Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Томский государственный университет, г. Томск

НИИ онкологии СО РАМН, г. Томск

Лаборатория иммунологии

Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 71-й итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 14-16 мая 2012 г.), под ред. В. В. Новицкого, Н.В. Рязанцевой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2012. − 335 с. 

Скачать сборник (MS Word, 1 мб)

Скачать программу конференции  

Актуальность. Инвазивный протоковый рак (ИПР) без специфического типа (от англ. not otherwise specified (NOS)) составляет большую часть (65-80 %) случаев рака молочной железы, при этом диагностика и отнесение его к определенному подтипу затруднены из-за отсутствия конкретных гистологических и/или молекулярно-генетических критериев. Высокая клиническая вариабельность ИПР NOS, вероятно, является следствием его внутриопухолевой гетерогенности, которая проявляется в наличии 5 типов морфологических структур: альвеолярных, тубулярных, трабекулярных, солидных и дискретных. В настоящее время, в доступной литературе, отсутствуют сведения о молекулярно-генетической характеристике данных структур и механизмах, приводящих к их формированию.

Цель. Изучить генетический полиморфизм и экспрессию ключевых генов множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) и химиочувствительности в морфологических структурах и их локальном микроокружении в опухоли ИПР NOS.

Материал и методы. Тубулярные, альвеолярные, трабекулярные структуры и их локальное микроокружение были получены с помощью технологии лазерной микродиссекции PALM (Carl Zeiss, Германия) из формалин-фиксированных парафин-залитых опухолевых срезов одного образца ИПР NOS. Выделение ДНК и РНК из микродиссектированных клеточных образцов осуществлялось с использованием наборов QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, США) и RNeasy FFPE Kit (Qiagen, США). Для увеличения копийности нуклеиновых кислот и их пригодности для последующего молекулярно-генетического анализа проводилась полногеномная амплификация ДНК и РНК с предварительным получением из последней кДНК. Генетический полиморфизм (SNP, одиночные нуклеотидные замены) оценивался с помощью микроматрицы Cancer SNP Panel (Illumina, Inc.). С помощью метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием TaqMan технологии оценивалась экспрессия генов МЛУ: ABCB1, ABCC1, ABCC2, ABCC5, ABCG2, GSTP1, MVP и химиочувствительности: TOP1, TUBB3, TYMS.

Результаты. SNP-анализ является эффективным методом детекции соматических повреждений в геноме опухолевых клеток. Несмотря на низкий контрольный параметр (call rate ~ 50%), Cancer SNP Panel показала значительные вариации генотипов между различными типами морфологических структур и их локальным микроокружением. Такие изменения были обнаружены в отношении следующих полиморфизмов: rs6179 (ген GHR), rs3740616 (LMO2), rs717620 (ABCC2), rs4623993 (k-Ras), rs1050008 (MX1), rs569421 (GATA3) и rs529359 (PGR). Высокий уровень экспрессии генов МЛУ и химиочувствительности часто обнаруживается в опухолях молочной железы. В нашем исследовании были выявлены значительные различия в уровне экспрессии этих генов между различными типами морфологических структур и их локальным микроокружением. В этом аспекте интересно отметить следующее: среди других типов клеточных объединений тубулярные структуры характеризовались высоким уровнем экспрессии генов МЛУ и химиочувствительности, в то время как их микроокружение показало полное отсутствие подобной активности. Напротив, пониженная активность изучаемых генов в альвеолярных структурах сочеталась с повышением их экспрессии в микроокружении данных клеточных объединений. Интересно, что в трабекулярных структурах, также как и в их микроокружении, обнаруживался схожий уровень экспрессии анализируемых генов. Весьма вероятно, что различные типы морфологических структур, и их локальное микроокружение, составляют единое целое в активности генов МЛУ и химиочувствительности.

Выводы. Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о том, что изученные типы морфологических структур, очевидно, являются различными опухолевыми клонами со специфическим микроокружением.