Эта работа опубликована в сборнике статей по материалам 70-й Юбилейной итоговой научной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова (г. Томск, 16-18 мая 2011 г.), под ред. В. В. Новицкого, Л. М. Огородовой. − Томск: Сибирский государственный медицинский университет, 2011. − 430 с.

 

Скачать сборник (формат MS Word, 7,3 мб)

Посмотреть основную информацию о сборнике, обложку и т.д.

 

Актуальность: ежегодно в России, как и во всем мире, регистрируется значительное количество вспышек энтеровирусной инфекции. Так, например, только в 2010 году вспышка энтеровирусной инфекции зарегистрирована в Ачинске (Красноярский край, апрель), случаи заболевания полиомиелитом  в Москве и Хабаровском крае в апреле-мае, вспышка острой кишечной инфекции энтеровирусной этиологии в Сахалинской области в августе 2010 г.
Особенность энтеровирусов состоит в том, что один и тот же тип энтеровируса может вызывать различные по симптоматике заболевания. И, наоборот, при вспышке одного заболевания нередко выделяют штаммы энтеровирусов разных серотипов [1]. В последние годы стала намного яснее роль энтеровирусов в возникновении инфекций, а также в формировании соматической патологии. Это заставляет пересмотреть прежний взгляд на них, как на малозначащие патогенны [2].
Актуальной задачей является своевременное выявление и диагностика инфекции, контроль над ее распространением. Для решения этих задач наиболее целесообразным является применение методов молекулярной диагностики, которые позволяют в кратчайшие сроки выявить возбудителя заболеваний и провести молекулярно-эпидемиологическое расследование.

Цель: изучение генетического разнообразия энтеровирусов на основе сравнения 5’UTR и VP1 регионов вирусной РНК.

Материалы и методы: в качестве материала были взяты образцы спинномозговой жидкости собранные от пациентов с подозрением на серозный менингит и энтеровирусную инфекцию, поступивших в МБУЗ ГИКБ 1 г. Новосибирск в период с 2008-2010гг, 107 мужчин, средний возраст которых составил 27,3 года, и 61 женщина, средний возраст – 29,7. Выделение РНК/ДНК из исследуемого материала проводили с использованием набора реагентов «РИБО-сорб» (ЦНИИЭ, Россия); реакцию обратной транскрипции – с использованием набора реагентов «РЕВЕРТА-L» (ЦНИИЭ, Россия). Образцы были исследованы методом ПЦР со специфическими праймерами к VP1 региону энтеровирусов 224/292/222 [Nix W.A. et al] и 5’UTR региону энтеровирусов L-EV2/L-EV3/L-EV4 [Nix W.A. et al]. Детекцию продуктов амплификации проводили методом электрофореза в 2,5% агарозном геле. Гель рассматривали на УФ трансиллюминаторе TCP-20 MC (Wilber Lourmat, Франция) и фотографировали с использованием системы видеодокументирования КРС-650 ВН (KT&C, Южная Корея).  Для выделения продуктов амплификации из агарозного геля использовали набор Wizard SV Gel (Promega, USA). Cycle-Pure Kit Spin («Omegabiotek», США) и секвенированы с использованием праймера 292 [Nix W.A. et al]. Определение нуклеотидных последовательностей проводилось на автоматическом секвенаторе ABI Prism 3130xl. Нуклеотидные последовательности анализировались с помощью программы Lasergene 7 и сравнивались с нуклеотидными последовательностями энтеровирусов из базы данных Genbank.

Результаты: после анализа 168 образцов СМЖ, было выявлено 25 положительных (15%) при постановке ПЦР на энтеровирусную инфекцию с праймерами на 5’-UTR регион. Большая часть заболевших была среди мужчин – 13 чел (52%). После проведения ПЦР с праймерами на VP1 регион, положительные результаты были подтверждены у 14 пациентов (8,3%). Всего, на данный момент, отсеквенировано 15 образцов ( по 5’-UTR и VP1 регионам), что составило 9% от общего числа проб и 60% среди положительных результатов, полученных после проведения ПЦР на выявление присутствия энтеровирусной  инфекции в клиническом образце.

Выводы: после определения нуклеотидных последовательностей амплификационных фрагментов ДНК в положительных образцах преимущественно были идентифицированы энтеровирусы: ECHO30 и CoxB5.