Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии» (2004 год, выпуск 1), под редакцией проф., д.м.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

Лейкоцитарная формула

У больных СО с моноинвазией описторхов и с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, были изучены показатели лейкоцитарной формулы. У всех обследованных нами больных СО, за исключением пациентов с микст-инвазией описторхов и меторхов с высоким уровнем токсичных МЭ в крови, было установлено достоверное повышение общего числа лейкоцитов в периферической крови, по сравнению с соответствующим показателем у здоровых людей (при P<0,05 или P<0,01). У больных с моноинвазией описторхов общее число лейкоцитов в периферической крови в подгруппе обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказалось существенно ниже, по сравнению с соответствующим показателем в подгруппе больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,01). Кроме того, в случае относительно низкого содержания ртути и хрома в крови у больных с микст-инвазией общее число лейкоцитов снижалось, по сравнению с соответствующим показателем в подгруппе обследованных людей с моноинвазией  описторхов (при P<0,01). Абсолютное и относительное число моноцитов, эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови у больных с микст- и моноинвазией, имевших высокое и низкое содержание токсичных МЭ в крови, было значительно выше, по сравнению с уровнем этих клеток у здоровых людей (при P<0,01). У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, абсолютное и относительное число эозинофильных гранулоцитов оказалось  достоверно выше, чем у аналогичной группы больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при P<0,01). Вместе с тем, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, отмечалось существенное снижение абсолютного и относительного числа лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов, по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей (при P<0,01). Кроме того, абсолютное и относительное число лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов  у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов и с моноинвазией описторхов, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови, было достоверно ниже, по сравнению с аналогичными группами больных, имевших низкий уровень этих МЭ (при P<0,01). В случае низкого или высокого содержания ртути и хрома в крови у больных с микст-инвазией абсолютное число сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов было значительно ниже, по сравнению соответствующими показателями в подгруппах обследованных людей с моноинвазией (при P<0,01). У больных описторхидозами были обнаружены обратные корреляционные связи между содержанием хрома или ртути и абсолютным числом палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови (r=-0,84 при P<0,01 и r=-0,58 при P<0,01 соответственно), а также между содержанием хрома и числом сегментоядерных нейтрофилов (r=-0,63 при P<0,01). Кроме того, у больных СО отмечались достоверные отрицательные корреляционные связи между показателями содержания рубидия и абсолютным числом эозинофилов (r=-0,87 при P<0,01), а также между показателями содержания хрома и числом лимфоцитов в периферической крови (r=-0,67 при P<0,01). Отрицательные корреляционные связи также были установлены между концентрациями лантана и абсолютным числом эозинофилов (r=-0,77 при P<0,01), а также между концентрациями лантана и числом лимфоцитов (r=-0,91 при P<0,01) в крови. Более того, в периферической крови у больных СО содержание цинка отрицательно коррелировало с числом лимфоцитов (r=-0,68 при P<0,01) и числом сегментоядерных нейтрофилов (r=-0,49 при P<0,01). Кроме того, прямые корреляционные связи были установлены между содержанием брома и абсолютным числом эозинофилов (r=+0,51 при P<0,01), а также между содержанием цинка и числом эозинофилов в периферической крови (r=+0,62 при P<0,01).

Функциональное состояние нейтрофилов

У обследованных нами больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов или с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровни ртути и хрома в крови, показатели спонтанного НСТ-теста были значительно выше такового у здоровых людей (при P<0,01). Вместе с тем, как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, показатель спонтанного НСТ-теста в подгруппах обследованных людей, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказался достоверно ниже, по сравнению с соответствующими показателями в подгруппах больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,01).
