В. Шкарин, С. С. Белоусов, О. А. Аникина // Проблемы туберкулеза и болезней лёгких. – 2008. – № 8. – С. 34-38.
4.    Human cytokine gene nucleotide sequence alignments / J. L. Bidwell, N. A. P. Wood, H. R. Morse, O. O. Olomolaiye, G. J. Laundy // Eur. J. Immunogenet. – 1998. – Vol.25. – P. 83–266.