|
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
Центральная научно-исследовательская лаборатория
Отделения кардиологии Медицинского факультета Вандербилтского университета, г. Нэшвилл, штат Теннесси, США
Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.
Аденозин – эндогенный нуклеозид, промежуточный продукт пуринового метаболизма, играет важную роль в регуляции тканевого гомеостаза. Его количество в тканях существенно повышается при воспалении, достигая концентрации десятков и сотен микромоль. Аденозин осуществляет свои эффекты посредством активации аденозиновых рецепторов (A1, A2A, A2B и A3) [1]. Бронхиальная астма (БА) характеризуется хроническим, персистирующим воспалением дыхательных путей в сочетании со структурными изменениями ткани легкого. Дендритные клетки (ДК) играют важную роль в поддержании легочного воспаления: презентирование ДК антигена приводит к сдвигу иммунного ответа в сторону Th2 [2]. Мы предположили, что повышенная концентрация аденозина может способствовать дифференцировке моноцитов в ДК с провоспалительными свойствами (CD14+/CD1а-/CD209+), а также, что есть люди с высокой и низкой чувствительностью к аденозину. Для проверки нашей гипотезы мы сравнили антигенный фенотип на начальном этапе дифференцирования моноцитов в ДК у больных БА и здоровых доноров.
Цель: Исследовать эффекты аденозина на процесс формирования антигенного фенотипа ДК, полученных из моноцитов периферической крови больных БА и здоровых доноров.
Материал и методы: В исследование было включено 33 больных БА от 19 до 51 года. Клиническое обследование и диагностику провели сотрудники кафедры факультетской педиатрии с курсом детских болезней лечебного факультета Сибирского государственного медицинского университета (заведующий – член-корр. РАМН, д.м.н., профессор Огородова Л. М.), областного детского центра клинической иммунологии и аллергологии (Областная детская больница г. Томск, главный врач – Сальников В.А.). Диагноз верифицировали на основании критериев ВОЗ, документа GINA (2006 г.). В контрольную группу вошли 21 практически здоровых донора. Статистически значимых различий по возрасту и полу между группами не было. Выделение мононуклеаров из гепаринизированной венозной крови осуществляли методом центрифугирования в градиенте плотности Фиколл-Гипак (ПанЭко, Россия). Выделение моноцитов из мононуклеарной фракции проводили путем центрифугирования клеточной суспензии на градиенте плотности Перколла (SIGMA, США). Культивирование моноцитов проводили в полной питательной среде RPMI в присутствии ИЛ-4 (RD Systems, США) и ГМ-КСФ (RD Systems, США) в СО2-инкубаторе в течение 38 часов. Для стимуляции аденозиновых рецепторов использовали негидролизуемый аналог аденозина NECA (5'-N-этилкарбоксамидоаденозин) (SIGMA, США). Для определения уровня экспрессии поверхностных антигенов, клетки инкубировали с флюорохром-конъюгированными моноклональными антителами: CD1a-FITC (Dako, Дания), CD14-PE, CD209-PerCP-Сy 5.5 (BD Farmgen, США), последующим анализом на проточном цитофлуориметре FACS Calibur (BD Biosciences, США). Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программы SPSS Statistics 17.0. Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Шапиро-Уилка; т.к. ни одна из выборок не была распределена по нормальному закону, проверку статистической значимости равенства выборочных средних зависимых выборок осуществлялась с помощью критерия Уилкоксона (различия считали статистически значимыми при р<0,05).
Результаты и обсуждение. При стимуляции аденозиновых рецепторов (АР) процент CD14+/CD1a-/CD209+ клеток возрастает с 1,35% (0,59%–5,785%) до 4,12% (1,62%–6,94%) у здоровых доноров (p<0,05) и с 4,16% (0,695%–14,515%) до 6,09% (1,105%–22,205%) (p<0,05) у больных БА. Были обнаружены существенные индивидуальные различия в ответ на стимуляцию АР как у больных БА, так и у здоровых доноров. В соответствии с уровнем индивидуальной реакции на аденозин, мы выделили по две подгруппы, в которые вошли люди с высоким ответом на аденозин (ВОА, подгруппа 1) и низким ответом на аденозин (НОА, подгруппа 2).Стимуляция АР повышала процент этих клеток у людей с ВОА с 5,78% (0,97%–10,72%) до 6,94% (3,0%–22,26%) (p<0,05). Не было обнаружено статистически значимых различий при стимуляции АР людей с НОА с 1,15% (0,14%–4,48%) до 1,53% (0,50%–6,55%) (W=-103, p=0,073).
Вывод: Проведенные исследования подтвердили нашу гипотезу о вовлечении аденозина и аденозиновых рецепторов в формирование антигеного фенотипа, характерного для ДК с провоспалительными свойствами.
Список литературы:
1. Adenosine receptors: therapeutic aspects for inflammatory and immune diseases / G. Hasko, J. Linden, B. Cronstein, P. Pacher // Nature Rev. Drug Discov., – 2008. – Vol. 7. – P. 759-770.
2. Lung dendritic cells : targets for therapy in allergic disease / B. N. Lambrecht // Curr. Mol. Med., – 2008. – Vol. 8. – P. 393-400.
Работа выполнена при поддержке ФЦП 1.5, госконтракт № 02.740.11.5150
|
