Эта статья опубликована в сборнике статей по материалам XII Российского конгресса молодых  ученых  с  международным  участием "Науки о человеке"  (Томск, 26-27 мая 2011 г.) / под ред.   Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2011. – 104 с. 

Скачать сборник целиком (PDF, 1,6 MB)

Введение. Функциональная активность регуляторных Т-клеток (T-reg) при бронхиальной астме (БА) связана с обеспечением иммунологической толерантности воздухоносных путей или супрессии эффекторного Th2 ответа при аллергическом воспалении. Большое внимание в настоящее время уделяют изучению уровней циркулирующих T-reg при различных степенях проявления БА. Из различных источников литературы известно, что наблюдаемые уровни T-reg при аллергическом воспалении могут отличаться у пациентов в зависимости от возраста и статуса заболевания [2,3]. Настоящее исследование направлено на установление особенностей экспрессии поверхностных и внутриклеточных маркеров T-reg в периферической крови больных БА различной тяжести с целью выявления клеточных механизмов регуляции иммунного ответа.

Материал и методы. В исследование включены взрослые пациенты с тяжелой (n = 19), сред- нетяжелой (n=20) и легкой (n = 12) БА. Диагноз пациентам устанавливали на основании жалоб, данных анамнеза и результатов клинического обследования. Группу сравнения составили 17 здоровых человек. Периферическую венозную кровь пациентов и здоровых волонтеров собирали утром натощак в стерильную пробирку с гепарином в объеме 5 мл. Из гепаринизированной крови выделяли мо- нонуклеары в градиенте плотности фиколла (пл.1,077 г/см³, ПанЭко, Россия) для последующего иммунологического исследования.

Уровень экспрессии дифференцировочных антигенов T-reg оценивали по вариации поверхностных и внутриклеточных маркеров (CD4⁺, CD25⁺, FoxP3⁺) с использованием соответствующих моноклональных антител методом проточной цитофлюориметрии (FACSCalibur, Becton Dickinson, США). Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программы STATISTICA 6.0.

Результаты и обсуждение. Для объяснения иммунологических регуляторных механизмов участия CD4⁺ Т-клеток в патогенезе аллергического воспаления изучали уровень активированных CD4⁺CD25⁺ лимфоцитов при БА различной тяжести. Установлено, что относительное содержание активированных CD4⁺CD25⁺ T-клеток у больных легкой и тяжелой БА не превышает показатели контрольной группы, в то время как пациенты со среднетяжелой БА характеризовались повышением уровня CD4⁺CD25⁺ в периферической крови. Однако статистически значимых различий между группами выявлено не было (табл.).

Таблица №1 Субпопуляционный состав регуляторных Т-клеток у здоровых лиц и больных бронхиальной астмой различной тяжести.

Маркеры (%)	Здоровые доноры (n= 17)	Больные бронхиальной астмой (БА)
		Легкая БА (n=12)	Среднетяжелая БА (n=20)	Тяжелая БА (n=19)
CD4+CD25+	41,8 ± 3,8	33,7 ± 2,21	57,62 ± 1,75	37,1 ± 2,56
CD4+CD25hlgh	1,56 ± 0,24	1,19 ± 0,14а	1,87 ± 0,47**	1,47 ± 0,08*
CD4+FoxP3+	8,1 ± 0,30	3,48 ± 0,42а	2,58 ± 0,60**	7,57 ± 0,30*

Примечание:

* - p<0,05 по сравнению с группой больных легкой БА

▲ - p<0,001 по сравнению с группой здоровых доноров

** - p<0,05 по сравнению с тяжелой БА

Около 2-3% клеток от общего числа CD4⁺ Т-лимфоцитов принадлежит к клеткам с фенотипом CD4⁺CD25^high, также обладающим регуляторными способностями [1]. Установлено снижение содержания CD4⁺CD25^high при легкой БА (р<0,001) по сравнению со здоровыми лицами. При этом у больных среднетяжелой и тяжелой БА выявлено повышение CD4⁺CD25^high (р<0,05) в периферической крови по сравнению с больными легкой БА (таблица 1). Транскрипционный фактор FoxP3⁺ является
ключевым регулятором развития и функционирования T-reg. Измерение уровня экспрессии внутри-клеточного белка FoxP3⁺ является важным параметром, характеризующим особенности и интенсивность аллергического воспаления воздухоносных путей. Относительное содержание CD4⁺FoxP3⁺ у пациентов с легкой и среднетяжелой БА оказалось достоверно более низким по сравнению со здоровой группой и тяжелой БА соответственно, что возможно, указывает на нарушение клеточно- опосредованных механизмов иммуносупрессии (таблица 1).

Заключение. Легкая БА характеризуется снижением относительного количества CD4⁺CD25^high T-reg по сравнению со здоровыми лицами. У пациентов с тяжелой БА выявлено повышение CD4⁺FoxP3⁺ по сравнению с легкой и среднетяжелой БА. Полученные результаты демонстрируют новые научные данные о фенотипических особенностях и уровне T-reg в периферической крови при разных степенях тяжести БА, что подтверждает существование иммунорегуляторных механизмов контроля аллергического воспаления с участием T-reg.