Тот факт, что не у каждого человека, в организм которого попадают микобактерии туберкулеза, развивается заболевание, наводит на мысль о том, что в человеческой популяции существуют группы риска. Одним из возможных факторов риска развития туберкулеза является генетическая предрасположенность [1]. Современные методы исследования позволяют находить иммуногенетические маркеры, а также выявлять ассоциации между структурой определенных кластеров генов и заболеваниями. Так, согласно литературным данным, к иммуногенетическим маркерам туберкулеза относят гены интерлейкина (IL) 12В, IL1В и его рецепторного антагониста IL1RN [3, 4].

В связи с этим, целью настоящего исследования явилось определение характера распределения аллельных вариантов генов IL12В, IL1B и IL1RN среди больных туберкулезом, проживающих на территории г. Томска и Томской области, и оценка степени их ассоциированности с уровнем продукции соответствующих цитокинов.

В программу исследования вошли 50 больных европеоидного происхождения, проживающих на территории г. Томска и Томской области, с впервые выявленным инфильтративным туберкулезом легких (ТЛ) в возрасте от 18 до 55 лет (34 мужчины и 16 женщин), находившихся на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулезной больнице. В контрольную группу были включены 40 практически здоровых доноров с аналогичными характеристиками по полу и возрасту.

Материалом исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой вены утром натощак. Концентрацию IL-12 и IL-1β в супернатантах оценивали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с прилагаемой инструкцией («ProCon», Россия). Оптическую плотность регистрировали на микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия). Выделение ДНК проводили сорбентным методом с помощью коммерческого набора «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфных участков генов цитокинов (1188A/C гена IL12B; +3953A1/A2 гена IL1B и VNTR гена IL1RN) осуществляли с использованием рестрикционного анализа продуктов амплификации специфических участков генома (ПДРФ-анализ) согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия) с применением специфических праймеров. В дальнейшем продукты амплификации генов IL12В, IL1B подвергали действию рестриктазы TaqI. Продукты рестрикции разделяли в 3% агарозном геле.

Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по U-критерию Манна-Уитни. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами использовали критерий χ2 Пирсона и точный тест Фишера. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с помощью критерия отношения шансов (OR).

Проведенное нами иммуногенетическое исследование показало, что аллель А2 полиморфизма +3953 гена IL1B чаще выявлялся у больных ТЛ (р=0,008), чем у здоровых доноров. Кроме того у больных ТЛ заболевание оказалось ассоциированным с аллелем А2 гена IL1В (χ2=4,17, р=0,041). Поскольку IL-1β играет ключевую роль в иммунопатогенезе туберкулезной инфекции, а уровень его спонтанной продукции у больных ТЛ (как показал проведенный нами иммунофементный анализ) оказался ниже, чем у здоровых лиц, мы предположили, что его аллельные варианты могут вызывать различный фенотипический эффект. Однако у больных ТЛ, носителей разных генотипов полиморфного участка +3953 А1/А2 гена IL1B, уровень спонтанной и стимулированной продукции IL-1β статистически значимо не различался.

Поскольку продукт гена IL1RN является рецепторным антагонистом IL-1β, выполняя функцию специфического блокатора его биологического действия, нами было предпринято исследование VNTR полиморфизма гена IL1RN. Аллель А2 достоверно чаще встречался среди пациентов с ТЛ (χ2=9,92, р=0,019). При сравнении частот генотипов было выявлено более высокое количество гетерозигот А1/А2 среди больных ТЛ по сравнению с контролем (OR=2,10, 95%CI: 1,26–3,51, р=0,003). При анализе результатов подсчета OR регистрировалась более высокая подверженность туберкулезу индивидов с генотипом А1/А2 (OR=2,16, 95%CI: 1,28–3,68, p=0,003), протективным эффектом обладал полиморфизм А1/А1 гена IL1RN (OR=0,55).

В последние годы показано, что IL-12 является ключевым цитокином усиления клеточно-опосредованного иммунного ответа и инициации эффективной противоинфекционной защиты. Исследование характера распределения аллелей полиморфизма 1188А/С гена IL12B позволило найти ассоциацию данного полиморфного участка гена с ТЛ. Было установлено, что среди больных ТЛ статистически значимо чаще встречались гомозиготы по аллелю 1188С (р=0,035). Риск развития туберкулезного процесса у обладателей гомозиготного генотипа 1188С/С оказался в 7 раз выше, чем у индивидов с гомозиготным 1188А/А и гетерозиготным 1188А/С генотипом (OR=8,31, 95%CI: 1,15–169,30, р=0,030).

Было установлено также, что у больных ТЛ уровень спонтанной продукции IL-12 оказался выше, чем у здоровых доноров. Проведенные нами исследования ассоциированности генотипа клеток-продуцентов IL-12 с уровнем его спонтанной продукции показал, что генотип 1188С/С гена IL12B чаще выявляется среди индивидов с высоким уровнем продукции цитокина, что логично укладывается в концепцию о конкурентных отношениях Th1/Th2-зависимых звеньев иммунитета. Однако статистически значимой зависимости продукции этого цитокина от генотипа промоторного региона 1188А/С гена IL12B обнаружено не было.

Таким образом, иммуногенетическим фактором, обладающим протективным эффектом в отношении подверженности туберкулезу среди лиц европеоидной популяции, является А1/А1 генотип VNTR полиморфизма гена IL1RN. Степень риска развития туберкулезной инфекции ассоциирована с аллелем А2 полиморфизма +3953А1/А2 гена IL1В, а также с С/С генотипом полиморфного участка 1188А/С гена IL12B. При этом генотип 1188 С/С гена IL12B чаще выявляется среди индивидов с высоким уровнем продукции IL-12.

Список литературы:

1.      Ерохин, В. В. Современные представления о туберкулезном воспалении / В. В. Ерохин, З. С. Земскова // Проблемы туберкулеза и болезней лёгких. – 2003. - № 3. – С. 11-21.

2.      Эпидемическая ситуация в Российской Федерации и меры по ее стабилизации / Г. Г. Онищенко и др. // Проблемы туберкулеза. – 2003. - № 11. – С. 4-9.

3.      Human cytokine gene nucleotide sequence alignments / J. L. Bidwell, N. A. P. Wood, H. R. Morse et al. // Eur. J. Immunogenet. – 1998. – Vol. 25. – P. 83-266.