²ГУ НИИ Вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (г. Москва)

Эта статья была опубликована в  сборнике научных трудов "Естествознание и гуманизм" с материалами Шестой Международной Телеконференции (24-29 октября 2011 года). Информационная страница сборника. 

                В настоящее время использование агонистов толл-подобных рецепторов (Toll like receptors – TLR) является перспективным методом иммунотерапии при инфекционных, аутоиммунных заболеваниях и злокачественных новообразованиях. Цитотоксическая активность эффекторов противоопухолевого иммунитета может быть значительно повышена путём применения иммуномодуляторов данной направленности различного, в том числе и растительного, происхождения. Одним из них является фукоидан – препарат, созданный на основе морских водорослей. Показано, что применение фукоидана способствует снижению степени микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в печени, почках и лёгких, возникающих при действии эндотоксина [1].

                Цель исследования – изучить влияние фукоидана на  иммунофенотипические характеристики мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) селезёнки, на структуру и клеточный состав лимфоидных органов мышей.

                Материалы и методы. Фукоидан вводили мышам линии СВА в дозе 200 мг/кг массы. Контрольную группу составляли интактные мыши. Субпопуляционную структуру лимфоцитов, выделенных из селезёнки контрольных и экспериментальных мышей, исследовали методом проточной цитометрии с применением моноклональных антител (Caltag Laboratories, США) против клеточных антигенов (CD3, NK1.1., CD3/NK1.1., CD4, СВ25, CD4/CD25, СВ8а, I-AK, CD8a/I-AK, H-2DB, CD19, H2DB/CD19, СВ5.2, СВ40, CD5.2/CD40). Также был проведён анализ иммунофенотипа МЛ при введении в культуры спленоцитов каждого из двух видов изучаемого препарата – фукоидана japonica и фукоидана cidcorideus в дозе 10 мкг/мл. Парафиновые срезы лимфоидных органов (тимуса и селезёнки), забранных через 4 и 24 часа после введения препарата, окрашивали гематоксилином и эозином, по методу Ван Гизона, метиловым зелёным и пиронином по Браше и Шифф-йодной кислотой по Мак-Манусу. Статистическую обработку данных проводили с применением t-критерия Стъюдента, используя стандартный пакет статистических программ Windows 2003 (StatSoft 6.0).

                Результаты и обсуждение. При проведении иммунофенотипического анализа выявлено, что внутрибрюшинное введение животным фукоидана приводит к увеличению в селезёнке в 1,5-2 раза числа натуральных киллеров (NK⁺) и натуральных киллеров-Т-клеток (НКТ – CD3⁺/NK1.1.⁺), в 2-6 раз – количества активированных Т- и В-лимфоцитов (CD25⁺, CD5.2⁺ и CD5.2/CD40⁺-клеток), а также в 1,5 раза – содержания цитотоксических лимфоцитов (CD8a).

                Морфологические исследования лимфоидных органов показали, что под действием фукоидана расширяется корковое вещество долек тимуса, в мозговом веществе появляются многочисленные тельца Гассаля крупных размеров. В селезёнке выявляются фолликулы с расширенными периартериальными муфтами и единичными реактивными центрами. Некоторые фолликулы слиты в конгломераты. Красная пульпа гиперемирована, в ней хорошо определяются венозные синусы.

                Введение каждого из двух препаратов фукоидана в культуры мононуклеарных лейкоцитов селезёнки мышей приводит к почти одинаковым изменениям в субпопуляционной структуре спленоцитов. В культуральной взвеси статистически значимо увеличивается количество натуральных киллеров, НКТ-клеток, активированных Т-хелперов, В-лимфоцитов, но снижается число CD3⁺ и CD8⁺-клеток. Обращает на себя внимание выраженная экспрессия TLR на поверхности клеток (табл.).

                Заключение. Проведённые исследования показали, что иммуномодулятор растительного происхождения — фукоидан — модулирует активность эффекторов врождённого и адаптивного иммунитета и приводит к пролиферации лимфоидных клеток в первичных и вторичных лимфоидных органах. Перспективным в отношении использования данного иммуномодулятора в иммунотерапии является его способность стимулировать экспрессию толл-подобных рецепторов на поверхности мононуклеарных лейкоцитов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кузнецова Т.А., Агафонова И.Г., Крохмаль Т.С., Звягинцева Т.Н., Филонова Н.В. Гематопротекторные свойства фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2010. - № 4. – С. 32-35.

Таблица

Количество мононуклеарных лейкоцитов в культурах при введении фукоидана, %

Примечание: ^* - p<0,05 по отношению к контролю по t-критерию Стьюдента.