Гипертрофическая кардиомиопатия - распространенное наследственное заболевание миокарда с аутосомно-доминантным типом наследования, которое характеризуется гипертрофией миокарда, чаще асимметричного характера с преимущественным вовлечением левого желудочка и межжелудочковой перегородки. Известно, что большинство мутаций, вызывающих гипертрофическую кардиомиопатию, локализовано в генах, кодирующих белки сократительного аппарата клетки. В настоящее время известно около 400 мутаций, ассоциированных с гипертрофической кардиомиопатией [1]. Для этого заболевания характерна неполная экспрессивность и пенетрантность мутаций, увеличивающаяся с возрастом. Диапазон клинических проявлений мутаций очень широк - от бессимптомного течения до тяжелых форм. Значительная часть мутаций локализована в гене тяжелой цепи Р-миозина (MYH7). Данные об отдельных мутациях, являющихся причиной заболевания, могут использоваться в ДНК-диагностике и иметь важное прогностическое значение.

В исследование было включено 23 человека с диагнозом гипертрофическая кардиомиопа-тия. Пациенты были направлены на генодиагностику из НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН (17 человек), а также из Медико-генетического центра, г.Москва (6 чел.).

 

Материалом для исследования являлась геномная ДНК, выделенная из лейкоцитов периферической крови методом фенол-хлороформной экстракции. Поиск мутаций проводили в экзонах 4 - 40 гена тяжелой цепи Р-миозина с помощью SSCP-анализа (анализа полиморфизма конформации од-нонитевых ДНК). Фрагменты ДНК, содержащие исследуемые экзоны, были амплифицирова-ны с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Денатурированные ПЦР-продукты подвергали электрофоретическому разделению в градиентном неденатурирующем полиак-риламидном геле при двух температурных режимах: 12°С и 24°С. Для визуализации результатов применяли окраску геля серебром. ПЦР-продукты с измененной подвижностью секве-нировали на автоматическом ДНК-анализаторе, как с прямого, так и с обратного праймера. В случае идентификации предполагаемой мутации проводили исследование контрольной выборки методом рестрикционного анализа ПЦР-продуктов. Для генотипирования замен Ala729Pro и Arg403Trp использовали рестриктазы HaeIII и BssTlI, соответственно.
В результате исследования было выявлено две мутации в гене MYH7. У одного пробанда была идентифицирована миссенс-мутация в 20 экзоне гена тяжелой цепи Р-миозина в гетерозиготном состоянии, ведущая к замене аланина на пролин (Ala729Pro). Мутация локализована в конвертере - участке миозина, играющем важную роль в конформационных изменениях молекулы миозина во время сократительного цикла. Мутация найдена у пациента 23 лет с тяжелой формой гипертрофической кардиомиопатии с признаками обструкции выходного тракта левого желудочка. Толщина межжелудочковой перегородки 33 мм (норма до 12 мм), индекс массы миокарда левого желудочка 205,6 г/м2 (норма до 134 г/м2). Родственники пациента обследованы не были.

Вторая мутация - Arg403Trp - была выявлена у пациентки в возрасте 54 лет с асимметричной гипертрофией миокарда (толщина межжелудочковой перегородки 20 мм, задней стенки левого желудочка - 9 мм, масса миокарда 221 г). В данном случае выявлен семейный характер заболевания, причем в родословной описан случай внезапной смерти. Кодон 403 (13 экзон) входит в сайт связывания актина и является «горячей точкой» мутаций в данном гене: в нем известно три различных мутации, и все они влияют на заряд молекулы белка, заменяя положительно заряженную аминокислоту аргинин.

 

Ранее мутация Ala729Pro была найдена у двух неродственных пациенток из российской популяции, у которых отмечалось раннее начало заболевания и высокая степень гипертрофии [2]. В исследованиях, проведенных в других странах, данная мутация не была описана. Это может свидетельствовать о том, что мутация Ala729Pro специфична для населения России.
Мутация Arg403Trp напротив, была описана неоднократно в популяциях различного этнического происхождения, и показано ее независимое происхождение в разных родословных
[3].
Совместно с мутациями, выявленными ранее у томских больных [1], оценка общей частоты мутаций в гене тяжелой цепи Р-миозина (MYH7) составила 14% (5 мутаций у 35 больных), что соответствует среднемировой частоте мутаций этого гена.

 

Результаты исследования позволяют рассматривать ген MYH7 в качестве первого кандидата для поиска мутаций при тяжелых формах гипертрофической кардиомиопатии.