Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 65-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2006 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Посмотреть титульный лист сборника

Скачать сборник целиком (1,5 мб)

В настоящее время роль иммунной системы в канцерогенезе представляется двоякой. С одной стороны, она направлена на элиминацию чужеродного материала, в том числе и злокачественных клеток. С другой стороны, иммунологические механизмы участвуют в развитии и прогрессии рака. Но и сама опухоль, важной характеристикой которой является стадия регионарного метастазирования, обладает выраженным влиянием на состояние иммунной системы. Установлено, что в процессе существования и развития опухоль посредством характерных механизмов не только «ускользает» из-под иммунологического контроля, но и вызывает иммуносупрессию.

Иммуноциты под влиянием используемых раковыми клетками факторов подвергаются апоптозу – запрограммированной клеточной гибели. В результате повышения апоптоза снижается количество иммунокомпетентных клеток, что влечет за собой и функциональные нарушения. Это один из возможных вариантов возникновения опухолевой иммуносупрессии. В результате апоптоз индуцирует гибель иммуноцитов. С другой стороны происходит активация иммунной системы в ответ на присутствие и прогрессию в организме такого «чужого» объекта, как опухоль, связанного с этим  повышения количества антигенов. Как следствие, происходит гибель активированных клеток. Этот феномен носит название «смерть клетки, спровоцированная активацией» [3]. Кроме того, значительная часть применяемых в онкологии химиотерапевтических препаратов реализуют свой фармакологический эффект через индукцию апоптоза в клетках. Однако вследствие низкой селективности мишенями действия цитостатиков оказываются не только злокачественные, но и нормальные клетки, в частности, клетки иммунной системы [1]. 

Целью данной работы явилось определение состояния показателей иммунной системы с помощью оценки уровня апоптоза лимфоцитов периферической крови, их функциональной активности у больных раком молочной железы (РМЖ) до и после проведения неоадьювантной химиотерапии (НХТ) в зависимости от распрастронености опухолевого процесса.

Материал и методы. В исследование были включены 50 больных РМЖ с T_1-4N_0-2M_0.  Пациентки были разделены на 3 группы: N_0, N₁, N₂. Диагноз верифицирован морфологически. НХТ проводилась по схеме CАF (циклофосфан, адреамицин, фторурацил) стандартными дозами (2−3 курса). Материалом для исследования служила венозная кровь, взятая из локтевой вены, утром натощак. Контрольную группу составили 8 практически здоровых человек.

Для оценки функциональной активности Т-лимфоцитов использовали реакцию бласттрансформации (РБТЛ) in vitro классическим методом по В.В.Хоробрых в спонтанном и нагрузочном вариантах с фитогемаглютинином (ФГА) [2]. Результаты в импульсах в минуту определяли с помощью 3Н-тимидиновой метки. Уровень апоптоза лимфоцитов периферической крови, выделенных  стандартным методом, определяли морфологическим методом с использованием прижизненного ядерного красителя Hoechst 33342 [4].

 Результаты и обсуждения. Результаты проведенных исследований представлены в таблице.

Таблица

*- достоверное различие по сравнению с группой контроля (р<0,05)

**,***- достоверное различие между показателями пациентов двух групп (р<0,05)

Согласно результатам, уровень апоптоза до лечения  у пациентов с N₀, N₁, N₂ достоверно не отличается от аналогичных показателей здоровых людей. В спонтанном варианте РБТЛ независимо от степени метастазирования различие в группе исследуемых до начала НХТ не имеет статистически значимых отличий от уровня здорового контроля. В стимулированном варианте, позволяющем оценить пролиферативный потенциал и дифференцировку Т-лимфоцитов, у исследуемых с N₀, N₁, N₂ показатели статистически значимо снижаются по сравнению с контролем. Индекс пролиферации, отражающий отношение показателей стимулированного варианта к показателям спонтанного – функциональный резерв иммуноцитов, также достоверно снижен по сравнению с контролем. Анализируя эти факты, можно предположить, что до проведения НХТ, при начале метастазирования опухолевых клеток в лимфатические узлы и впоследствии, механизмом иммуносупрессии в большей степени является повышение активации клеток иммунной системы, следовательно, истощение пула функционально активных клеток.

После проведения НХТ уровень апоптоза у больных РМЖ с N₀  остался на прежнем уровне. То есть не выявлено зависимости гибели клеток от лечения НХТ. У больных РМЖ с N₁ и N₂ отмечено достоверное увеличение данного показателя по сравнению с таковым до начала лечения и с группой N₀. Следовательно, чувствительность лимфоцитов к проводимой НХТ зависит от распространенности регионарного метастазирования. Статистически значимых различий между группами пациентов до и после лечения и при N₀, и при N₁  в спонтанном варианте РБТЛ не выявлено, но отмечается тенденция к повышению показателя. Уровень функциональной активности в этом случае в группе с N₂ статистически значимо повышается. В стимулированном варианте и по индексу пролиферации наблюдается тенденция к снижению показателей вне зависимости от степени регионарного метастазирования, что можно объяснить повышением числа функционально активных мононуклеаров периферической крови. Это говорит о том, что функциональная активность лимфоцитов при проведении НХТ также зависит от распространенности регионарного метастазирования.

Таким образом, распространенность опухолевого процесса у больных РМЖ оказывает влияние на показатели системы иммунитета  при проведении НХТ, что проявляется в статистически значимом возрастании спонтанной пролиферативной активности и уровня апоптоза в клетках периферической крови при увеличении степени метастатического поражения регионарных лимфатических узлов.

Список литературы:

1. Сепиашвили, Р. И. Апоптоз в иммунологических процессах / Р. И. Сепиашвили, М. Г. Шубич, Н. В. Колесникова // Аллергология и иммунология. – 2002. − Т. 1, № 1. – С. 15–23.

2. Методы постановки реакции бласттрансформации в микроидентификации / В. В. Хоробрых, А. В. Пролин, А.Ф. Киркин и др. // Иммунология. – 1983. − № 3. − С. 76–79.

3. Чередеев, А. Н. Развитие патогенетического принципа оценки иммунной системы человека / А. Н. Чередеев, Л. В. Ковальчук // Микробиология. – 1997.− № 6. – С. 89–92.

4. Stridh, H. Apoptosis resistant bronchoalveolar lavage fluid lymphocytes in sarcodois / H Stridh // Thorax. – 2002. − № 5. – Р. 897–901.