В случае индуцированного НСТ-теста нейтрофилы стимулировали  описторхозным антигеном или бактериальным аллергеном E. coli. Стимуляция должна приводить к усилению продукции активных форм кислорода и увеличению количества активных нейтрофилов. У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, стимуляция нейтрофилов бактериальным аллергеном не приводила к достоверному повышению показателя НСТ-теста, по сравнению со спонтанным уровнем. Кроме того, показатель НСТ-теста у этой группы больных был достоверно ниже аналогичного показателя у здоровых людей (при P<0,01). В то же время, у больных с микст-инвазией, имевших низкое содержание ртути и хрома в крови, бактериальный аллерген вызвал существенное увеличение этого показателя, по сравнению со спонтанным уровнем (при P<0,01).
У больных с микст-инвазией, имевших высокий и низкий уровни токсичных МЭ, после воздействия аллергена E. coli, резерв реактивности  нейтрофилов оказался равен 4,1 и 4,2 соответственно, то есть был значительно ниже 10. Резерв реактивности нейтрофилов (РРН), который рассчитывается  по разнице   индуцированного и спонтанного  НСТ-тестов, отражает  эффекторный потенциал системы  фагоцитоза (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993). При ряде бактериальных инфекций (острой пневмонии, ОРВИ у новорожденных детей и других)  РРН ниже 10 с высокой вероятностью говорит об осложнениях или о неблагополучном  прогнозе (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993).
У больных с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровень токсичных МЭ в крови, уровень стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста был достоверно выше соответствующего спонтанного уровня (при P<0,01). Резерв реактивности нейтрофилов у больных с моноинвазией описторхов, имевших высокий или низкий уровни токсичных МЭ в крови, составил соответственно 9,8 и 13,5, что приближалось к норме. Для сравнения, у здоровых людей после стимуляции бактериальным аллергеном РРН был равен 16,7.
Как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, показатели стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста в подгруппах обследованных людей, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, оказались значительно ниже, по сравнению с аналогичными показателями в подгруппах больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при P<0,01). Кроме того, показатели стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста у больных с микст-инвазией были значительно  ниже, чем у больных с моноинвазией (при P<0,01).
Показатели индуцированного НСТ-теста после стимуляции описторхином как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, были достоверно выше, по сравнению с соответствующими спонтанными уровнями (при P<0,01). Кроме того, у больных с моноинвазией, в отличие от больных с микст-инвазией, показатели стимулированного описторхозным антигеном НСТ-теста в подгруппах обследованных людей, имевших высокий уровень ртути и хрома в крови, оказались значительно ниже, по сравнению с аналогичными показателями в подгруппах больных, имевших относительно низкий уровень этих МЭ (при P<0,01).
Индуцированный НСТ-тест, характеризующий функциональный резерв нейтрофилов,  рассматривают как биохимический критерий готовности нейтрофильных гранулоцитов к завершенному фагоцитозу (Межгихов Т.Н., 1998). По-видимому, у больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов ответ нейтрофилов на стимуляцию бактериальным антигеном был выражен слабее, чем у больных с моноинвазией описторхов. Кроме того, у больных с микст- или/и моноинвазией  повышенные уровни ртути и хрома в крови сопровождались значительным подавлением спонтанного и стимулированного бактериальным или описторхозным антигеном НСТ-теста.
Показано, что нарушение способности лейкоцитов к восстановлению НСТ совпадает с патологией кислородозависимых механизмов бактерицидной системы нейтрофилов (Пазюк Е.А., Маянский А.Н., 1981). Поэтому нами было проведено исследование активности миелопероксидазы нейтрофилов, являющейся одной из составных частей этой системы (Шубич М.Г., Нагоев Б.С., 1980). Кроме того, для изучения фагоцитарной функции нейтрофилов у больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, а также с моноинвазией описторхов нами проводилось определение фагоцитарного индекса Гамбургера, фагоцитарного числа Райта и индекса завершенности фагоцитоза.
