Клещевой энцефалит (КЭ) - является краевой патологией для ряда областей нашей страны, особенно районов Сибири и Дальнего Востока. Томская область также принадлежит к активнодействующим очагам клещевого энцефалита и боррелиоза. [1]
В последнее десятилетие заболеваемость КЭ увеличилась. Так в 1992 и 1999 гг. интенсивный показатель заболеваемости КЭ составлял соответственно 73,7 и 79,24 на 100 тыс. населения. Летальность в острый период КЭ в разные годы составила 0,19 - 0,67%. Важным фактором в предотвращении заболевания является ранняя диагностика, т.е. выявление вируса в клещах и в крови пострадавших людей, т.к. чем раньше будет обнаружен вирус, тем эффективнее будет экстренная серопрофилактика (введение специфических антител Ig G). [1]
На сегодняшний день в практическом здравоохранении из экспрессных методов диагностики КЭ применяется иммуноферментный анализ (ИФА) [2,4] и реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) [3]. Результаты ИФА готовы через 6-7 часов, РНГА через 1,5-2,5 часа.
Целью нашей работы является разработка метода экспресс - диагностики вируса КЭ. В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи: 1)приготовление коагглютинирующего реагента (КоАГ); 2) выявление антигена вируса КЭ в исследуемых образцах.
Предлагаемый нами способ основан на феномене коагглютинации при взаимодействии специфических антител и антигена. Отличительной особенностью является то, что в качестве носителей специфических антител служит белок А (видоспецифический протеин) золотистого стафилококка, который обладает способностью соединяться с Fc-фрагментом Ig G человека и ряда млекопитающих. При этом Fab-фрагменты антител остаются свободными и вступают во взаимодействие с гомологичным антигеном. На этом принципе основана реакция коагглютинации
(РКОА).
Первая поставленная задача решалась следующим образом: 10%-ный стафилококковый реагент сенсибилизировали высокоавидным и высокоспецифичным иммуноглобулином против вируса КЭ. Вторая задача решалась путем нанесения на предметное стекло 15-20 мкл исследуемого материала и добавлением в него равного количества КоАГ, тщательного перемешивания путем покачивания стекл и визуального определения через 2-7 минут по феномену коагглютинации наличия антигена вируса клещевого энцефалита.
Приготовленный КоАГ был испытан в лабораторных условиях на спецефичность и чувствительность. Для определения спецефичности были взяты биореагенты, содержащие и несодержащие антиген вируса КЭ, предварительно проверенные в ИФА и РНГА. Проведенные исследования показали высокую специфическую активность приготовленного нами препарата. Также РКОА позволяет выявить количественное содержание антигена вируса клещевого энцефалита в исследуемом материале.
Для определения чувствительности предлагаемого РКОА сравнительно ИФА и РНГА титровали один и тот же материал, содержащий антиген вируса клещевого энцефалита, выявляемый тремя способами: ИФА, РНГА и РКОА. Исследуемым материалом служила вакцина КЭ на разных стадиях технологического процесса.
Проведенные исследования показали, что предлагаемый нами способ выявления антигена вируса клещевого энцефалита, как и ИФА, и РНГА специфичен, но превосходит их по экспрессности, чувствительности, простоте выполнения и экономичности.