Ульяновский государственный университет

Введение
Микроценоз кишечника является биоиндикатором состояния макроорганизма, поэтому всесторонняя характеристика сочленов данного сообщества чрезвычайно важна для оценки действия дестабилизирующего фактора, в частности, инфекционного агента. Однако, в настоящее время с этой целью производят определение только количественных изменений отдельных видов микроорганизмов, что не позволяет в полной мере отразить межвидовые взаимодействия.
Целью настоящей работы являлось проведение оценки межвидового взаимодействия членов микроценоза кишечника при дисбиозе, вызванном инвазией простейших Blastocystis hominis.
Материалы и методы
Изучение микроценоза кишечника проводили на 30 нелинейных мышах массой 23,1+2,2 г., у которых воспроизводили кишечный бластоцистоз. Заражение проводили путем однократного введения культуры бластоцист per os. Для культивирования бластоцист использовали среду Suresh (SEM). Животным контрольной группы (30 животных) вводили только стерильную среду Suresh. Затем на 1, 3, 6, 9,12, 21, 24 сутки с момента заражения производили определение количественных изменений микрофлоры кишечника.
Полученные данные с целью определения параметров межвидовой корреляции микроорганизмов при бластоцистной инвазии были исследованы при помощи пакета статистической обработки данных Statistika 6. Основное внимание уделяли определению коэффициента корреляции между количественными показателями различных пар групп микроорганизмов.
Результаты эксперимента
После заражения, у экспериментальной группы животных отмечалось развитие диареи, отмечалась вялость, изменение характера шерстяного покрова. Начиная с 3 суток после заражения у мышей наблюдалось значительное уменьшение количества представителей нормальной микрофлоры. Так, содержание бактерий рода Bifidobacterium spp. снижалось до 1,54±0,25 lg КОЕ/г (в контроле – 5,01±0,47 lg КОЕ/г; p<0,05), рода Escherichia spp. до 1,03±0,19 lg КОЕ/г (в контроле – 3,54±0,26 lg КОЕ/г. p<0,05). Одновременно наблюдался рост  количества  представителей рода Klebsiella от 0,9±0,06 lg КОЕ/г (первые сутки после заражения) до 4,22±0,75 lg КОЕ/г к двенадцатым суткам. В контрольной группе количество представителей данного рода не превышало 1,06±0,03 lg КОЕ/г, у 7 животных контрольной группы (23,3 %) клебсиеллы не обнаруживались.
На 6-9 сутки эксперимента количество представителей нормальной микрофлоры достигало минимума: Bifidobacterium spp. 1,31±0,21 lg КОЕ/г (в контроле – 4,24±0,51 lg КОЕ/г; p<0,05), Escherichia spp.1,01±0,12 lg КОЕ/г (в контроле – 3,17±0,22 lg КОЕ/г p<0,05). После 9-х суток эксперимента наблюдался стабильный рост нормальной микрофлоры. Полное ее восстановление отмечалось на 21-24 день эксперимента. Количество транзиторных микроорганизмов снижалось, но даже после восстановления облигатной микрофлоры полной элиминации их не происходило, так, на 21 сутки эксперимента, количество представителей рода Klebsiella spp.  составило 1,2±0,11 lg КОЕ/г.
На основе полученных данных проводили расчет и анализ характера взаимодействия между микроорганизмами. Максимальная зависимость количественных показателей обнаружена между эшерихиями и бактероидами: коэффициент корреляции составил 0,45 в экспериментальной и 0,47 в контрольной группе. Значимые величины коэффициента корреляции отмечались между группами протеев и бактероидов, они составил 0,30 у животных экспериментальной группы и  0,31 в контроле, между протеями и кишечными палочками – 0,36 и 0,28 соответственно. Среди других изученных групп микроорганизмов наличия взаимосвязей количественных показателей не обнаружилось, значения модуля коэффициента корреляции не превышало 0,13.
В дальнейшем (на 9 сутки) наблюдались значительные изменения зависимостей между количественными показателями микроорганизмов. В частности, у них наблюдалось стойкое снижение значений коэффициента корреляции, на 9 сутки оно достигло 0,09 у эшерихий и бактероидов и  -0,15 между бактероидами и протеями. Контрольная группа изменений во взаимоотношениях микроорганизмов не показала, значения коэффициента корреляции изменялось не более чем на 0,06.
Обсуждение
 Полученные результаты свидетельствуют о том, что бластоцисты являются фактором, вызывающим дисбиотические изменения в кишечнике. В частности, после развития у мышей экспериментального бластоцистоза отмечалась активная колонизация кишечника бактериями родов Klebsiella и Proteus,  количество которых до начала эксперимента было незначительно.
 Отмечалось нарушение микроценотических связей среди представителей микрофлоры кишечника, что выражалось в отсутствии корреляции между количественными показателями представителей родов Escherichia и Bacterioides, Bacterioides и Proteus. Можно заметить, что в случае бактероидов и протеев зависимость менялась с прямой, на обратную, что свидетельствует о развивающихся конкурентных отношениях между данными группами микроорганизмов.
Выводы:
1.    Введение экспериментальным животным культуры простейших B.hominis вызывает развитие бластоцистной инвазии, сопровождающейся дисбиотическими изменениями микроценоза кишечника.
2.  Дисбиоз сопровождается  не только изменениями количественных показателей отдельных представителей микроценоза, но и нарушением закономерностей их распределения, что свидетельствует об изменении межвидовых взаимоотношений данного биотопа при экспериментальном бластоцистозе.