Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Для получения качественных диагностических препаратов при диагностике туберкулёза необходимы высокоактивные специфические гипериммунные сыворотки. Этого добиться сложно, так как существует гетерологичная природа гуморального ответа на туберкулёз. В связи с этим необходима сорбция антител, дающих перекрёстные реакции с гетерологичными антигенами.
Цель работы – приготовление аффинного магноиммуносорбента с гетерологичным антигеном, закреплённым на матрице и использование его для очистки туберкулёзной сыворотки.
В работе использовали штамм микобактерий туберкулёза - БЦЖ, из биомассы которого извлекали антигенные комплексы, используя их для получения гипериммунных сывороток и постановки реакций. Сыворотки получали по схеме Тюменцевой с соавт.(1999). Активность сывороток, определяемая методом радиальной иммунодиффузии (РИД) по Оухтерлони, составила 1:16-1:32 в реакции с антигенами туберкулёзными.
При контроле специфичности противотуберкулёзной сыворотки в иммуноферментном анализе (ИФА) в качестве гетерологичных штаммов использовали корпускулярные антигены особо опасных инфекций (чумы, туляремии, бруцеллёза, сибирской язвы, листериоза, лептоспироза). В результате установлено, что перекрёстная реакция наблюдалась с бруцеллёзным антигеном. Эти результаты подтверждают данные Домарадского (1994).
Нами разработан и апробирован аффинный сорбент с магнитными свойствами, где в качестве твёрдой фазы выступал алюмосиликат и окись железа. Активатором выбран перхлорат натрия для образования ковалентной связи между матрицей и лигандом. Для придания сорбентам аффинных свойств на их поверхность иммобилизован лиганд – комплексный водорастворимый антиген бруцелл (Br.abortus, Br.melitensis, Br.suis).
Иммуносорбцию проводили, соединяя 10 мл иммунной сыворотки с 1 г магноиммунносорбента. Смесь инкубировали при температуре (22+4) оС в течение 12-18 часов. После инкубации, используя постоянный магнит для фиксации магноиммуносорбента, сыворотку сливали во флакон, а сорбент регенерировали с помощью 3 М раствора калия роданистого и отмывали фосфатно-солевым буферным раствором. Такой сорбент после процедур регенерации можно использовать до 10-15 раз. Магнитные свойства сорбента позволили упростить процесс отделения его от жидкой фазы в магнитном поле и исключить процесс длительного центрифугирования. Использование данного магноиммуносорбента позволило не только освободить туберкулёзную сыворотку от неспецифических антител (после сорбции отсутствовала перекрёстная реакция туберкулёзной сыворотки с бруцеллёзным антигеном в ИФА), но и сохранить активность нативных сывороток.
Таким образом, применение аффинного сорбента позволило провести качественную иммуносорбцию, упростив и ускорив процесс очистки сыворотки. Сорбент микробиологически и механически устойчив, его можно регенерировать и многократно использовать.