Labirint.ru - ваш проводник по лабиринту книг
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -ГлавнаяОб АльманахеРецензентыАрхив телеконференций- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Сборники АльманахаДругие сборникиНаучные труды- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Образец оформленияИнформационное письмоО проведении телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Материалы I телеконференцииМатериалы II телеконференцииМатериалы III телеконференцииМатериалы IV телеконференцииМатериалы V телеконференцииМатериалы VI телеконференцииМатериалы VII телеконференцииМатериалы VIII телеконференцииМатериалы IX телеконференцииМатериалы Х телеконференцииМатериалы XI телеконференцииМатериалы XII телеконференцииМатериалы XIII телеконференцииУчастники XIII телеконференцииМатериалы XIV телеконференцииУчастники XIV телеконференцииЮбилейная XV Телеконференция Октябрь 2014Участники Юбилейной XV Телеконференции- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Конференция СМПиЧ-2015Участники СМПиЧ-2015- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -КонтактыФорум
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -Поиск по сайту

Последние статьи

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ ВЛИЯНИЕ ВИРУСНОИ ИНФЕКЦИИ КЛЕЩЕВЫМ ЭНЦЕФАЛИТОМ НА ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ БОЛЕЗНИ РОЛЬ ГЕНА GSTM1 В ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ КЛЕТОК КРОВИ и ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЯХ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ГРАНУЛОЦИТАРНОМ АНАПЛАЗМОЗЕ ЧЕЛОВЕКА ГЕНЕТИЧЕСКИИ ПОЛИМОРФИЗМ И ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ Т- ЛИМФОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ АРТРИТОМ, АССОЦИИРОВАННЫМ В КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ КЛИНИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ИКСОДОВОГО ВЕСЕННЕ-ЛЕТНЕГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫИ СТАТУС И АДАПТИВНЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗМА ПЕРВОКЛАССНИКОВ ШКОЛ г. НЕФТЕЮГАНСКА ТЮМЕНСКОИ ОБЛАСТИ Материалы трудов участников 14-ой международной выездной конференции русскоязычных ученых в Китае (Sanya, Haynan Island) "Современный мир, природа и человек", том 8, №3. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И АПОПТОТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ В ПРОЦЕССЕ СТИМУЛЯЦИИ АНТИГЕНОМ БОРРЕЛИИ THE ANALYSIS OF SOME INDICES OF IMMUNERESPONSE, DNA REPAIR, AND MICRONUCLEI CONTENT IN CELLS FROM TICK-BORNE ENCEPHALITIS PATIENTS КОМПЬЮТЕРНЫИ СПЕКТРАЛЬНЫИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИИ АНАЛИЗ МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ИКСОДОВЫМ КЛЕЩЕВЫМ БОРРЕЛИОЗОМ И ГРАНУЛОЦИТАРНЫМ ЭРЛИХИОЗОМ ЧЕЛОВЕКА

Полезная информация

 
 

ОСОБЕННОСТИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО МЕТАБОЛИЗМА СТРОМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ IN VITRO В ДИНАМИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ

Печать E-mail
08.01.2011 г.

ГОУ ВПО СибГМУ Росздрава (г. Томск)

Эта работа опубликована в сборнике "Науки  о  человеке":  материалы IX конгресса  молодых  ученых  и  специалистов (Томск,  28-29  мая  2010  г) / Под  ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. – Томск: СибГМУ. – 2010. – 113 с.

Посмотреть обложку сборника

Скачать сборник целиком 

Известно, что любой патологический процесс, в том числе и внутриглазная пролиферация, первоначально реализуется на клеточном уровне, сопровождаясь изменениями ультраструктуры и метаболизма клеток. Важную роль при этом играют факторы микроокружения. Возможно, одним из подобных локальных факторов является направленное движение внутриглазной жидкости в полости глазного яблока, создаваемое градиентом давления.

Цель работы - исследование внутриклеточного метаболизма стромальных стволовых клеток человека в условиях направленного движения жидкости, сходного с движением жидкости в полости глаза. Материал и методы. Исследование проводили с помощью оригинального устройства, позволяющего in vitro моделировать движение питательной среды, сходное с движением жидкости в полости глазного яблока. Устройство представляет собой замкнутую систему с камерой, содержащей полупроницаемый фильтр. Систему предварительно заполняли питательной средой IMDM (ДМЕМ в модификации Iscove), объемом 200 мл, к которой добавляли 4% р-р гентамицина (0,02 мл на каждые 10 мл питательной среды). В качестве объекта исследования была выбрана культура стромальных стволовых клеток человека после 3-4 пассажей в концентрации 5-104 клеток/мл. Клеточный материал вводили в камеру и помещали на фильтр. Камеру соединяли с емкостью через роликовый насос, благодаря его работе создавалось равномерное направленное движение питательной среды со скоростью 2,1 -2,4 мм3/мин. Клеточную культуру инкубировали при постоянном движении жидкой питательной среды. В качестве контроля изучаемые клетки культивировали на полупроницаемом фильтре, помещенном в чашку Петри с необходимой питательной средой, при строгом соблюдении температурного режима (37°С), содержания С02 (5 - 7%) и уровня влажности (100%). Длительность проточного культивирования составила 48 часов. Клетки, культивируемые в стандартных условиях, исследовали через 24 и 48 часов. По окончании экспериментов клеточный материал, находящийся на полупроницаемом фильтре, исследовали с помощью цитохимических методов. Обнаруживали активность щелочной фосфатазы и а-нафтилацетатэстеразы.

