Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам Международной 64-й научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г.Томск, 2005 год) под редакцией проф. Новицкого В.В. и д.м.н. Огородовой Л.М.

Скачать сборник целиком (1 мб)

В настоящее время туберкулез занимает ведущее место в структуре смертности от инфекционных заболеваний. Согласно мировой статистике ежегодно от туберкулеза погибают 3 млн. человек. Стремительный рост заболеваемости туберкулезом во многом обусловлен отсутствием эффективных вакцин и множественной лекарственной резистентностью возбудителя туберкулеза. Кроме того, до сих пор отсутствуют четкие представления об иммунопатогенезе туберкулезной инфекции и, в частности, понимание того, каким образом микобактериям туберкулеза удается преодолеть иммунный надзор. Многочисленными исследованиями показано, что течение туберкулеза легких сопряжено с развитием Т-клеточной иммуносупрессии [G. Vanham et al., 1997]. В последние годы высказывается мысль о возможной делеции иммунных клеток вследствие активации апоптоза [C. S. Hirsh et al., 1999].

Репарация ДНК - важнейший процесс, обеспечивающий целостность генома клетки. Эксцизионная репарация ДНК путем удаления поврежденных азотистых оснований вызывает защиту геномной ДНК от повреждений эндогенными генотоксическими факторами. Установлено, что подавление ДНК-репаративного синтеза приводит к накоплению в ДНК однонитевых брешей, которые в дальнейшем трансформируются в двунитевые разрывы. Это вызывает инактивацию клетки и ее гибель [Н. Л. Василенко, Г. А. Невинский, 2003].

Учитывая вышесказанное, целью нашей работы явилась оценка активности системы ДНК-репарации и апоптоза у больных туберкулезом легких.

Под наблюдением находились 13 первичных больных (мужчины в возрасте 23-55 лет) с инфильтративным и диссеминированным туберкулезом легких, ранее не получавших противотуберкулезной терапии, и 10 пациентов через 2 месяца после антимикобактериального лечения. Диагноз туберкулеза легких устанавливали на основании данных микроскопии мокроты и рентгенологического исследования легких. Контрольную группу составили 10 здоровых мужчин в возрасте 18-55 лет.

Активность ДНК-репарационной системы лимфоцитарных клеток исследовали методом сцинтилляционной радиометрии [Н. П. Дубинин, Г. Д. Засухина, 1975]. В качестве источника ультрафиолетового излучения использовали две бактерицидные лампы «ДБ-15» (λ=254 нм), расположенные на фиксированном расстоянии (30 см) от объекта, что определяет дозу и мощность облучения соответственно 15 Дж/м2 и 1,6 Дж/с. Измерение радиоактивности (импульс/с) проводили на толуоловом сцинтилляционном счетчике Mark III (США). Оценку апоптоза проводили с помощью спектральной фотометрии с использованием Annexin V-содержащего набора фирмы BD Biosciences (США). Индукцию апоптоза проводили путем добавления в суспензию клеток 3% раствора Н2О2 с последующим культивированием клеток в течение 24 ч.

Проведенные нами исследования показали, что уровень репаративного синтеза ДНК в лимфоцитах у больных инфильтративным туберкулезом легких до лечения оказался сниженным по сравнению с таковым в группе здоровых доноров (табл. 1) и восстанавливался до нормальных значений после 2-х месяцев интенсивной противотуберкулезной терапии. При этом у больных диссеминированной формой туберкулеза легких активность ДНК-репарации в лимфоцитах оставалась в пределах контрольного уровня (табл. 1).

Изучение активности ДНК-репарации в моноцитах периферической крови у больных туберкулезом легких вне зависимости от клинической формы заболевания до лечения позволило выявить увеличение индекса стимуляции ДНК-востановления в сравнении со значениями в контроле. После 2  месяцев химиотерапии уровень ДНК-репаративных процессов в моноцитах сохранялся повышенным (табл. 1).

Таблица 1

Индекс стимуляции репарации ДНК (ИС) и активность апоптоза лимфоцитов и моноцитов у здоровых доноров и у больных туберкулезом легких, Х±m

Примечание: p1 - достоверность различий по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров; p2 - у больных с инфильтративной формой туберкулеза легких в соответствующий период исследования.

Изучение спонтанного и стимулированного апоптоза лимфоцитов и моноцитов показало существенное повышение содержания апоптотических клеток при инфильтративном и диссеминированном туберкулезе легких на всех сроках исследования в сравнении с величиной аналогичных показателей в контрольной группе (рис. 1).

Таким образом, проведенное исследование позволило выявить у больных туберкулезом легких стимуляцию апоптоза мононуклеаров крови и увеличение индекса стимуляции репарации ДНК в моноцитах как до, так и на фоне химиотерапии.