Эта статья опубликована в сборнике статей по материалам XII Российского конгресса молодых  ученых  с  международным  участием "Науки о человеке"  (Томск, 26-27 мая 2011 г.) / под ред.   Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2011. – 104 с. 

Скачать сборник целиком (PDF, 1,6 MB)

Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) - инфекционное трансмиссивное природно-очаговое за-болевание с тенденцией к хроническому течению, поражающее различные органы и системы.

Известно, что десять акроцентрических хромосом человека (акроцентрики D- и G-групп) формируют ядрышко. При этом нуклеогенез по существу определяется транскрипционной активностью рибосомных генов, локализованных в спутничных нитях, в так называемых районах ядрышкового организатора (ЯОР) акроцентриков. Таким образом, размер, форма и число ядрышек являются важнейшими показателями уровня пролиферативной активности и функционального состояния клетки. В последние годы, в связи с появлением новых компьютерных технологий, возрос интерес к изучению субпопуляционной и функциональной гетерогенности клеток периферической крови в норме и при различной патологии, в частности при лейкозах. Наиболее часто метод выявления числа аргирофиль- ных районов ядрышкового организатора применяется для оценки пролиферативной активности злокачественных клеток [3]. Вместе с тем, публикаций, посвященных морфометрическому анализу клеток крови при инфекционных заболеваниях крайне мало [1].

Цель работы - установить особенности реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) с использованием морфометрических методик, а также определить уровни продукции интерлейкина-4 (ИЛ-4) лимфоцитами периферической крови в ответ на стимуляцию фитогемагглютинином (ФГА) у больных с различными клиническими формами острого ИКБ.

Материал и методы. Для оценки реакции бластной трансформации лимфоцитов использовался морфологический метод. Культуры лимфоцитов были стимулированы митогеном ФГА по стандартной методике в течение 3-х суток. Кроме стандартного метода окраски азуром и эозином, для морфологической оценки пролиферативного ответа клеток в культурах, полученных от больных острым ИКБ (n=28) и группы сравнения (n=18), нами было использовано выявление ЯОР с применением нитрата серебра [2]. Определенная с помощью программы анализа изображений ImageJ суммарная площадь аргирофильных ЯОР в ядре находится в прямой зависимости от транскрипционной активности локализованных в акроцентрических хромосомах генов, кодирующих прерибосомную РНК, и отражает пролиферативную активность клетки. Спонтанные и стимулированные уровни продукции ИЛ-4 в супернатантах были определены с помощью твердофазного иммуноферментного метода.

Результаты и обсуждение. В стимулированных ФГА культурах лимфоцитов, полученных от больных острым ИКБ, было установлено достоверное снижение процента бласттрансформированных клеток, площади аргирофильных ЯОР, при одновременном повышении содержания ИЛ-4 в суперна- тантах, по сравнению с соответствующими культурами здоровых людей (P<0,01). Показатели РБТЛ, площади аргирофильных ЯОР, а также уровни продукции ИЛ-4, у больных с эритемной серонегатив- ной формой ИКБ были существенно выше (P<0,05), по сравнению с группами больных с эритемной и безэритемной серопозитивными формами заболевания.

Заключение. Таким образом, использование окраски ЯОР может быть применено для оценки РБТЛ. Результаты, полученные при стимуляции культур ФГА могут свидетельствовать о подавлении Т-клеточного иммунного ответа у больных в острый период ИКБ, особенно в случае эритемной и безэритемной серопозитивными форм заболевания.