У всех обследованных нами больных СО показатель фагоцитарного индекса Гамбургера не имел достоверных отличий от соответствующего показателя у здоровых людей. Вместе с тем, как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, показатели фагоцитарного индекса Гамбургера в подгруппах обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказались существенно ниже, по сравнению с таковыми в подгруппах больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,05). Фагоцитарное число Райта у всех обследованных нами подгрупп больных оказалось достоверно выше, чем у здоровых людей (при P<0,05 или P<0,01). В то же время, индекс завершенности фагоцитоза во всех подгруппах обследованных был значительно ниже аналогичного показателя у людей, не имевших инвазию (при P<0,01). У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов индекс завершенности фагоцитоза в подгруппе обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказался достоверно ниже, по сравнению с соответствующим показателем в подгруппе больных с низким содержанием этих МЭ (при P<0,05).   
У всех обследованных нами больных СО, внутриклеточная активность миелопероксидазы нейтрофилов была значительно выше соответствующего показателя у здоровых людей (при P<0,01).  В то же время, достоверное увеличение активности кислой фосфатазы нейтрофилов, по сравнению со здоровыми людьм, было отмечено только у больных с микст- и моноинвазией, имевших высокое содержание ртути и хрома в крови (при P<0,05). У больных с микст-инвазией активность этого фермента в нейтрофилах периферической крови в подгруппе обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, была существенно выше, чем в подгруппе людей, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,05).
Полученные нами данные свидетельствуют, что, у больных СО, в целом, установлено повышение функциональной активности нейтрофилов, о чем свидетельствовали увеличение, по сравнению со здоровыми людьми, показателей спонтанного НСТ-теста, фагоцитарного числа Райта и активности внутриклеточной миелопероксидазы и кислой фосфатазы. Вместе с тем, у больных СО нами были обнаружены и признаки чрезмерно напряженного функционирования бактерицидной системы нейтрофилов с тенденцией к срыву резервных возможностей этих фагоцитов. Так, например, у больных с микст- или/и моноинвазией  повышенный уровень ртути и хрома в крови сочетался со значительным подавлением НСТ-теста, стимулированного бактериальным аллергеном, и снижением показателя РРН. Кроме того, у больных СО отмечалось достоверное снижение индекса завершенности фагоцитоза, по сравнению со здоровыми людьми. Более того, об истощении резервных возможностей нейтрофилов свидетельствовали результаты изучения функциональной активности этих клеток у больных ХО. В этой группе обследованных людей нами было зарегистрировано значительное подавление, по сравнению со здоровыми людьми, как спонтанного, так и стимулированного бактериальным аллергеном НСТ-теста, а также снижение показателя  РРН, активности миелопероксидазы и всех трех изученных показателей (фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа и индекса завершенности фагоцитоза) фагоцитарной функции нейтрофилов (при P<0,01).
Известно, что при контакте с чужеродной поверхностью нейтрофилы генерируют активные формы кислорода и наиболее активные из них инактивируются. Поэтому такие события как контакт, приводящий к активации, генерация активных форм кислорода и инактивация нейтрофилов тесно взаимосвязаны (Герасимов И.Г., Игнатов Д.Ю., 2001). Тенденция к снижению активности миелопероксидазы и повышению содержания кислой фосфатазы в нейтрофилах у больных хроническим описторхозом отмечалась несколькими авторами (Баранец Н.А., 1975; Кирьянова З.П., 1987; Кривцова Л.А., 1993). Известно, что нейтрофильные гранулоциты человека бедны кислыми  протеиназами. Поэтому повышение содержания кислой фосфатазы в клетке может  отражать  процессы разрушения фаголизосомной стенки и выход  гидролитических энзимов в цитоплазму. Эти процессы фатальны для клетки. В последующем она лизируется, происходит выход её ферментов наружу, где они могут вызывать повреждения окружающих тканей (Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993; Боева О.И., 1998).
Установлено, что, у больных СО, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено значительное снижение осмотической резистентности гранулоцитов и агранулоцитов. У больных с микст- или/и моноинвазией, по-видимому, повышенные уровни ртути и хрома в крови способствовали разрушению этих клеток. Кроме того, у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, отмечалось снижение показателей осмотической резистентности гранулоцитов и агранулоцитов (при P<0,01).
