|
НИИ биохимии СО РАМН (г. Новосибирск)
Эта работа опубликована в сборнике "Науки о человеке": материалы IX
конгресса молодых ученых и специалистов (Томск, 28-29 мая 2010 г) / Под ред. Л.М.
Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2010. – 113 с.
Посмотреть обложку сборника
Скачать сборник целиком
Введение. В последние годы значительно возрос интерес исследователей к свободно циркулирующим нуклеиновым кислотам. Показано присутствие свободных нуклеиновых кислот в плазме крови здоровых людей, значительное увеличение их содержания при патологиях различного генеза [1,2]. Внеклеточные нуклеиновые кислоты связываются в организме с белками крови (иммуноглобулинами, альбумином), а также с её форменными элементами за счет формирования комплексов с поверхностными белками клетки [3]. Можно предположить, что свободные нуклеиновые кислоты могут циркулировать в плазме крови и в составе липопротеинов, которые, как известно, выступают в качестве транспортной формы многих соединений различной химической природы [4].
Целью настоящего исследования явилось изучение содержания внеклеточной ДНК (вкДНК) в составе липопротеиновых фракций плазмы крови.
Материал и методы. Липопротеины выделяли из плазмы крови здоровых половозрелых крыс обоего пола массой 200-250 г методом изоплотностного ультрацентрифугирования в растворах KBr в присутствии 3 мМ ЭДТА-№2 на центрифуге «Optima L-90K, Beckman Coulter» с использованием углового ротора 70.1 Ti при 105000 g в течение 24 ч. Получали три основные фракции липопротеинов: ЛПОНП (0,94<d<1,006 г/мл), ЛПНП (1,006<d<1,063 г/мл) и ЛПВП (1,063<d<1,21 г/мл). Содержание вкДНК в липопротеиновых фракциях определяли методом детекции их комплексов с флуоресцентным красителем Hoechst 33258 («Fluka») [5] на спектрофлуориметре «Shimadzu» RF-5301 PC. Результаты и обсуждение. Результаты анализа интенсивности флуоресценции плазмы крови и различных фракций липопротеинов представлены в таблице.
|
Таблица 1.
Флуоресценция плазмы крови и ее липопротеиновых фракций с использованием в качестве
флуорофора Hoechst 33258
|
| Исследуемый
материал |
Интенсивность флуоресценции,
у.ед./мл |
| Плазма крови |
1953,2 |
| ЛПВП |
1149,6 |
| ЛПНП |
277,6 |
| ЛПОНП |
310 |
| Инфранатант |
1550,8 |
Как видно из таблицы, среди выделенных фракций липопротеинов наибольшей интенсивностью свечения, обусловленного присутствием вкДНК, обладают ЛПВП. Интенсивность флуоресценции в этом случае превосходит аналогичный показатель для ЛПНП и ЛПОНП в 4 раза и при равных объемах исследуемого материала является соразмерной величине флуоресценции инфранатанта - плазмы крови, свободной от липопротеинов. Количество выделенных нами липопротеинов от общего объема используемой плазмы крови составило 10-1 5%. Учитывая данный факт, мы рассчитали процентное содержание вкДНК в составе липопротеиновых частиц от общего количества свободно циркулирующей ДНК в плазме крови. Оказалось, что на долю ЛПВП приходится около 8% от общего пула вкДНК, а в составе ЛПНП и ЛПОНП циркулирует примерно по 2% свободной ДНК.
Заключение. Результаты проведенного экспериментального исследования позволяют сделать вывод о том, что в отсутствии каких-либо патологий около 12% внеклеточной ДНК в плазме крови циркулирует в составе липопротеиновых частиц. При этом основной транспортной формой являются липо-протеины высокой плотности.
Список литературы:
1. Swaminathan R., Butt A.N. Circulating nucleic acids in plasma and serum // Ann. N.Y. Acad. Sci. -2006. - V.1075. - P. 1-9.
2. Вейко Н.Н., Булычева Н.В., Рогинко О.А. и др. Фрагменты транскрибируемой области рибосомного повтора в составе внеклеточной ДНК - маркёр гибели клеток организма // Биомед. химия. - 2008. - Т.54, №1. - С. 78-92.
3. Vlassov V.V., Laktionov P.P., Rykova E.Y. Extracellular nucleic acids // BioEssays. - 2007. - V.29. - P. 654-667.
4. Поляков Л.М., Часовских М.И., Панин Л.Е. Липопротеины - уникальная транспортная система для ксенобиотиков и биологически активных веществ // Успехи современ. биол. - 1992. -Т.112, №4. - С. 601-608.
5. Morozkin E.S., Laktionov P.P., Rykova E.Y., and Vlassov V.V. Fluorometric quantification of RNA and DNA in solutions containing both nucleic acids // Anal. Biochem. - 2003. - V.322. - P. 48-50.
|
