БИОТЕХНОЛОГИЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ТУБЕРКУЛЁ-ЗНОГО МАГНОИММУНОСОРБЕНТНОГО
|
|
|
|
Автор Ефременко Д.В.
|
|
03.07.2009 г. |
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Вопросы диагностики туберкулеза по-прежнему актуальны. Традиционно применяемые бактериологические методы не удовлетворяют требованиям экспрессности и чувствительности. В связи с этим возникла необходимость разработки новых диагностических препаратов.
Целью данных исследований явилось получение чувствительного и специфического диагностического препарата для иммунодиагностики туберкулеза на основе магноиммуносорбентов (МИС) и оценка его активности в иммуноферментном анализе (ИФА).
В работе использовали штамм возбудителя туберкулеза (БЦЖ), из биомассы которого извлекали водорастворимые антигенные комплексы, служившие в дальнейшем иммуногеном при получении гипериммунных сывороток и постановки реакций. Иммунизацию проводили по схеме, предложенной И. С. Тюменцевой с соавторами (1994). Активность антигена, сывороток, иммуноглобулинов определяли методом иммунодиффузии (РИД) по Оухтерлони. Конъюгацию иммуноглобулинов, фракционированных из сыворотки каприловой кислотой, с ферментом пероксидазой хрена проводили по методу P.K.Nakane, A.Kawaoi (1974), очистку конъюгата от несвязавшегося фермента осуществляли гель-фильтрацией.
МИС получали путем смешивания 3 г магнитного порошка, 1,5 г алюмосиликатного наполнителя и 60 мл раствора полиглюкина. После инкубации в течение 2 ч сорбент активировали 0,25 мл перхлората натрия (NaClO4). В качестве лиганда использовали иммуноглобулины туберкулезные с концентрацией белка 2,5 мг/мл, которые добавляли в количестве 2 мл к твёрдофазному носителю. Смесь инкубировали 3 ч, отмывали в забуференном физиологическом растворе, придерживая флакон с магноиммуносорбентом постоянным магнитом. Активность диагностикума апробировали как в лабораторных условиях, так и с клиническим материалом. Чувствительность ИФА в лабораторных условиях составила 10 нг/мл (с водорастворимым антигеном). При исследовании проб мочи и мокроты больных туберкулезом разработанный диагностикум позволял выявлять антиген микобактерий туберкулеза в 2 раза чаще, чем при исследовании традиционным ИФА. Постановку ИФА с МИС проводили в течение 1 ч, а традиционный ИФА занимал 21 ч (учитывая 18-часовую сенсибилизацию планшет).
Таким образом, разработанный туберкулёзный магноиммуносорбентный диагностикум позволяет обнаружить специфический антигенный материал с высокой чувствительностью. При его использовании упрощается и ускоряется постановка ИФА.
|
|
Последнее обновление ( 12.07.2009 г. )
|