Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН, Новосибирск

Эта работа опубликована в сборнике научных трудов «Естествознание и гуманизм» (2006 год, Том 3, выпуск 4), под редакцией проф., д.б.н. Ильинских Н.Н. Посмотреть титульный лист сборника

Повсеместное распространение гранулематозных заболеваний, наблюдающееся в настоящее время, индуцируется различными этиологическими факторами [1; 4]. Актуальность изучения особенностей формирования и функционирования многоядерных макрофагов не оставляет сомнения, поскольку именно эти клетки играют важную роль в образовании и развитии очагов хронического воспаления, а генетически обусловленные различия реагирования макрофагов во многом определяют характер иммунного ответа [2]. Изучение этих процессов позволило бы учитывать особенности функционирования полинуклеарных макрофагов при коррекции гранулематозных заболеваний. Идентификация клеток с микроядрами является информативным признаком воспалительных заболеваний [3]. Процессы, лежащие в основе образования микроядер свидетельствуют о снижении жизнеспособности таких клеток, что является маркером не стабильности их функционирования, активизации процессов воспаления [3] и апоптоза [5]. Количественный состав очагов хронического воспаления играет важную роль, определяющую адекватность иммунного ответа [2].
Цель исследования заключалась в изучении влияния концентрации посадки клеток на поведение полинуклеарных фагоцитов в культурах перитонеальных макрофагов. В связи с этим задачи исследования включали изучение активности формирования полинуклеарных макрофагов и образования в них микроядер при инкубации in vitro в зависимости от концентрации посадки клеток и их генетической принадлежности.
Клетки выделяли из брюшной полости мышей линий C57Bl/6 и CBA. Концентрация посадки в контрольных и в экспериментальных группах составляла 1000 тыс. и 500 тыс. перитонеальных клеток в 1 мл взвеси, соответственно. Подсчитывали количество многоядерных фагоцитов. Находили численность клеток, имевших в своем составе микроядра. Результаты оценивали на 2, 24, 48 и 72 часа инкубации. Контролем служили культуры, инкубируемые в течение 2 часов.
Общая тенденция изменения численности многоядерных макрофагов в куль¬турах перитоне¬альных клеток заключалась в том, что происходило увеличение содержания таких фагоцитов через 24 часа¬ инкубации. Был отмечен волнообразный характер изменения численности полинуклеаров во всех группах, который проявлялся снижением численности клеток на 48 часов экспозиции и возрастанием их количества к 72 часам. Логично предположить, что апоптоз являлся возможной причиной снижения числа полинуклеаров ко вторым суткам инкубации, что подтверждается возрастанием концентрации апоптозных телец в этот период. При дальнейшем увеличении времени экспозиции возрастание численности полинуклеаров возможно объяснить активизацией процессов эндомитоза и слияния клеток. Эта тенденция прослеживалась во всех группах культур не зависимо от концентрации посадки клеток и их генетической принадлежности.
Наблюдали отсутствие достоверных межгрупповых различий в числе макрофагов с микроядрами в отношении показателей группы культур СВА и C57Bl/6 в высокой концентрации посадки клеток на все сроки проведения эксперимента. Отмечали преобладание клеток с микроядрами крупных размеров не зависимо от сроков экспозиции. Снижение концентрации посадки макрофагов в группе культур СВА в 2 раза приводило к увеличению числа клеток с микроядрами в 1,8 раза через 24 часа инкубации. В этот период количество клеток с крупными микроядрами составляло 64,7 % от общего количества макрофагов с микроядрами. На указанный срок наблюдения отмечали повышение показателя содержания фагоцитов с микроядрами до 42,5 % от общего числа полинуклеаров. В группе культур C57Bl/6 подобная тенденция не наблюдалась, что свидетельствует об устойчивости полинуклеаров данной линии к изменению концентрации посадки клеток в отношении формирования микроядер на указанные сроки экспозиции.
Таким образом, особенности формиро¬вания многоядерных макрофагов в культу¬рах перитонеальных клеток на отмеченные сроки инкубации определялись, вероятно, активностью протекания процессов апоптоза, эндомитоза и слияния клеток. Было показано, что в группах культур с высокой концентрацией посадки клеток количество макрофагов с микроядрами не изменялось на все сроки инкубации не зависимо от генетической принадлежности клеток. Определена генетически детерминированная зависимость частоты проявления микроядер в макрофагах в ответ на снижение концентрации посадки клеток in vitro. Вероятно, данное явление обусловлено снижением концентрации регуляторных факторов, вырабатываемых макрофагами.  
Выявленные различия в динамике формиро¬вания микроядер в макрофагах на отмеченные сроки инкубации были, вероятно, обусловлены изменением концентрации посадки клеток. Полученные результаты могут быть использованы при моделировании продуктивной фазы воспалительного процесса с различным уровнем выраженности неблагоприятного явления образования микроядер у иммунокомпетентных  клеток в очаге воспаления.

Список литературы:
1. Васильев А.В., Гришко А.Н. Аспекты эпидемиологии // Внелёгочный туберкулёз. СПб., 2000. – С.11-33.
2. Ильин Д.А., Архипов С.А Сравнительная оценка функциональной и интегративной активности макрофагов и лаброцитов в генотипически различных культурах перитонеальных клеток // VII всероссийская конференция по патологии клетки. Москва, 2005. – С. 56 – 57.
3. Калаев В.Н., Буторина А.К., Кудрявцева О.Л. Частота встречаемости клеток с микроядрами в плоском эпителии, полученном из соскобов с шейки матки женщин детородного возраста при различных физиологических состояниях, в норме и при воспалении // Естествознание и гуманизм - 2006. - Т. 3. - № 2. - С. 22 - 23.
4. Alcais A., Sanchez F.O., Thuc N.V. Granulomatous reaction to intradermal injection of lepromin (Mitsuda reaction)is linked to the human NRAMP1 gene in Vietnamese leprosy sibships. // J. Infect. Dis. – 2000. – V. 181. – № 1. – P. 302 – 308.
5. Voitovich A.M., Afonin V.Y., Krupnova E.V., Trusova V.D., Dromashko E.S. The level of aberrant cells in various tissues of bank vole depending on doses and radionuclide balance in organism // Tsitol. Genet. - 2003. - V. 37. - № 4. - Р.10-15.