Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 64-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2005 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.
Скачать сборник целиком (1 мб)
Актуальность проблемы. Туберкулез занимает одну из ведущих позиций среди наиболее распространенных инфекционных заболеваний. В России ухудшение эпидемической ситуации по туберкулезу с увеличением доли тяжелых распространенных форм болезней в структуре общей заболеваемости туберкулезной инфекцией началось с середины 80-х годов и продолжается по сей день. Основной причиной прогрессирующего течения туберкулезной инфекции и увеличения смертности от туберкулеза во всем мире является увеличение числа и распространение в человеческой популяции штаммов микобактерий туберкулеза (МБТ), моно- и полирезистентных к специфическим противотуберкулезным химиопрепаратам. На сегодняшний день более 10% впервые выявленных больных с открытой формой туберкулеза выделяют лекарственно-устойчивые МБТ [1, 3].
В настоящее время интерес исследователей направлен на изучение факторов иммунологической защиты, которые во многом определяют возможность заражения МБТ, а при развитии туберкулезной инфекции – течение и исход заболевания. Функциональное состояние иммунной системы оценивается с позиций структуры, метаболизма и функций ее клеточного звена – иммуноцитов. Морфофизиологические характеристики иммунокомпетентных клеток довольно непостоянны и зависят от разнообразных влияний, реализующихся как на клеточном, так и на организменном уровнях [4]. В связи с этим, при морфологическом анализе материала, полученного от больных туберкулезом, важно не только установить форму и активность процесса, но и оценить морфо-функциональное состояние иммунной системы на органном, клеточном и субклеточном уровнях.
Целью настоящего исследования явилось изучение структурных и функциональных особенностей лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких, выделяющих лекарственно-устойчивые штаммы M. tuberculosis.
Материал и методы исследования. Нами было обследовано 15 больных в возрасте от 20 до 60 лет с распространенным деструктивным лекарственно-устойчивым туберкулезом легких (ЛУТЛ). Лекарственную устойчивость МБТ определяли методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна–Йенсена. Обследованные пациенты имели устойчивость как минимум к трем препаратам – изониазиду, рифампицину, стрептомицину.
Контрольную группу составили 10 здоровых мужчин и женщин аналогичного возраста.
Материалом для исследования служили лимфоциты периферической крови.
Поверхностную архитектонику лимфоцитов периферической крови оценивали методом сканирующей электронной микроскопии на микроскопе JEM-100 CX II с растровой приставкой ASID-4D (JEOL) при ускоряющем напряжении 20 кВ. Препараты для электронной микроскопии готовили по методу Г.И. Козинца [1984].
Для изучения способности к трансформации в бластные формы, лимфоциты периферической крови культивировали in vitro в течение 72 ч в присутствии индукторов липополисахарида Escherichia coli (ЛПС, 10 мкг/мл) и фитогемагглютинина (ФГА, 10 мкг/мл), а также без индукторов. Количество бластных форм лимфоцитов оценивали с помощью МТТ-теста, основанного на изменении цвета связывающегося с клетками красителя 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенил-2-тетразолия из синего в желтый Оптическую плотность раствора культуральной суспензии измеряли при длине волны 560 нм [5].
Для оценки продукции ИНФ-γ и ИЛ-2 лимфоциты периферической крови культивировали in vitro в течение 24 ч в присутствии индукторов синтеза цитокинов – ЛПС (10 мкг/мл) и туберкулина (500 ТЕ), а также без индукторов. Определение уровня цитокинов в культуральной среде интактных и стимулированных клеток проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Статистическую обработку результатов осуществляли с помощью пакета программ Statistica (версия 6.0), используя непараметрический критерий Манна-Уитни.
Результаты исследования. В результате проведенных исследований было установлено снижение базальной (без стимуляторов) выработки ИЛ-2 у больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких по сравнению с таковым у здоровых доноров. Базальный уровень продукции ИНФ-γ у больных ЛУТЛ не отличался от контрольного, однако стимуляция клеточных культур бактериальным ЛПС приводила к усилению выработки данного цитокина более чем в 3,5 раза относительно нормы; туберкулин-стимулированная продукция ИНФ-γ, напротив, оказалась пониженной в среднем на 65% относительно нормы. На наш взгляд, вполне закономерно, что в процессе прогрессирования инфекции функции клеток крови могут быть не только активированы, но и подавлены, вследствие чего могут страдать синтез и рецепция цитокинов. Доказано прямое повреждающее действие на мононуклеары токсичных компонентов микробных клеток: липидных и гликолипидных фракций клеточной стенки микобактерий, корд–фактора, белковых дериватов и т.д. [1, 4].
Дальнейшие наши исследования показали, что у больных ЛУТЛ реакция бластной трансформации лимфоцитов, стимулированных ФГА, оказалась достоверно более выраженной по сравнению с аналогичным показателем у здоровых доноров, а также в сравнении с соответствующим значением при стимуляции клеточных культур ЛПС.
Изучение поверхностной архитектоники лимфоцитов периферической крови больных ЛУТЛ выявило достоверно значимое увеличение количества переходных (смешанных) форм лимфоцитов и клеток с углублениями на поверхности по сравнению с показателями у здоровых доноров.
Таким образом, у больных ЛУТЛ отмечаются выраженные нарушения морфо-функциональных свойств лимфоцитов, проявляющиеся изменением характера поверхностной топографии клеток, продукции цитокинов на фоне митоген-стимулированной активации пролиферативной активности Т-лимфоцитов.
Список литературы:
1. Изменение в продукции интерлейкина-1, фактора некроза опухоли и интерлейкина-2 в зависимости от состояния иммунитета у больных туберкулезом легких / В. Е. Кноринг, А. С. Симбирцев, И. Я. Сахарова и др. // Проблемы туберкулеза. - 1999. - № 4. - С. 31-35.
2. Козинец, Г.И. Поверхностная архитектоника клеток периферической крови / Г. И. Козинец, Ю. Симоварт. – Таллин, 1984.- 133 с.
3. Тунгусова, О.С. Молекулярные механизмы формирования лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза / О. С. Тунгусова А. О. Марьяндышев // Проблемы туберкулеза. - 2001. - № 6. - С. 48-49.
4. Фрейдлин, И.С. / Мононуклеарные фагоциты в противоинфекционной резистентности / И. С. Фрейдлин // Иммунология. -1995. - № 3. - С. 44-47.
5. Evalution of a tetrazolium-based colorimetric assay: assesment of chemosensitivity testing / J. Carmichael, W. G. DeGraff, A. F. Gazdar et al. // Cancer research. – 1987.- № 15. - Р. 936-942.
|