У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, а также с моноинвазией описторхов была проведена компьютерная цито- и кариометрия нейтрофилов периферической крови с определением площади всей клетки, цитоплазмы и ядра клетки, а также площади компактного и диффузного хроматина ядра. У больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению со здоровыми людьми, было установлено достоверное снижение площади клеточного ядра нейтрофилов и площади клетки в целом (при P<0,01 или P<0,05). Как у больных с микст-инвазией, так и у больных с моноинвазией, показатели площади цитоплазмы и площади клетки нейтрофилов в целом в подгруппе обследованных, имевших высокое содержание токсичных МЭ в крови, оказались существенно ниже, по сравнению с соответствующими показателями в подгруппах больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,05). Более того, как в случае высокого, так и в случае низкого содержания ртути и хрома в крови, площадь клеточного ядра нейтрофилов, площадь диффузного хроматина ядра и площадь клетки в целом у больных с микст-инвазией описторхов и меторхов были значительно ниже таковых у больных с моноинвазией описторхов (при P<0,05). У больных с микст-инвазией и моноинвазией, показатели площади диффузного хроматина ядра нейтрофилов у больных с высоким содержанием токсичных МЭ в крови, оказались существенно ниже, по сравнению с соответствующими показателями в подгруппах больных, имевших низкое содержание этих МЭ (при P<0,05). Вместе с тем, наиболее высокие значения показателя площади компактного хроматина ядра нейтрофилов были установлены у больных СО с микст-инвазией описторхов и меторхов, имевших высокие уровни ртути и хрома в крови. Кроме того, у больных СО нами были установлены обратные корреляционные зависимости между площадью ядра нейтрофилов и показателями спонтанного (r=-0,51 при P<0,01) или стимулированного бактериальным аллергеном (r=-0,47 при P<0,01) НСТ-теста. Активность кислой фосфатазы нейтрофилов обратно коррелировала с площадью ядра (r=-0,49 при P<0,01) и прямо - с площадью компактного хроматина (r=+0,64 при P<0,01). Кроме того, уровни хрома и ртути в крови прямо коррелировали с площадью компактного хроматина (r=+0,77 и r=+0,54 при P<0,01).
Повышение площади компактного хроматина ядер нейтрофильных гранулоцитов может соответствовать процессам, связаным с ростом содержания функционально малоактивного гетерохроматина, по сравнению с уровнем эухроматина, что свидетельствует о подавлении, прежде всего, белковосинтетической функции клетки. Синтез белка в нейтрофилах  подавляется  при развитии  апоптоза этих клеток  (Hughes V. et al., 1987). Как известно, морфологические изменения апоптотирующих нейтрофилов соответствуют  кариопикнозу и кариорексису (Маянский А.Н. с соавт., 1999).  В связи с этим, интересно отметить, что хром и другие тяжелые металлы индуцируют повышение спирализации хромосом и разрушают скелет ДНК, обусловливая  гиперхромный эффект, а также нарушают ядерно-цитоплазматическое соотношение (Herichova A., 1974; Tamino G., 1977).
 Таким образом, у больных СО, по сравнению со здоровыми людьми, наблюдалось снижение площади ядра нейтрофилов. У больных с микст- или/и моноинвазией повышенный уровень ртути и хрома в крови сопровождался снижением площади ядра, цитоплазмы и клетки в целом, а также перераспределением ядерного материала в ядре нейтрофилов: увеличением  доли компактного хроматина, при одновременном снижении доли диффузного хроматина. У больных с микст-инвазией описторхов и меторхов, по сравнению с больными с моноинвазией описторхов, отмечалось уменьшение показателей площади клетки в целом, площади ядра, цитоплазмы, а также доли диффузного ядерного материала, при одновременном увеличении площади компактного хроматина.