|
Àâòîðû: Í.Ñ. Ôàòòàõîâ1, Ñ.Â. Ðûæîâ2, Ê.Ñ. Þðüåâà2, Ê.Â. Ãîðåìûêèí2, Å.Â. Êîðîòêàÿ2, È.Â. Ñàëòûêîâà2, Î.Ñ. Ôåäîðîâà2, Å.Ý. Êðåìåð2
Íàó÷íûé ðóêîâîäèòåëü: ä-ð ìåä. íàóê, ãë. íàó÷. ñîòð. À.Ý. Ñàçîíîâ
1Ñèáèðñêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò, ã. Òîìñê
2ÖÍÈË ÑèáÃÌÓ, ã. Òîìñê
Ýòà ðàáîòà áûëà îïóáëèêîâàíà â cáîðíèêå
ìàòåðèàëîâ I Âñåðîññèéñêîé íàó÷íîé ñòóäåí÷åñêîé êîíôåðåíöèè ñ
ìåæäóíàðîäíûì ó÷àñòèåì «ÌÅÄÈÊÎ-ÁÈÎËÎÃÈ×ÅÑÊÈÅ ÍÀÓÊÈ: ÄÎÑÒÈÆÅÍÈß È
ÏÅÐÑÏÅÊÒÈÂÛ», ïîä ðåäàêöèåé ïðîô., ä-ðà ìåä. íàóê Ñ.È. Êàðàñÿ (ã. Òîìñê, 10-11 íîÿáðÿ 2011 ãîäà).
Ââåäåíèå. Èññëåäîâàíèÿ ïîñëåäíèõ ëåò ñâèäåòåëüñòâóþò î âåäóùåé ðîëè äåíäðèòíûõ êëåòîê â ãåíåðàöèè ïåðâè÷íîãî èììóííîãî îòâåòà ïðè áðîíõèàëüíîé àñòìå è ðàçâèòèè ëåãî÷íîãî âîñïàëåíèÿ.  äåíäðèòíûõ êëåòêàõ, ïîëó÷åííûõ èç ìîíîöèòîâ, àäåíîçèí ñïîñîáñòâóåò ïðîäóêöèè öèòîêèíîâ îñòðîé ôàçû âîñïàëåíèÿ, òàêèõ êàê èíòåðëåéêèí 6 (ÈË-6) è èíòåðëåéêèí 8 (ÈË-8), êîòîðûå, â çàâèñèìîñòè îò ìåñòà è õàðàêòåðà âîñïàëèòåëüíîãî ïðîöåññà, ëèáî óñóãóáëÿþò åãî ðàçâèòèå, ëèáî, íàîáîðîò, ñíèæàþò èíòåíñèâíîñòü âîñïàëèòåëüíûõ ðåàêöèé. Îäíàêî æå, ðîëü àäåíîçèíà â ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ìÐÍÊ ýòèõ öèòîêèíîâ â ìîíîöèòàõ îñòàåòñÿ íåâûÿñíåííîé. Èçó÷åíèå ýôôåêòîâ ñòèìóëÿöèè ÀÐ â õîäå àêòèâàöèè ìîíîöèòîâ ñïîñîáñòâóåò ïîíèìàíèþ ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ ðàçâèòèÿ âîñïàëåíèÿ.
Öåëü ðàáîòû. Èçó÷èòü ýôôåêòû ñòèìóëÿöèè àäåíîçèíîâûõ ðåöåïòîðîâ ìîíîöèòîâ â ðåãóëÿöèè ýêñïðåññèè ìÐÍÊ èíòåðëåéêèíîâ ÈË-6 è ÈË-8 ó áîëüíûõ áðîíõèàëüíîé àñòìîé.
