Эта статья опубликована в сборнике статей по материалам XII Российского конгресса молодых  ученых  с  международным  участием "Науки о человеке"  (Томск, 26-27 мая 2011 г.) / под ред.   Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2011. – 104 с. 

Скачать сборник целиком (PDF, 1,6 MB)

Туберкулез признан одной из самых серьезных медико-социальных проблем. Туберкулезная инфекция протекает достаточно длительное время и постепенно приводит к истощению пула участников иммунного ответа. Исследование цитокинового профиля имеет большое значение для оценки состояния иммунной системы при заболеваниях различного генеза, в том числе и туберкулёзе. Не у каждого человека, в организм которого попадают Mycobacterium tuberculosis, развивается заболевание, что определяет существование в человеческой популяции групп риска. Одним из возможных факторов риска развития туберкулеза является генетическая предрасположенность. В связи с этим изучение роли характера распределения аллельных вариантов промоторных регионов С-592Л гена интерлейкина-10 (IL10) и G-308A гена фактора некроза опухолей-альфа (INFА), а также степени их ассоциированности с уровнем продукции соответствующих белковых продуктов в иммунопатогенезе туберкулезной инфекции представляется весьма актуальным, поскольку полученные результаты могут стать основой разработки новых способов диагностики и иммунокоррекции данной патологии.

Материал и методы. В программу исследования вошли 160 пациентов европеоидного проис-хождения с впервые выявленным инфильтративным туберкулёзом лёгких (ТЛ) (114 мужчин и 46 женщин в возрасте от 19 до 55 лет), находившихся на стационарном лечении в Томской областной клинической туберкулёзной больнице. В контрольную группу были включены 102 здоровых донора с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту. Материалом исследования являлась периферическая кровь, взятая утром натощак из локтевой вены. Для определения уровней IL-10 и TNF-a в супернатантах культуральных суспензий использовали твердофазный иммуноферментный метод. Исследование полиморфных участков генов цитокинов проводили с использованием аллель- специфической полимеразной цепной реакции. Было исследовано два полиморфных варианта генов цитокинов: С-592Л гена IL10 и G-308A гена ТЫЕА. Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по t-критерию Стъюдента и U-критерию Манна-Уитни. Обработку результатов генетических исследований осуществляли с помощью критерия отношения шансов (OR) с расчетом для него 95% доверительного интервала.

Результаты. Как показало проведенное нами исследование, у больных ТЛ продукция TNF-α оказалась снижена, а IL-10 повышена более чем в 2 раза по сравнению с группой контроля.

В ходе иммуногенетического исследования было выявлено, что среди больных ТЛ преобладали индивиды с генотипом СА (53,23%) полиморфного участка С-592Л гена IL10. Так же было показано, что в группе больных ТЛ достоверно реже, чем в группе контроля, встречались гомозиготы СС (Х2=6,07, р<0,05), а чаще - гомозиготы АА (χ²= 10,24, р<0,05) полиморфизма С-592Л гена IL10. Была показана положительная ассоциация генотипа АА (0R=4,04) и аллеля А (0R=1,76) с ТЛ: наличие этих аллельных вариантов свидетельствовало о повышенном риске развития туберкулезной инфекции. Максимальный уровень продукции IL-10 был ассоциирован с гомозиготным по аллелю А генотипом полиморфизма С-592Л гена IL10 (114,04 пг/мл), а у носителей генотипа СС был обнаружен наиболее низкий уровень продукции IL-10 (19,27 пг/мл). Было так же показано, что уровень секреции IL-10 у гомозигот по аллелю С (19,27 пг/мл, p<0,05) и гетерозигот (52,14 пг/мл, p<0,05) и гомозигот АА (114,04 пг/мл, p<0,05) по полиморфному участку С-592Л гена IL10 среди больных ТЛ достоверно увеличен по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров. Таким образом, генетически детерминированный избыток IL-10 препятствует формированию гранулемы и тем самым способствует диссеминации туберкулезной инфекции.

При исследовании зависимости распределения аллелей и генотипов полиморфного участка G-308Л гена TNFА и продукции соответствующего цитокина выявлено, что среди больных ТЛ преобладали индивиды с генотипом GЛ (56,25%). Зарегистрированное нами значительное увеличение у больных ТЛ частоты генотипа GA промоторного региона G-308Л гена TNFА (χ²=3,90; р<0,05), по сравнению с аналогичными параметрами у здоровых лиц, указывало на его положительную ассоциацию (OR=1,76) с риском развития туберкулезного процесса. При исследовании зависимости уровня продукции TNF-a в зависимости от генотипа полиморфизма G-308Л гена TNFА показано, что наибольший уровень секреции был свойственен носителям АА генотипа (193,80 пг/мл, p<0,05), а наименьший - носителям гомозиготного по аллелю G генотипа (38,76 пг/мл, p<0,05) полиморфизма G-308Л гена TNFА. Кроме того, у больных ТЛ вне зависимости от генотипа полиморфного участка G-308Л гена TNFA выявлено достоверное (p<0,05) снижение продукции TNF-α (GG: 38,76 пг/мл; GA: 104,50 пг/мл; AA: 193,80 пг/мл) по сравнению с аналогичными показателями у здоровых доноров. То, какую роль играет TNF-a при туберкулезе (протективную или деструктивную), зависит, по-видимому, от его количественного содержания в тканях: слишком высокая продукция вызывает выраженные воспалительные изменения в легких, а недостаток TNF-a снижает иммунный надзор организма, что сопровождается глубокой дизрегуляцией иммунного ответа, нарушением процесса гранулемообразова- ния, неспособностью контролировать рост M. tuberculosis, вследствие чего могут развиться тяжелые, остропрогрессирующие формы ТЛ.

Таким образом, распределение аллельных вариантов генов цитокинов среди больных ТЛ харак-теризуется доминированием генотипов СА полиморфного участка С-592А гена IL10 и GA полиморфизма G-308A гена TNFA. Подверженность ТЛ положительно ассоциирована с аллелем А и генотипом АА промоторного региона C-592A гена IL10, а также с генотипом GA полиморфизма G-308A гена TNFA. Максимальный уровень продукции IL-10 ассоциирован с АА генотипом полиморфизма С- 592A гена IL10, TNF-α - с гентипом АА полиморфизма G-308A гена TNFA.