Красноярский государственный университет, г.Красноярск

Эритроциты млекопитающих - высокоспециализированные безъядерные клетки, лишенные клеточных органоидов, не способные к синтезу белков [3]. Характерная черта эритроцитов -наличие мощной антиоксидантной системы, значение которой определяется особенностями функционирования этих клеток: высокой концентрацией кислорода, постоянно протекающими процессами оксигенации-деоксигенации гемоглобина, высокой скоростью образования чрезвычайно реакционноспособных свободных радикалов кислорода [2]. Ферментативная антиоксидантная система содержит ряд ферментов, в том числе глутатион^-трансферазу (^Т) и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу (Г6ФД). и Г6ФД взаимосвязаны между собой поскольку восстановленный глутатион ^SH), используемый TST поддерживается на стационарном уровне при непосредственном участии Г6ФД [5].
Ранее показано, что при старении эритроцитов происходит снижение активности и Г6ФД в основе которого может лежать изменение их кинетических свойств. В связи с этим, целью данной работы явилось изучение зависимости скорости глутатион^-трансферазной и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназной реакций от концентрации субстратов в эритроцитах разных возрастных групп в условиях нормального эритропоэза у интактных кроликов.
Объектом исследования служили эритроциты кроликов породы «Шиншилла». Разделение эритроцитов на возрастные группы осуществляли путем многократных центрифугирований клеток, взвешенных в плазме, и последовательных отборов верхней и нижней частей эритроцитарного столба [1]. Активность    и Г6ФД определяли методом Э. Бойтлера [4]. Полученные данные обрабатывались статистически с использованием t-критерия Стьюдента.
В ходе исследования было установлено, что зависимость скорости реакций, катализируемых и Г6ФД, от концентраций субстратов (1-хлор-2,4-динитробензола (ХДНБ) и гллюкозо-6-фосфата (Г6Ф) соответственно) подчиняется кинетике Михаэлиса-Ментен, причем характер зависимости не меняется при старении клеток. Расчет констант Михаэлиса показал, что как для ХДНБ, так и для Г6Ф Км увеличивается с возрастом клетки. Изучение зависимости скорости глутатион^-трансферазной и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназной реакций от концентрации кофакторов ^SH и НАДФ+, соответственно) показало подчинение гиперболическому закону у
и отклонение от кинетики Михаэлиса-Ментен у Г6ФД. При старении эритроцитов происходит увеличение Км для TSH и [S]05 для НАДФ+ у Г6ФД.
Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют о существенном изменении кинетических свойств исследованных ферментов: уменьшении сродства ферментов к субстратам и исчезновении кооперативных эффектов в отношении НАДФ+ у Г6ФД, что может иметь существенное значение в снижении активности ферментов при старении красных клеток крови.

Литература
1.    Авраамова Т.В., Титова Н.М. Руководство по большому биохимическому практикуму .¬Красноярск, 1978.- 102 с.
2.    Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме// Успехи биологической химии. - 1990. - №31. - С.180-208.
3.    Рубина Х.М. Биохимия эритроцита// Физиология системы крови. Физиология эритропоэза. - Л.: Наука, 1979.- С. 211 - 232.
4.    Beutler E. Red cell metabolism. A manual of biochemical methods. Orlando: Grune & Stration, 1990.- P.131 - 134.
5.    Tuan N.L. Age-related increase in erythrocyte oxidant sensitivity// Mechanisms of ageing and development. - 1982. - №20. - P.25 - 32.