|
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Кафедра патофизиологии
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 67-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2008 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.
Посмотреть титульный лист сборника
Скачать сборник целиком (1,2 мб)
На сегодняшний день туберкулез является одной из наиболее
распространенных и тяжелых инфекций в мире и представляет огромную опасность
для здоровья населения. Смертность от него ежегодно составляет более 3 млн.
человек [2].
В иммунопатогенезе туберкулезной инфекции принципиальны два
фактора: генетическая организация инфицирующего штамма Mycobacterium
tuberculosis и характер иммунного ответа макроорганизма. Течение
воспалительного процесса, направленность противоинфекционного иммунитета при
туберкулезной инфекции в значительной мере определяются особенностями
межклеточной кооперации иммуноцитов, как модулируемыми в ответ на воздействие
Mycobacterium tuberculosis, так и генетически детерминированными. Это влияние
может быть опосредовано через изменение продукции и связывания
иммунорегуляторных цитокинов иммунокомпетентными клетками [1]. Интерлейкин
(IL)-2 играет ключевую роль в иммунопатогенезе туберкулезной инфекции.
Секретируемый преимущественно Тh1-лимфоцитами IL-2 обеспечивает в организме
высокую активность «вспомогательных» клеток и эффекторных цитотоксических
Т-лимфоцитов, поддерживая тем самым клеточный иммунный ответ. Имеются сведения,
что аллельный вариант Т-330G промотора гена предположительно ассоциирован с
уровнем продукции IL-2 [1, 3].
В связи с этим целью настоящего исследования было изучение
распространенности полиморфного участка T-330G промоторного участка гена IL2
среди больных туберкулезом, проживающих на территории г. Томска и Томской
области, и оценка степени ассоциированности генетического полиморфизма с
уровнем продукции соответствующего цитокина.
В программу исследования вошли 50 больных европеоидного
происхождения, проживающих на территории г. Томска и Томской области, с впервые
выявленным инфильтративным туберкулезом легких (ТЛ) в возрасте от 18 до 55 лет
(34 мужчины и 16 женщин), находившихся на стационарном лечении в Томской
областной клинической туберкулезной больнице. В контрольную группу были
включены 40 практически здоровых доноров с аналогичными характеристиками по
полу и возрасту.
Материалом исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой
вены утром натощак. Концентрацию IL-2 в супернатантах оценивали с помощью
твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с прилагаемой
инструкцией («ProCon», Россия). Оптическую плотность регистрировали на
микропланшетном фотометре «Multiskan EX» («ThermoLabSystems», Финляндия).
Выделение ДНК проводили сорбентным методом с помощью коммерческого набора
«ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфного участка
T-330G гена IL2 осуществляли с использованием рестрикционного анализа продуктов
амплификации специфических участков генома (ПДРФ-анализ) согласно инструкции,
прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия)
с применением специфических праймеров. В дальнейшем продукты амплификации гена
IL2 подвергали действию рестриктазы MaeI. Продукты рестрикции разделяли в 3%
агарозном геле.
Для проверки нормальности распределения показателей использовали
критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по
U-критерию Манна-Уитни. Распределение генотипов по исследованным полиморфным
локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью точного
теста Фишера. Для сравнения частот аллелей между различными группами
использовали критерий χ2 Пирсона и точный тест Фишера. Обработку результатов
генетических исследований осуществляли с помощью критерия отношения шансов
(OR).
Как показало проведенное нами исследование, у больных ТЛ было
зарегистрировано снижение уровня спонтанной продукции IL-2 (14,82±0,78,
р1<0,05) относительно соответствующих показателей у здоровых доноров, что
свидетельствует об угнетении цитокинсекретирующей функции мононуклеаров и может
служить одним из факторов, определяющих несостоятельность защитного потенциала
основных эффекторов антимикобактериального иммунного ответа – Тh1-лимфоцитов.
Анализ полиморфизма T-330G промоторного участка гена IL2 у здоровых
лиц показал преобладание частоты выявления гетерозиготного варианта T/G над
частотой регистрации гомозиготных вариантов. Оценка частоты встречаемости
аллельных вариантов гена IL2 среди пациентов с ТЛ позволила установить, что
генотип G/G промоторного региона Т-330G гена IL2 встречался у 41%
обследованных, вариант Т/G – у 50%. Самым редким оказался гомозиготный вариант
Т/Т (9%).
В связи с тем, что замена нуклеотида локализована в промоторной
области гена IL2, возможно, что ее фенотипический эффект может заключаться в
изменении экспрессии гена и, следовательно, уровня его белкового продукта.
Результаты проведенного нами исследования ассоциированности генотипа
клеток-продуцентов IL-2 с уровнем его спонтанной продукции позволили
установить, что среди индивидов со сниженным уровнем продукции цитокина
преобладают гомозиготный G/G и гетерозиготный Т/G генотипы промоторного региона
Т-330G гена IL2. У пациентов с ТЛ, носителей гомозиготного варианта Т/Т
полиморфного участка Т-330G гена IL2, продукция IL-2 соответствовала
контрольным значениям.
Таким образом, туберкулез легких сопровождается снижением секреции
Т-активирующего фактора – IL-2. При этом генотипы G/G и Т/G промоторного
региона Т-330G гена IL2 чаще выявляются среди индивидов с низким уровнем
продукции соответствующего цитокина.
Список литературы:
1. Симбирцев,
А. С. Цитокины: классификация и биологические функции / А. С. Симбирцев //
Цитокины и воспаление. – 2004. – Т. 3, № 2. – С. 16-21.
2. Онищенко,
Г. Г. Эпидемическая ситуация в Российской Федерации и меры по ее стабилизации /
Г. Г. Онищенко // Проблемы туберкулеза. – 2003. - № 11. – С. 4-9.
3.
Human
cytokine gene nucleotide sequence alignments: supplement 1 / J. L. Bidwell, N.
A. P. Wood, H. R. Morse et al. // Eur. J. Immunogenet. – 1999. – Vol. 26. – P.
135-223.
|
