Ставропольский государственный университет
Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 2), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника
Современная микробиология базируется на постоянной модификации питательных сред и культивировании различных микроорганизмов. Состав питательных сред играет решающую роль для обнаружения различных микроорганизмов, а также для их идентификации. Проявление характерных культуральных, тинкториальных, морфологических, физиолого - химических особенностей микроорганизма напрямую зависит от состава питательной среды.
Для выявления эпифитной микрофлоры рекомендуется использовать среды, приготовленные из растительных отваров (картофельная среда, фасолевая среда № 23, капустная среда № 19), но в эти среды необходимо добавлять различные компоненты - пивное сусло или кукурузный экстракт, улучшающие питательную ценность среды. Так, например, на фасолевой среде бактерии образуют слишком много слизи, что в принципе затрудняет процесс идентификации микроорганизма по культуральным и тинкториальным свойствам. Картофельная среда очень специфична и в основном применяется для культивирования бактерий рода Clostridium и Caulobacter. На капустной среде в большей степени развиваются бактерии рода Bacillus. При культивировании на данных питательных средах невозможно в достаточной степени увидеть разнообразие эпифитной микрофлоры. Широко используемой средой для исследования микрофлоры филлоплана в настоящее время является мясопептонный агар (МПА). МПА считается универсальной средой для выращивания микроорганизмов как патогенный, так и сапрофитной микрофлоры. В то же время эта среда основана на использовании белков, нуклеиновых кислот, жиров, углеводов и минеральных веществ животного происхождения и могут быть трудноусвояемыми для специфичной микрофлоры филлоксеры и рибосферы, адаптированной к использованию растительных выделений.
Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение роста эпифитной микрофлоры на МПА и ТСЭМ (тыквенная среда для выращивания эпифитной микрофлоры), предложенная нами (2005).
ТСЭМ готовили следующим образом: тыкву, отобранную для приготовления среды, тщательно моют, очищают от кожуры, испорченных мест и снова моют. 200 г мелко нарезанной тыквы заливают 1 л водопроводной воды и кипятят 30 мин. Отвар фильтруют через вату, доводят объем до 1 л кипяченой водой, добавляют 20 г агар-агара, подщелачивают до рН 7,0 – 7,2. Стерилизуют 30 мин при 1 атм. Срок годности тыквенной среды 3 месяца (в холодильнике при температуре - +3-5 0С). Тыквенная среда светлее по сравнению с мясопептонной средой и при добавлении агар-агара, по консистенции она идентична МПА.
Для выделения микроорганизмов применяли метод отпечатков (в 3 – х кратной повторности) с поверхности листовой пластинки. После одновременного посева на МПА И ТСЭМ чашки Петри инкубировали в термостате при температуре (30 – 35 ºС) в течение 1 – 5 суток, последние 2 дня их оставляли на столе при дневном освещении для лучшей пигментации колоний. Представителей доминирующих таксономических группировок выделяли в чистую культуру и идентифицировали до рода по определителю бактерий Берджи на основании культуральных, морфо – физиологических и хемотаксономических признаков.
Результаты эксперимента показали, что разнообразие, интенсивность и качество роста эпифитной микрофлоры на тыквенной среде не уступает средам, которые используют для культивирования эпифитов. Установлено, что колонии микроорганизмов, выращенные на ТСЭМ не изменяют морфологические, тинкториальные, культуральные свойства. Практически все типичные представители эпифитной микрофлоры были обнаружены на тыквенной среде. Обращает на себя внимание более быстрое появление роста микробов на тыквенной среде. Некоторые микроорганизмы на тыквенной среде обнаруживаются через 2 часа. Колонии бактерий, которые идентичны по цвету МПА, ярко проявляются на тыквенной среде.
Проведенные исследования показывают, что использование ТСЭМ можно рекомендовать как полноценную питательную среду для изучения эпифитной микрофлоры.