Результаты.
При культивировании культуры стромальных стволовых клеток человека в стационарных условиях на протяжении всего периода наблюдений (48 ч) цитохимически в клетках отмечалась активность а-нафтилацетатэстеразы (табл. 1). При этом с увеличением срока исследования незначительно повышалась плотность распределения клеток на искусственной поверхности, их оптическая плотность, однако, средняя площадь окраски на а-нафтилацетатэстеразу статистически значимо уменьшалась и соответствовала диаметру клеток в пределах 10 мкм. Щелочная фосфатаза в культивируемых клетках в стационарных условиях не выявлялась. В проточной культуре количество клеток на фильтрах, окрашивающихся на а-нафтилацетатэстеразу, оказалось существенно сниженным (практически в 10 раз) по сравнению со стандартным культивированием.
 Таблица 1
Цитохимическая активность стромальных стволовых клеток человека при различных способах и
времени краткосрочного культивирования в минимальной питательной среде, Х (у.е.о.п.), p
Сроки исследования, сутки Метод культивированияклеток Изучаемый фермент, n=10
НЭ ЩФ
1 Стационарный 22,56 0
Проточный 19,34* 9,28**
2 Стационарный 26,98 0
Проточный 20,97* 14,67**

Примечание. * - уровень статистической значимости различий p > 0,05, ** - уровень статистической значимости различий p < 0,005; n - число просчитанных полей зрения на фильтре. Для каждой группы использовали 3 фильтра. НЭ - а-нафтилацетатэстераза; ЩФ - щелочная фосфатаза.

Кроме того, ко 2-м суткам эксперимента статистически значимо повышалось восприятие красителя для щелочной фосфатазы (табл.1). Позитивно окрашивающиеся клетки имели большую, по сравнению с окраской на а-нафтилацетатэстеразу, площадь, неправильную форму, располагались, как правило, в углублениях поверхности.
Обсуждение. Известно, что все макромолекулы поступают в клетку путем эндоцитоза. При этом, чем выше скорость направленного движения жидкости через клетку, тем интенсивнее происходит процесс эндоцитоза и тем, соответственно, большее количество веществ поступает внутрь клетки. Это, в свою очередь, определяет степень ее метаболической активности. Кроме того, на основании показателей внутриклеточного обмена можно судить о состоянии клеток, направлении и интенсивности их деятельности. Так, каждая стадия дифференцировки неразрывно связана с активацией дополнительных ферментных систем, налаживанием новых механизмов биосинтеза. Данные цитохимических исследований стромальных стволовых клеток человека, культивируемых в проточных условиях, по сравнению с показателями в статических условиях свидетельствуют о повышении активности как специфических (щелочная фосфатаза), так и неспецифических (а-нафтилацетатэстеразы) ферментных систем, что указывает на ускорение процесса дифференцировки клеток. Подтверждением этому служит и более существенное по сравнению с контролем уменьшение площади клеточной поверхности культивируемых в проточных условиях клеток как отражение степени их созревания.

Выводы.  Таким образом, в нашем эксперименте доказана возможность ускорения дифференцировки и созревания стромальных стволовых клеток человека посредством биомеханического воздействия направленного потока жидкости. Подобная технология может иметь как фундаментальное значение, связанное с изучением механизмов модификации морфофункциональных свойств клеток, так и практический выход, позволяющий наращивать массу дифференцированных клеток посредством технологии "биореактор in vitro".

 

Добавить комментарий

Правила! Запрещается ругаться матом, оскорблять участников/авторов, спамить, давать рекламу.



Защитный код
Обновить

« Пред.   След. »
 
 
Альманах Научных Открытий. Все права защищены.
Copyright (c) 2008-2024.
Копирование материалов возможно только при наличии активной ссылки на наш сайт.

Warning: require_once(/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php) [function.require-once]: failed to open stream: Нет такого файла или каталога in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99

Fatal error: require_once() [function.require]: Failed opening required '/home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/css/llm.php' (include_path='.:/usr/local/zend-5.2/share/pear') in /home/users/z/zverkoff/domains/tele-conf.ru/templates/bioinformatix/index.php on line 99