Ìàòåðèàë è ìåòîäû. Èññëåäîâàíèå áûëî ïðîâåäåíî íà ìîíîöèòàõ, ïîëó÷åííûõ èç âåíîçíîé êðîâè 37 áîëüíûõ áðîíõèàëüíîé àñòìîé è 15 çäîðîâûõ ëèö. Äëÿ ñòèìóëÿöèè àäåíîçèíîâûõ ðåöåïòîðîâ èñïîëüçîâàëè íåãèäðîëèçóåìûé àíàëîã àäåíîçèíà - N-ýòèëêàðáîêñàìèäîàäåíîçèí (NECA) â êîíöåíòðàöèè 30 ìêÌ, âðåìÿ èíêóáàöèè ìîíîöèòîâ â ïðèñóòñòâèè NECA ñîñòàâèëî 38 ÷àñîâ. Âûäåëåíèå ìîíîöèòîâ èç ìîíîíóêëå-àðíîé ôðàêöèè ïðîâîäèëè ñ èñïîëüçîâàíèåì äâîéíîãî ãðàäèåíòà ïëîòíîñòè ïåðêîëëà (1,130 ã/ìë, pH 8,5 - 9,5, 25îÑ) («Sigma», ÑØÀ). Ìîíîöèòû, ñîáðàííûå ñ ðàçäåëà ôàç, èñïîëüçîâàëè äëÿ ïðèãîòîâëåíèÿ ñóñïåíçèè ñ êîíöåíòðàöèåé ìîíîöèòîâ 5 x 105 êëåòîê/ìë. Ñóñïåíçèþ ãîòîâèëè íà îñíîâå ñðåäû RPMI-1640. Âûäåëåíèå îáùåé ÐÍÊ èç ìîíîöèòîâ ïðîâîäèëè ñ ïðèìåíåíèåì íàáîðà äëÿ âûäåëåíèÿ îáùåé ÐÍÊ «Qiagen RNeasy Mini kit» («Qiagen», ÑØÀ). Ñèíòåç êîìïëåìåíòàðíîé ÄÍÊ (êÄÍÊ) ïðîâîäèëè ïðè ïîìîùè íàáîðà ðåàêòèâîâ «Promega» (ÑØÀ) íà ÄÍÊ-àìïëèôèêàòîðå («Applied Biosystems», ÑØÀ. Ïîëèìåðàçíóþ öåïíóþ ðåàêöèþ â ðåàëüíîì âðåìåíè ïðîâîäèëè íà äåòåêòèðóþùåì òåðìîöèêëåðå ÄÒ-96 («ÄÍÊ-Òåõíîëîãèÿ», Ðîññèÿ). Ïàðû ïðàéìåðîâ áûëè âçÿòû ëèáî èç ðàíåå îïóáëèêîâàííûõ ðàáîò, ëèáî ïîäîáðàíû ñïåöèàëüíî ñ ïîìîùüþ ïðîãðàììû Primer 3, íàõîäÿùåéñÿ â ñâîáîäíîì äîñòóïå â ñåòè èíòåðíåò (http://frodo.wi.mit.edu/).
Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå. Áûë îáíàðóæåí ïîâûøåííûé áàçàëü-íûé óðîâåíü ýêñïðåññèè (áåç ñòèìóëÿöèè àäåíîçèíîâûõ ðåöåïòîðîâ NECA) ó áîëüíûõ áðîíõèàëüíîé àñòìîé ÈË-6 è ÈË-8 ïî ñðàâíåíèþ ñî çäîðîâûìè äîíîðàìè. Áûëî âûÿâëåíî óâåëè÷åíèå ýêñïðåññèè ìÐÍÊ ÈË-8 ó áîëüíûõ áðîíõèàëüíîé àñòìîé ïðè èíêóáàöèè ñ NECA (ñ 9,492% (1,611-34,317% (Me(Q1-Q3)) äî 17,964% (2,011-67,342%(Me(Q1-Q3)) îò óðîâíÿ ýêñïðåññèè ð-àêòèíà, p<0,05), à òàêæå ïîâûøåíèå ýêñïðåññèè ìÐÍÊ ÈË-6 (ñ 0,197%(0,026-0,891% (Me(Q1-Q3)) äî 0,634% (0,068-1,708%(Me(Q1-Q3)) îò óðîâíÿ ýêñïðåññèè ð-àêòèíà, p<0,01) ïîä äåéñòâèåì NECA. Ïîâûøåííûå ïîêàçàòåëè ýêñïðåññèè èññëåäóåìûõ öèòîêèíîâ ó áîëüíûõ áðîíõèàëüíîé àñòìîé, ñâèäåòåëüñòâóþò î ïðîòåêàíèè õðîíè÷åñêèõ âîñïàëèòåëüíûõ ïðîöåññîâ.
Âûâîä: Ïðèíèìàÿ âî âíèìàíèå âàæíóþ ðîëü ïàðàêðèííîé ôóíêöèè ìîíîöèòîâ â ðåãóëÿöèè âîñïàëåíèÿ, íåîáõîäèìî äàëüíåéøåå èñïîëüçîâàíèå îïèñàííîãî íàìè ïîäõîäà äëÿ èçó÷åíèÿ ðîëè àäåíîçèíà è àäåíî-çèíîâûõ ðåöåïòîðîâ â ðàçëè÷íûõ ïàòîôèçèîëîãè÷åñêèõ ïðîöåññàõ.
Ñïèñîê ëèòåðàòóðû:
1. Novitskiy S.V., Ryzhov S., Zaynagetdinov R. Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function // Blood. - 2008. - Vîl. 112, ¹ 5. - P. 1822-1831
|
