Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 64-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2005 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Скачать сборник целиком (1 мб)

Прогрессирующий рост заболеваемости хроническими вирусными гепатитами (ХВГ), длительный латентный период, высокая вероятность тяжелых отдаленных последствий и неясность многих звеньев патогенеза развития инфекционного процесса продолжают служить стимулом для их глубокого и разностороннего изучения [2].

По современным представлениям, существенная роль в реализации механизмов противовирусного иммунитета отводится фактору некроза опухоли альфа (tumor necrosis factor - TNF-α), провоспалительному цитокину макрофагального происхождения [1, 2]. Осуществление функций этого цитокина возможно после связывания его со специфическими ассоциированными с мембраной и растворимыми рецепторами. Известно, что растворимые рецепторы TNF-α (sTNFα-RI) являются мощными регуляторами активности цитокина [4,5]. Согласно современным данным, дисбаланс продукции и рецепции TNF-α мононуклеарнми лейкоцитами играет значимую роль в механизмах формирования длительной персистенции вирусной инфекции [1, 2, 4, 5].

Целью нашей работы явилось изучение общих закономерностей, выявление причины и возможных механизмов дисбаланса продукции TNF-α мононуклеарными лейкоцитами у больных ХВГ.

В основу работы положены результаты обследования 158 больных с хроническим вирусным гепатитом В, С и В+С (слабовыраженной и умеренной степени активности). Контрольную группу составили 48 здоровых людей аналогичного пола и возраста.

Уровни TNF-α («Procon», Россия), sTNFα-RI (“Cytimmune”, USA) в супернатантах культур мононуклеаров определяли твердофазным иммуноферментным методом (ELYSA). Генотипирование аллельных вариантов промоторного участка TNFA осуществляли путем полимеразной цепной реакции с помощью метода рестриктного анализа.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием критериев Манна–Уитни, Спирмена, χ2 Пирсона, точного теста Фишера.

Анализ секреции TNF-a у пациентов с ХВГ свидетельствовал об угнетении способности мононуклеаров периферической крови выделять данный цитокин, что подтверждалось достоверным снижением средних величин базальной и стимулированной продукции TNF-a по сравнению с аналогичным показателем у здоровых доноров. Различные таксономические характеристики вирусов делают необходимым анализ продукции изучаемого цитокина в зависимости от этиологического варианта инфекции (табл.). Так было выявлено более значимое подавление секреции TNF-a у больных с ХВГС, чем у пациентов с ХВГВ и инфекцией-микст (табл.).

Наблюдаемое нами снижение продукции TNF-a мононуклеарами периферической крови у больных ХВГ может реализоваться посредством изменения содержания sTNFα-RI. Несмотря на то, что циркулирует лишь мембранная часть рецептора и непосредственной связи с клеткой эта форма уже не имеет, внеклеточные домены сохраняют способность связывать TNF-α, но это связывание не запускает эффекторные клеточные функции. Таким образом, sTNFα-RI выступает в качестве конкурентного ингибитора, подавляющего функции TNF-α. Было проведено сравнение содержания sTNF-R в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов у пациентов с ХВГ различной степени активности по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров. В результате статистической обработки полученных данных установлено достоверное увеличение базальной продукции sTNFα-R мононуклеарными лейкоцитами периферической крови у больных ХВГС слабовыраженной степени активности на 1158,99%, умеренной степени активности - на 511,51%. Аналогично было выявлено повышение sTNFα-RI в супернатантах культур мононуклеарных лейкоцитов и при микст инфекции. При этом снижение содержания TNF-α имело положительную корреляцию с увеличением продукции sTNFα-RI мононуклеарными клетками (r=0,618, р<0,05).

Спонтанная и стимулированная in vitro продукция TNF-α (в пкг/мл) мононуклеарными лейкоцитами периферической крови у больных с ХВГ (Х±m)

Примечание: p1 – достоверность различия сравниваемых показателей по сравнению с аналогичными у здоровых доноров; p2 –по сравнению с аналогичными показателями у больных ХВГВ; p3 –по сравнению с аналогичными показателями у больных ХВГС.

Снижение продукции TNF-a может быть индуцировано как факторами самого инфектогена, так и быть генетически детерминировано. Единодушно признается существование обоих патогенетических факторов [3]. Таким образом, нам интересно было проанализировать распределение аллелей гена TNFА, которое помогло бы сделать вывод о предрасположенности либо резистентности организма, формирующие риск инфицирования вирусами или устойчивость к нему. При анализе полиморфизма промоторного региона гена TNFA в участке G-308A у здоровых лиц было показано резкое преобладание частоты гомозиготного варианта G/G (89,58%) над гетерозиготным G/A (8,34%), а частота генотипа A/A оказалась минимальной. Аналогичный анализ у больных ХВГ позволил установить инверсию гомозиготного генотипа А/А (28,57%), гетерозиготный вариант G/A гена TNFA был обнаружен в 24,18% случаев, генотип G/G отмечался у 47,18% обследованных пациентов. Следует отметить также, что значение критерия отношения шансов (OR) в случае генотипа А/А, отражающего степень риска дальнейшего прогрессирования и неблагоприятного исхода заболевания, оказалось значительно выше единицы (OR=42,10), что свидетельствовало в пользу ассоциации генотипа А/А полиморфного участка G-308A гена TNFA с хроническим течением вирусного гепатита.

Список литературы:

1. Интерлейкины при хроническом вирусном гепатите / А.С. Логинов, Т.М. Царегородцева, М.М. Зотина и др. // Терапевтический архив. - 2001. - №2. - С.17-20.

2. Роль цитокинов и интерферона-α в патогенезе хронических диффузных заболеваний печени / А.В. Астахин, С.С. Афанасьев, А.А. Воробьев и др. // Клин. лаб. диагностика. - 2004. - №8. - С.48-50.

3. Полиморфизм промоторного участка гена фактора некроза опухоли альфа у больных вирусным гепатитом С / М.В. Смольникова, В.В, Авдошина, Н.П. Толоконская и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004. - Т.137, №3. - С.306 - 308.

4. Lantz M. Adherence of neutrophils induces release of soluble tumor necrosis factor receptor forms / M. Lantz, F. Bjornberg, I. Olsson, J. Richter // J. Immunology. - 1994. - № 152. - P. 1362-1369.

5. Stabilization of the bioactivity of tumor necrosis factor by its soluble receptor / D. Aderka, H. Engelmann, Y. Maor // J. Exp.Med.. - 1992. - №175. - P.323 - 329.